Vježba 15 Flashcards
kaj koristimo (plazmid, bakterija, gen koji ugrađujemo)
plazmid: pGLO
bakterija: E. coli HB101
gen: GPF (green fluorescent protein)
kakav agar se koristi i kaj sve sadrži
LB agar –> triptofan, sol, kvašćev ekstrakt, agar
kak radimo petrijevke
bez DNA: LB+bakterije, LB+bakterije+ampicilin
s DNA: LB+bakterije+ampicilin, LB+bakterije+ampicilin+arabinoza
kak arabinoza oboji rezistentne bakterije
zeleno
kad se koristi metoda PCR
dok želimo imati više kopija jedne DNA
koja je ključna činjenica u PCR-u
DNA se na višim temp ne uništava nego se odvajaju lanci, pri nižim temp se ponovno spajaju
kaj je sve potrebno za PCR
DNA primer (za početak sinteze) dušične baze DNA polimeraza (Taq polimeraza - otporna na visoke temp)
proces u PCR-u
- povisi temp - razdvajanje lanaca
- snižavanje temp - primaza se spoji na jednostruke lance
- sinteza drugog lanca
- povišenje temp, rastaljivanje novog lanca za aplifikaciju
gdi se čuvaju dobiveni geni u PCRu
u DNA bibliotekama
kakva DNA se može koristiti pri PCRu
bez introna (jer bakterije nemaju introne niti ih prepoznaju)
kak se dobiva DNA bez introna
reverznom transkriptazom
kaj je reverzna transkriptaza
DNA polimeraza koja stvara DNA lanac prema mRNA –> nastaje DNA komplementarna mRNA, bez introna
kak se zove DNA koju sintetizira reverzna transkriptaza
cDNA (copy DNA –> nema introne)
zakaj se koristi PCR pri detekciji virusne/bakterijske infekcije
jer je u serumu preniska razina virusne DNA, pa se treba umnožiti da bi se detektirala
iz čega je sintetizirana Taq polimeraza
thermus aquaticus
u DNA imamo sekvence koje kodiraju za
proteine, tRNA, rRNA, siRNA
koje su nekodirajuće sekvence DNA
regulatorne sekvence (pojačivači, utišivači...) junk DNA (introni, repetitivna DNA)
na kaj se dijeli repetitivna DNA
visoko ponovljene sekvence
srednje ponovljene sekvence
kaj su visoko ponovljene sekvence
satelitna DNA - centromere, telomere