12 AS (2) Flashcards
Problème de production de protéines recombinantes chez mammifères?
Croissance cellulaire + lente
cultures peuvent être contaminées par bactéries ou champignon
peuvent être contaminés par virus qui infectent humains
-besoin de cellules CHO provenant d’ovaires de souris chinoises
Quand est-ce que le premier enzyme OGM a été produit
1988 par NOVO, produit l’enzyme lipolase pour la lessive
Que veut dire GRAS
Generally Recognized as Safe
Grâce à quoi est fait le fromage
Chymosine recombinante qui est exprimée chez les organismes GRAS
Quand est-ce que la FDA a approuvé la chymosine recombinante
1990
Qu’est-ce qu’un OGM
microorganisme/plante/animal dont le patrimoine génétique a été modifié par génie génétique pour attribuer/enlever des traits désirables/indésirables
Y’a-t-il eu un brevet pour les OGM et comment ?
Diamond vs Chakrabarty
Chakrabarty modifie pseudomas pour avoir un métabolisme d’huile.
Pseudomas modifié pouvait métaboliser 66% des hydrocarbures d’un déversement de pétrole
Chakrabarty voulait brevet, demande a dit non, Chakrabarty a fait appel, cour des douanes et brevets a dit oui, Diamond voulait pas, donc c’est allé jusqu’en cour suprême qui a dit oui
Quelle bactérie est utilisé pour produire des plantes transgéniques
Quelle maladie provoque-t-elle?
Agrobacterium tumefaciens
-provoque maladie appelée galle du colet, au cours de laquelle la plante infectée produit des excroissances incontrolée
-Plasmide Ti est responsable de la formation de tumeur
-l’ADN d’intéret est cloné dans le plasmide Ti
-Plasmide Ti est inséré dans la plante à l’aide de la bactérie qui le porte
Que fait l’usine de vaccins medicago
Utilise des plantes transgéniques pour produire des protéines recombinants, dont les vaccins
Quelle est le fonctionnement de la pomme arctic
Agrobactérium a un plasmide avec un vecteur Ti, le vecteur Ti est inséré de manière virale dans la cellule de la pomme.
vecteur Ti contient des séquences pour des gènes de pholyphénol Oxydase
-leur expression déclenche le phénomère d’ARNi
=permet le non-brunissement des pommes
Connaissons nous les effets a long terme des plantes transgéniques sur la santé humaine et l’environnement
Non
Que permet le mais Bt
Production de toxine Bt qui tue les insectes sauf les papillons*
Quelles types de gènes sont utilisés souvent comme marqueur de sélection
Résistance aux antibiotiques
-ces gènes de résistance aux antibiotiques proviennent de bactéries qui existent déjà dans la nature
Si une bactérie devient résistante aux antibiotiques, sa progéniture le sera-t-elle ?
Oui
-Aucune transmission plante GM - Bactérie a été constaté
-
Quelle a été le premier animal transgénique
Souris qui produisait plus de HGH (hormone de croissance)
Quelles sont les deux opérations de la transgénèse
Sur qui sont-ils utilisée?
Addition et remplacement de gènes
Principalement souris, remplacement de gènes commencent seulement à être mises en oeuvre chez d’autres espèces
De quelle manière l’ADN peut être introduit
Lesquels produisent un danger de modifications des gènes de l’hote?
Spermatozoide
Vecteurs retroviraux
Vecteurs lentiviraux
Microinjection
microinjection et viraux
Comment les vecteurs viraux sont réprimés
Par la méthylation de l’ADN viral
Peut-on prédire le site d’intégration et le nombre de copies du transgène intégrées
Non
Comment les cellules souches peuvent avoir un contenu génétiquement modifié
Grâce à des techniques précises de recombinaison homologue
-pas de dangers associés à microinjection ou vecteurs viraux
D’ou sont obtenus les cellules multipotentes
peuvent participer au développement d’un embryon
Obtenus à partir de:
-Blastocytes (ES)
-fœtus (EG)
Le transfert de gènes via les cellules ES servent à quoi ?
-Inactiver des gènes chez la souris
-Cibler la transgénèse par recombinaison homologue
Comment le transfert de gène via cellules ES marche ?
Les cells ES modifiées sont injectées dans la cavité d’un blastocyte et participent à la naissance d’une souris chimère
VRAI OU FAUX: les cellules ES peuvent être exploitées chez d’autres espèces
FAUX, seulement chez souris
Que permet la totipotence des cellules ES?
leur permet de contribuer au développement des tissus (en particulier la lignée germinale)
-donc permettent de transmettre le génotype sélectionné à la descendance de la cellule (in vitro)
C’est quoi Glo Fish
Poisson transgénique qui exprime protéines fluorescentes
Comment se fait la création de poissons transgéniques
Par micro-injection dans l’oeuf:
-facile car les oeufs se développent à l’extérieur
Quand est-ce que le séquence de l’ADN a été terminé
En 2001(3 milliards de pb = 700Mb)
combien de gène codent pr cb de protéine
20 310 pour 100k prot
Cb de %age du génome code pour des protéines
Moins de 2%
Quelle est le %age du génome de l’ADN qui se répète
50%
LINE 20%
SINE 13% (Alu 10%)
LTR rétrotransposons 8%
ADN transposons 3%
cmb de % de gènes non codants?
cmb de gènes humain acquis à partir de bactéries?
98% des gènes sont non-codants
100s
Qu’est-ce qu’un SNV/SNP
Partie du génome ou le type de nucléotide peut différer d’une personne à l’autre
Que permettent les SNP
De déterminer des régions du génome qui peuvent être importantes dans le développement d’une maladie
De quoi est constitué le génome du chien
Pk le gène du chien peut être sélectionné
2,4 gigabases (20k gènes)
3 millions de SNP entre chien et loup ciblées par la domestication du chien
A des gènes qui aident à digérer l’amidon: 7,4 milliards de copies de gène pour amylase, une nouvelle copie du gène pour la maltase qui est plus active
Que permet la méthode de Sanger
De trouver une séquence dans l’ADN en y ajoutant des ddNTP (didésoxyribose) qui n’ont pas de 3’OH, ce qui va arrêter leur élongation. (impossible de former une liaison phosphoester
En marquant chaque type de ddNTP nous seront capables de reconnaitre l’identité du nucléotide ou la synthèse d’ADN s’est arrêtée
-nécessite amorce d’ARN connue
Dans le séquencage ou se trouve le plus grand nombre de réactions de synthèse
Dans le tube
Il existe bcp de quoi et comment
Il existe statistiquement bcp de chaines de toutes les tailles et de fragments de mm tailles
Ou commencent ces chaines sur l’ADN
ADN matrice toute au même endroit
Concrètement comment la méthode de Sanger
ddNTP s’ajoute à l’ADN pendant la polymérisation, ce qui l’arrête. On fait ça plusieurs fois et ensuite on l’envoie dans l’électrophorèse pour mesurer la longueur et poids de chaque molécule d’ADN traité et de là, avoir un certain ordre
