12.2 Enzymes de restriction et clonage moléculaire

Question 1

C’est quoi l’ADN recombinant (ADNr)?

Answer 1

Une molécule d’ADN artificiel formée par la liaison de séquences d’ADN d’organismes différents.

Question 2

La technique de recombinaison d’ADN permet quoi?

Answer 2

Étudier l’expression d’un gène, pour produire des protéines pour le traitement d’une maladie génétique, pour des vaccins ou à des fins économiques et scientifiques.

Question 3

Qu’est-ce que ça veut dire le terme clonage moléculaire?

Answer 3

Les méthodes utilisées pour créer de l’ADN recombinant.

Question 4

C’est quoi un plasmide?

Answer 4

ADN double brin, circulaire et capable de réplication autonome. Leur taille varie de 1kb à 200-300 kb

Question 5

Que contiennent les plasmides?

Answer 5

Des gènes codants souvent pour des protéines qui donnent un ou des avantages à la cellule hôte.

Question 6

Quels sont des exemples des avantages qu’apportent des gènes codants dans les plasmides?

Answer 6

• Résistance aux antibiotiques
• Résistance aux métaux lourds
• Dégradation de composés aromatiques

Question 7

Pourquoi est-ce que les plasmides sont des bons vecteurs de clonage chez les bactéries?

Answer 7

Ils se multiplient en nombre de copies important et qu’ils sont aisément purifiables.

Question 8

Que permettent les marqueurs de sélection (gènes de résistance aux antibiotiques)?

Answer 8

Ils permettent l’identification des bactéries recombinantes (transformées) qui les portent.

Question 9

Qu’est-ce qu’on utilise pour insérer des fragments d’ADN dans un vecteur plasmique?

Answer 9

Des enzymes de restriction

Question 10

Que font les enzymes de restriction?

Answer 10

Elles coupent l’ADN à des séquences spécifiques. Elles protègent les bactéries contre les phages.

Question 11

Que permet la spécificité des enzymes de restriction?

Answer 11

D’utiliser ces enzymes dans le génie génétique

Question 12

C’est quoi le site de restriction dans l’ADN?

Answer 12

Le site de reconnaissance pour un enzyme de restriction. Ces sites varient entre 4 et 12 nucléotides.

Question 13

Quelle est la particularité des sites de restriction dans l’ADN?

Answer 13

Le site de restriction est un palindrome.

Question 14

De quelle structure sont les enzymes de restriction?

Answer 14

Elles sont des protéines homodimériques et chaque sous-unité reconnait l’un des deux brins de l’ADN.

Question 15

Comment s’appelle l’enzyme qui est capable de lier de façon covalente deux molécules d’ADN afin d’en générer une seule?

Answer 15

Ligase

Question 16

Que fait la ligase?

Answer 16

Elle catalyse la liaison entre les résidus adjacents d’une coupure simple brin sur un substrat double brin et la jonction des cassures double brin.

Question 17

Qui sont utilisés pour construire de banques d’ADN?

Answer 17

Les BACs (Bacterial Artificial Chromosomes)
Les phages
Les cosmides
Les YAC

Question 18

Décrit les BACs.

Answer 18

Ils sont construits à partir du plasmide F à cause de ses propriétés intéressantes. Il ne contient qu’une petite fraction du plasmide F, et comme les vecteurs plasmidiques, il possède un polylinker, une origine de réplication et rep E qui sont nécessaires à la réplication, des régulateurs de la réplicaition et sa taille est de 6.5kb.

Question 19

C’est quoi un polylinker?

Answer 19

Un gène de résistance à un antibiotique comme marqueur de séléction.

Question 20

Qu’est-ce qu’on obtient après les réactions de ligation dans une expérience de clonage?

Answer 20

Un mélange de molécules recombinantes et non recombinantes (les vecteurs originaux).

Question 21

Quel est le clé du clonage?

Answer 21

D’introduire des molécules recombinantes et non recombinantes dans des bactéries par transformation afin de les amplifier et ensuite purifier.