1.4-bio-ingénerie des protéines Flashcards
c’est quoi le but de production de protéines recombinantes
produire des grandes qtés de protéines recombinantes à partir d’un gène cloné chez un organisme hôte
4 facteurs qui peuvent affecter la production de protéines recombinantes
1) transcription
2) traduction
3) stabilité de la protéine
4) sécrétion (de la protéine)
pourquoi une protéine humaine ne sera pas fonctionnelle chez le système bactérien d’E.coli
car elle ne peut pas subir des modifications post-traductionnelles pour la rendre fonctionnelle (seulement chez les eucaryotes)
que peut se passer avec le plasmide si on utilise un promoteur trop fort?
l’organisme va avoir besoin d’utiliser plus d’énergie pour produire la protéine donc diminution du taux de croissance ou même perte du plasmide pour compenser pour les dépenses d’énergie
quel type de promoteur est à favoriser et pourquoi
promoteur fort INDUCTIBLE (croissance d’E coli en premier et ensuite induction de la transcription chez l’E.coli qui a déjà poussé)
c’est quoi les 2 types de contrôles pour la régulation de la transcription
contrôle négatif et positif
c’est quoi le contrôle négatif pour la régulation de la transcription
la transcription se produit toujours sauf quand il y a la présence d’un répresseur
c’est quoi le contrôle positif pour la régulation de la transcription
la transcription peut seulement avoir lieu si une molécule activatrice est présente pour stimuler la transcription de l’ARNm
Donne un exemple d’un système de contrôle positif pour la transcription et comment il fonctionne
système avec l’opéron Lac parce qu’en présence de lactose/IPTG/x-gal, la transcription est activée. le lactose (ou analogue) va lier la molécule represseure et ainsi activer la transcription
3 façons d’augmenter l’efficacité de la traduction de la protéine recombinante
1) avoir un séquence de liaison au ribosome
2) optimiser les codons utilisés (modifier codon)
3) utiliser un plasmide d’ARNt rares
Comment les plasmides d’ARNt peuvent augmenter l’efficacité de la traduction d’une protéine recombinante (3)
1) ils optimisent la fréquence d’utilisation du codon rare (plasmide d’ARNt rare augmente la disponibilité de l’ARNt spécifique)
2) améliorent la vitesse de la traduction en fournissant des acides aminés nécessaires pour les codons rares
3) réduit les erreurs de traduction car on fournit l’ARNt rare nécessaire (améliore qualité de protéine)
2 façons d’améliorer la stabilité protéique
1) faciliter le repliement protéique
2) diminuer la dégradation protéique
2 manières de faciliter le repliement protéique
1) utiliser les basses températures
2) additionner les gènes qui codent pour les chaperons
2 manières de diminuer la dégradation protéique
1) ajouter les AA spécifiques à l’extrémité N-terminale pour diminuer la dégradation
2) exprimer une protéine de fusion
comment augmenter la sécrétion protéique de la protéine dans le périplasme
en ajoutant un peptide signal bactérien à l’extrémité N-terminale
2 avantages pour l’augmentation de la sécrétion protéique
1) purification facilitée pour la protéine
2) Réduction de la dégradation protéique
Comment faciliter la purification de la protéine
en ajoutant un tag (étiquette) d’affinité
comment enlever le tag d’affinité après la purification protéique
en ajoutant un site de clivage protéolytique par clonage
donne 4 exemples de modifications post-traductionnels
1) méthylation
2) phosphorylation
3) acétylation
4) glycosylation
7 composantes d’un vecteur d’expression eucaryotique et leurs rôles
p=promoteur eucaryote
MCS=site de clonage multiple
t=séquence de terminaison pour la transcription eucaryotique
ESM=marqueuer de sélection eucaryotique
Ori euk= origine de réplication eucaryote
Ori E= origine de réplication dans E.coli
Ampr=marqueur de sélection chez l’E.coli
Comment la protéine est sécrétée chez les eucaryotes
la séquence de signal de l’ARNm dans le ribosome est reconnue par un SRP (signal recognition particle) et va rentrer dans la celulle pour être traduite.
Elle forme un vesicule pour pouvoir sortir de la cellule
où se passe le repliement protéique et par quels 2 molécules
dans RE et grace aux PDI (isomérase disulfide des protéines) et BiP (chaperones moléculaires)
c’est quoi le baculovirus
virus d’ADN db qui infecte les arthopodes
quelles sont les 2 formes du baculovirus
1) forme budded
2)forme occluded
