12 AS (2) Flashcards by Amira Amira

Problème de production de protéines recombinantes chez mammifères?

Croissance cellulaire + lente
cultures peuvent être contaminées par bactéries ou champignon
peuvent être contaminés par virus qui infectent humains
-besoin de cellules CHO provenant d’ovaires de souris chinoises

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Quand est-ce que le premier enzyme OGM a été produit

1988 par NOVO, produit l’enzyme lipolase pour la lessive

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Que veut dire GRAS

Generally Recognized as Safe

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Grâce à quoi est fait le fromage

Chymosine recombinante qui est exprimée chez les organismes GRAS

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Quand est-ce que la FDA a approuvé la chymosine recombinante

1990

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Qu’est-ce qu’un OGM

microorganisme/plante/animal dont le patrimoine génétique a été modifié par génie génétique pour attribuer/enlever des traits désirables/indésirables

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Y’a-t-il eu un brevet pour les OGM et comment ?

Diamond vs Chakrabarty
Chakrabarty modifie pseudomas pour avoir un métabolisme d’huile.

Pseudomas modifié pouvait métaboliser 66% des hydrocarbures d’un déversement de pétrole

Chakrabarty voulait brevet, demande a dit non, Chakrabarty a fait appel, cour des douanes et brevets a dit oui, Diamond voulait pas, donc c’est allé jusqu’en cour suprême qui a dit oui

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Quelle bactérie est utilisé pour produire des plantes transgéniques
Quelle maladie provoque-t-elle?

Agrobacterium tumefaciens
-provoque maladie appelée galle du colet, au cours de laquelle la plante infectée produit des excroissances incontrolée
-Plasmide Ti est responsable de la formation de tumeur
-l’ADN d’intéret est cloné dans le plasmide Ti
-Plasmide Ti est inséré dans la plante à l’aide de la bactérie qui le porte

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Que fait l’usine de vaccins medicago

Utilise des plantes transgéniques pour produire des protéines recombinants, dont les vaccins

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Quelle est le fonctionnement de la pomme arctic

Agrobactérium a un plasmide avec un vecteur Ti, le vecteur Ti est inséré de manière virale dans la cellule de la pomme.

vecteur Ti contient des séquences pour des gènes de pholyphénol Oxydase
-leur expression déclenche le phénomère d’ARNi
=permet le non-brunissement des pommes

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Connaissons nous les effets a long terme des plantes transgéniques sur la santé humaine et l’environnement

Non

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Que permet le mais Bt

Production de toxine Bt qui tue les insectes sauf les papillons*

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Quelles types de gènes sont utilisés souvent comme marqueur de sélection

Résistance aux antibiotiques
-ces gènes de résistance aux antibiotiques proviennent de bactéries qui existent déjà dans la nature

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Si une bactérie devient résistante aux antibiotiques, sa progéniture le sera-t-elle ?

Oui
-Aucune transmission plante GM - Bactérie a été constaté
-

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Quelle a été le premier animal transgénique

Souris qui produisait plus de HGH (hormone de croissance)

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Quelles sont les deux opérations de la transgénèse
Sur qui sont-ils utilisée?

Addition et remplacement de gènes

Principalement souris, remplacement de gènes commencent seulement à être mises en oeuvre chez d’autres espèces

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De quelle manière l’ADN peut être introduit
Lesquels produisent un danger de modifications des gènes de l’hote?

Spermatozoide
Vecteurs retroviraux
Vecteurs lentiviraux
Microinjection

microinjection et viraux

Comment les vecteurs viraux sont réprimés

Par la méthylation de l’ADN viral

Peut-on prédire le site d’intégration et le nombre de copies du transgène intégrées

Non

Comment les cellules souches peuvent avoir un contenu génétiquement modifié

Grâce à des techniques précises de recombinaison homologue
-pas de dangers associés à microinjection ou vecteurs viraux

D’ou sont obtenus les cellules multipotentes

peuvent participer au développement d’un embryon
Obtenus à partir de:
-Blastocytes (ES)
-fœtus (EG)

Le transfert de gènes via les cellules ES servent à quoi ?

-Inactiver des gènes chez la souris
-Cibler la transgénèse par recombinaison homologue

Comment le transfert de gène via cellules ES marche ?

Les cells ES modifiées sont injectées dans la cavité d’un blastocyte et participent à la naissance d’une souris chimère

VRAI OU FAUX: les cellules ES peuvent être exploitées chez d’autres espèces

FAUX, seulement chez souris

Que permet la totipotence des cellules ES?

leur permet de contribuer au développement des tissus (en particulier la lignée germinale) -donc permettent de transmettre le génotype sélectionné à la descendance de la cellule (in vitro)

C’est quoi Glo Fish

Poisson transgénique qui exprime protéines fluorescentes

Comment se fait la création de poissons transgéniques

Par micro-injection dans l’oeuf: -facile car les oeufs se développent à l'extérieur

Quand est-ce que le séquence de l’ADN a été terminé

En 2001(3 milliards de pb = 700Mb)

combien de gène codent pr cb de protéine

20 310 pour 100k prot

Cb de %age du génome code pour des protéines

Moins de 2%

Quelle est le %age du génome de l’ADN qui se répète

50% LINE 20% SINE 13% (Alu 10%) LTR rétrotransposons 8% ADN transposons 3%

cmb de % de gènes non codants? cmb de gènes humain acquis à partir de bactéries?

98% des gènes sont non-codants 100s

Qu’est-ce qu’un SNV/SNP

Partie du génome ou le type de nucléotide peut différer d’une personne à l’autre

Que permettent les SNP

De déterminer des régions du génome qui peuvent être importantes dans le développement d’une maladie

De quoi est constitué le génome du chien Pk le gène du chien peut être sélectionné

2,4 gigabases (20k gènes) 3 millions de SNP entre chien et loup ciblées par la domestication du chien A des gènes qui aident à digérer l’amidon: 7,4 milliards de copies de gène pour amylase, une nouvelle copie du gène pour la maltase qui est plus active

Que permet la méthode de Sanger

De trouver une séquence dans l’ADN en y ajoutant des ddNTP (didésoxyribose) qui n’ont pas de 3’OH, ce qui va arrêter leur élongation. (impossible de former une liaison phosphoester En marquant chaque type de ddNTP nous seront capables de reconnaitre l’identité du nucléotide ou la synthèse d’ADN s’est arrêtée -nécessite amorce d'ARN connue

Dans le séquencage ou se trouve le plus grand nombre de réactions de synthèse

Dans le tube

Il existe bcp de quoi et comment

Il existe statistiquement bcp de chaines de toutes les tailles et de fragments de mm tailles

Ou commencent ces chaines sur l’ADN

ADN matrice toute au même endroit

Concrètement comment la méthode de Sanger

ddNTP s’ajoute à l’ADN pendant la polymérisation, ce qui l’arrête. On fait ça plusieurs fois et ensuite on l’envoie dans l’électrophorèse pour mesurer la longueur et poids de chaque molécule d’ADN traité et de là, avoir un certain ordre