12 AS (1) Flashcards
Inhibiteurs du centre peptidyltransferase
Chloramphenicol et Linezolid
Comment fonctionne des inhibiteurs du centre peptidyltransferase
Elle se place sur l’ARNt au site A et empêche la liaison du peptide de l’ARNt au site P vers celui en site A
C’est qui l’inhibiteur de l’élongation dans la traduction
-Quelle est sa caractéristique?
Puromycine:
Elle ressemble à un ARNt (similaire à l’adénosine à l’extrémité 3’ du tyrosyl ARNt) donc il peut se placer dans le site A
-le peptidyl sera transféré à la puromycine
Cela termine prématurément la traduction + libération d’un peptide avec puromycile attachée à son extrémité C-terminale
Que fait la chloramphénicol
S’attache à 50S
Inhibe la formation de lien peptidique
Que font les macrolides, clindamycines & streptogramins
bloque le tunnel de sortie de la polypeptide sur 50S et empêche l’élongation
Que font les Tetracyclines
Se lie à 30S de façon réversible et bloque liaison entre ARNt et site A
(inhibe la petite sous-unité)
Que font les Aminoglycosides
Se lie à 30S et cause la mauvaise lecture de l’ARNm. Interagit avec 30S, 50S et l’ARNm
(inhibe la petite sous-unité)
Qu’est-ce qu’une molécule d’ADN recombinant
Molécule d’ADN crée en laboratoire à partir de plusieurs sources
Quelles sont les différentes parties du clonage
-Préparation du vecteur
-Préparation de l’ADN à insérer
-Réalisation d’un recombinant : ligation
-Incorporation à l’hôte: transformation
ADN recombinant vs ADN recombiné
ADN recombinant est formée de facon artificielle
ADN recombiné est prélevé d’un organisme, modifié, et est introduit dans un autre organisme
Quelles sont les utilités du clonage
Produire des prot pour le traitement d’une maladie génétique ou pour des vaccins
Les plasmides ont-ils besoin de quelquechose d’autre pour faire la réplication
Non
Quelles sont les caractéristiques des plasmides
Taille réduite
Peuvent accepter jusqu’à 10kb d’ADN exogène
Confère résistance à 1 ou + antibiotiques = marqueur de sélection
Capable de réplication autonome (origine de réplication)
C’est quoi les marqueurs de selection
Les gènes que l’on va utiliser pour savoir si la bactérie a accepté le vecteur plasmidique
Comment fait-on pour insérer des fragments d’ADN dans le vecteur
Que font-ils?
Enzymes de restriction
-ils protègent les bactéries contre les phages
Quelle est la différence entre une coupure cohésive et franche
Franche = coupe de manière égale
Cohésive = coupe de manière à que ce soit complementaire
Les enzymes de restriction coupe pour cb dans des régions de cb de nucleotides
-De quoi sont consitués les enzymes de restrictions?
entre 4 et 12
Protéine homodimérique et chaque s-u reconnait un des 2 brins d’ADN
Quelle est la caractéristique des sites de restriction
Ce sont des palindromes
-site de reconnaissance pour enzyme de restriction
Que permet la ligase
Comment?
Lie de façon covalence 2 molécules d’ADN pour en faire une seule
-Transforme 2 ATP en 2 AMP + 2PPi pour briser les liaisons P et OH et créer des liaisons entre les brins
-peuvent aussi Réplication et Réparation
Qu’est-ce qu’un polylinker
Gène de résistance à un antibiotique comme marqueur de sélection
Types de vecteurs?
Plasmide
Phage lambda
Cosmide
Phage 1
BAC
YAC
Construit à partir du plasmide F
À quoi servent les régulateurs de réplication sop A et B
À maintenir un faible nombre de copies pour le polylinker
Comment on introduit un ADN recombinant dans un procaryote
Par transformation : L’ADN est introduit dans les bactéries qui sont traitées par choc thermique/électrique
Qu’est-ce qu’une bactérie compétente
Quand elle est capable de recevoir un vecteur plasmidique
D’ou vient l’insuline
De l’ADN recombinant et est le 1er a avoir été fait grâce à ca
Quelles sont les 3 types de banques d’ADN
Banque génomique
Banque de cDNA
Banque d’expression
Qu’est-ce que la banque génomique
À quoi sert-elle?
-Couvre l’ensemble du génome
-Clonage facilite manipulation de vecteur et leur multiplication ainsi que leur conservation à long terme
-Permet d’isoler des gènes d’intérêt/définir cartographie du génome
C’est quoi banque cDNA
-Particularité?
ARNm qui ont fait de la rétrotranscription pour redevenir de l’ADN
-Elle est spécifique à un tissu
C’est quoi banque d’expression
Banque dont le vecteur porte des signaux transcriptionnels ce qui permet à n’importe quelle vecteur avec un marqueur de sélection cloné de produire un ARNm et ensuite protéine
Qu’est-ce qui permet la rétrotranscription dans l’ARNm
Amorcée par un Oligonucléotide complémentaire à la queue poly-A = nommés adaptateurs
-ADNc simple brin est converti àADNc double-brin
Comment le VIH se réplique
Par retro-transcription
-à l’aide de l’enzyme reverse transcriptase
Qui a découvert PCR
Kary Mullis
Qu’est-ce qu’une prot recombinante
-Comment doivent-elle être utiles?
Une prot faite à partir d’un ADN recombinant exprimé dans une cellule hôte
-Elles doivent garder leur activité
-Empecher leur immunogénicité chez l’homme
Qu’est-ce qu’a fondé Genetech
Des protéines recombinantes:
-insuline
-Facteur 8 de la coagulation dans l’hémophilie A
-interférons
-hormones de croissance
Quelle est la chose la plus importante à choisir quand on veut utiliser une protéine recombinant
L’organisme d’expression le mieux adapté
Les meilleurs organismes hôtes pour les prot recombinantes sont
bactérie
insecte
levure
cellules de mammifères
plantes et animaux et transgéniques
Cb de g/L d’insuline E. coli modifié peut produire
1g/L
Quelle est le problème des levures lors de l’utilisation de protéines recombinantes
économique, mais glycolsylation des protéines est complètement différente de l’être humain donc elles peuvent être immunogène pour l’humain
Quelle est le problème des cellules d’insectes pour la production de prot recombinantes
Milieu de culture couteux
Glycolisation différente des êtres humains
Cellules bactériennes peuvent être contaminés par des baculovirus modifiés afin d’exprimer la protéine recombinante
Quelle est le problème des bactéries pour la production de prot recombinantes
protéines recombinantes sont souvent mal repliées et manquent la glycolysation (modification requise pour repliement)
-DONC, certaines protéines produites perdent leur fonction
