Week 6 ( Synthèse des protínes / expression recombinant)

Question 1

Combien y’a til de codons différents possibles ?

Answer 1

Puisqu’un codon est combosé de 3 bases avec 4 bases possibles 4x4x4 = 64

Question 2

Qu’est le codon de départ ?

Answer 2

la Methionine venant de ATG/AUG

Question 3

Que sont les deux étapes pour qu’un l’ADN du noyau devienne une protéine ?

Answer 3

1. La Transcription
2. La translation

Question 4

Qu’est le RNA ?

Answer 4

C’est un polymère linéaire composé de nucléotides comme l’ADN

Question 5

Qu’est la structure de l’ARN ?

Answer 5

de un seul brin, non défini

Question 6

Que sont les différences entre l’ARN et l’ADN au niveau de la structure chimique ?

Answer 6

• La structure des riboses ( pas de O sur 2’)
• Les bases (Uracil à la place de Thymine)

Question 7

Comment fonctionne la transcription ?

Answer 7

Le brin d’ADN est ouvert par l’Hélicase L’ARN messager est complémentaire au brin matrice 3’-5’ et est assemblé par l’ARN polymérase

Question 8

Ou commence la transcription ?

Answer 8

La transcription commence au sites promoteurs

Question 9

Ou sont situés les sites promoteurs ?

Answer 9

Sur le brin matrice à 35 et 10 mucléotides avant le début de la construction du premiers nucléotide d’ARNm

Question 10

Qu’est le groupe de nucléotide qui commence la construction du ARNm ?

Answer 10

Le signal de début sur le brin matrice GTA ou sur le brin codant CAT

Question 11

De quelle direction est le brin codant ?

Answer 11

5’-3’

Question 12

De quelle direction est le brin matrice ?

Answer 12

3’-5’

Question 13

Que sont les noms de deux régions promoteuses de la transcription pour les cellules prokaryotes et leur composition en nucléotides et position avant le début de l’ARN ?

Sur le brin codant

Answer 13

• La région -35 (-35): TTGACA
• La pribnow box (-10): TATAAT

Question 14

Est-ce que la ARN polymérase touche le brin codant de l’ADN ?

Answer 14

Non

Question 15

Que sont les noms de deux régions promoteuses de la transcription pour les cellules eukaryotes et leur composition en nucléotides et position avant le début de l’ARN?

Answer 15

• La CAAT box (-75): GGNCAATCT
• La TATA box/ Hogness box (-25): TATAAA

Question 16

Est-ce que la CAAT box est toujours présente ?

Answer 16

Non

Question 17

Comment est-ce que la transcription de l’ARN finit ?

Answer 17

Avec une séquence de terminaison à épingle à cheveux qui se forme dans l’ARN

Question 18

Pourquoi la séquence en épingle à cheuveux existe et pourquoi est-ce qu’elle finit la transcription ?

Answer 18

Elle existe car la séquence créee contient des bases complémentaires (riche en C et G) qui se lient ensemble.

Elle finit la transcription car la forme d’épingle à cheveux ne permet pas a l’ARNm à quitter l’ARN polymérase ce qui lui empêche de continuer la synthèse d’ARN. De plus des résidus d’Uracil qui sont à la fin de l’épingle forme plusieurs lient U-A qui ne sont pas très forts et donc déstabilise le complexe hybride ADN et ARN

Question 19

Comment l’ARN est-elle traduite en protéines ?

Answer 19

Grace à une série d’apateurs qui correspondent avec d’acide aminés qui se lient ensemble

Question 20

Qu’est le nom donné pour le processus de produire une protéine à partir d’ARNm ?

Answer 20

La translation

Question 21

Qu’est le nom de la molécule utilisé comme adaptateur ?

Answer 21

le ARNt ou ARN de transfer

Question 22

Que sont les parties de l’ARNt ?

Answer 22

• Le site de reconnaissance de la matrice (ARNm) avec un anticodon (complémentaire des 3bases du codon dans l’ARNm)
• Un site d’attachement de l’acide aminé 3’
• D arm
• TphiC arm

Question 23

Comment l’acide aminé est-il attaché au ARNt ?

Answer 23

Le groupe hydroxyle (3’ ou 2’) est lié à l’acide aminé par une liaison ester

Question 24

Comment est-ce que l’ARNt se fait-il chargé d’un Acide Aminé ?

Answer 24

Grace à l’Aminoacyl-tRNA synthétase.
L’ARNt se place avec sa partie 3’ dans le site d’activation puis se lient avec l’acide aminé avec un transfert d’énérgie de ATP en AMP

Question 25

Qu’est le lien ARNt-AA ?

Answer 25

Un lien de haute énergie

Question 26

Comment est-ce que les acides aminés sont liées entre eux lors de la translation ?

Answer 26

La translation se fait avec un ribosome.
Le ARNm est entre deux sous-unité du ribosome (50S et 30S). Les ARNt se place de le site A du 50s et s’adaptent aux codons. Le ARNt ayant reconnu son codons lâche l’AA dans le 50S qui se lient avec d’autres AA. Puis l’ARNm avance et le ARNt va au site P puis se fait relâcher

Question 27

Que sont les constituants du ribosome ?

Answer 27

• de protéines
• ARNr

2 sous unités: 50S et 30S

Question 28

Combien y’a-t-il de moyens de lire une séquence d’ARN ?

Answer 28

6

Question 29

Comment le ribosome sait-il à quelle position sur le ARNm où la traduction doit commencer ?

Answer 29

Sur le signal de départ AUG

Question 30

Qu’est le premier acide aminé chez les procaryotes ?

Answer 30

fMet (group formyl)

Question 31

Qu’est le signal d’initiation? Son nom, ses caractéristiques ?

Answer 31

La région Shine-Dalgarno est une région avant le premier codon. C’est une région de 7 nucléotides avec plusieurs purines (A,G) situé entre 4 et 9 nucléotides avant le premier codon

Question 32

Comment le ribosome sait-il à quelle position sur le ARNm il doit terminer la traduction ?

Answer 32

Grace à des codons de terminaison: UAA, UAG, UGA
Et des facteurs de terminaison qui sont des protéines spécifiques

Question 33

Que se passe-t-il quand le ARNm n’est plus nécessaire ?

Answer 33

L’ARNm se décompose

Question 34

Pourquoi est-ce que l’ARNm est-il moins stable ?

Answer 34

À cause du O en plus sur le ribose qui s’attaque plus a liaison entre les bases

Question 35

Que sont des caractéristiques de l’Insuline ?

Answer 35

• Composé de 51 AA
• Protéine importante pour la régulation de la concentration en glucose
• Une des premières protéines produites par la technologie recombinante ?

Question 36

Pourquoi peut-on pas utiliser l’Insulin des porcs ou de vaches ?

Answer 36

Car elles ont des mutations et n’arrivent pas à être identifiées par le système immunitaire humain

Question 37

Que sont les étapes de l’expression recombinante de l’insuline ?

Answer 37

1. Isolation du matériel génétique (ARNm proinsuline)
2. Synthèse de l’ADN (Transcription inverse)
3. Insertion dans un vecteur
4. Transfert dans l’hôte

Question 38

Comment fonctionne la transcription inverse ?

Answer 38

Une primer se lie à la fin de l’ARNm
puis la transcriptase inverse assemble de l’ADN complémentaire du ARNm

Question 39

Comment peut-on ensuite synthétiser en grande quantités le gène de l’insuline ?

Answer 39

Une PCR en utilisant l’ADN complémentaire synthétisé à partir de l’ARNm proinsuline

Question 40

Que sont les deux types d’ADN dans une bactérie ?

Answer 40

• Les plasmides
• L’ADN génomique

Question 41

Qu’est qu’un plasmide et que sont ses caractéristiques ?

Answer 41

C’est de l’ADN circulaire composé d’environ 4000 nucléotides qui peut se répliquer de façon autonome dans la bactérie. Composé de deux brins

Question 42

Comment est inséré l’ADNc dans les plasmids ?

Answer 42

On clive en deux le plasmid avec une enzyme de restriction qui laisse des sticky ends.
Ensuite par PCR on introduit des sites de restrictions par le biais des amorces pour la PCR.
Ensuite on clive les séquences de restrictions pour donner de l’ADN avec des Sticky Ends.
Ensuite grâce à l’ADN ligase on insère l’ADN/gène dans le plasmid avec de l’ADN ligase.

Question 43

Comment sont transférés les plasmids dans les bactéries ?

Answer 43

Les plasmids sont mis dans le même contenant que les bactéries hôtes puis le contenant est chauffé afin que les plasmids rentrent dans les bactéries

Question 44

Comment peut-on reconnaître les bactéries avec le plasmide sur une plaque de gel d’électrophorèse ?

Answer 44

Elles expriment une protéine en plus que celles sans le plasmide.

Question 44

Comment pourrait-on identifier les bactéries qui contiennent le plasmide ?

Answer 44

On insère un autre gène qui résiste aux antibiotics (Ampicilline) puis on le fait pousser sur une plaque de gel avec l’antibiotique. Les bactéries ont le plasmide