Rekombinantna DNA tehnologija

Question 1

kaj spada pod pojam rekombinantna DNA

Answer 1

stvaranje umjetne DNA nastale kao rezultat spajanja DNA iz različitih izvora

Question 2

može li RNA polimeraza jednog organizma prepisati gene nekog drugog organizma

Answer 2

da

Question 3

koja su 4 osnovna koraka u rekombinaciji DNA

Answer 3

izolacija
cijepanje
spajanje
amplifikacija (umnožavanje)

Question 4

od čega potječu restrikcijske endonukleaze

Answer 4

prokariota

Question 5

kaj je metilacija DNA

Answer 5

način na koji se spriječava cijepanje host DNA enzimima (npr ako virus i host DNA imaju isti fragment pa da se host ne uništi dok stanica uništava virus)

Question 6

restrikcijska endonukleaza ne prepoznaje

Answer 6

metiliranu DNA

Question 7

kakvi krajevi nastaju nakon cijepanja restrikcijskom endonukleazom

Answer 7

lijepljivi i tupi

Question 8

kaj sadrže lijepljivi krajevi DNA nakon cijepanja endonukleazom

Answer 8

vodikove veze u slobodnim fragmentima

Question 9

objasniti nomenklaturu za primjer restrikcijske endonukleaze EcoR I

Answer 9

E - prvo slovo roda
co - prva dva slova vrste
R - soj
I - redni broj izoliranog enzima po kronologiji

Question 10

iz čega je izoliran restrikcijski enzim BamH I

Answer 10

Bacillus amyloliquefaciens

Question 11

iz čega je izoliran restrikcijski enzim Sau3A I

Answer 11

Staphylococcus aureus 3A

Question 12

kaj je restrikcijska mapa

Answer 12

fizička karta u parovima baza na kojima su označena mjesta djelovanja pojedinih restrikcijskih endonukleaza

Question 13

kaj se dešava nakon cijepanja DNA restrikcijskom endonukleazom

Answer 13

fragment se ubacuje u vektor

takva rekombinantna DNA se ubacuje u neki organizam (da se može dijeliti)

Question 14

kaj su vektori

Answer 14

komadići DNA u koje se ubacuje fragment druge DNA

Question 15

koje su osobine vektora

Answer 15

samostalno se replicira (mora jer fragment nema origin of replication)
ima 1 restrikcijsko mjesto (da znamo di je fragment)
restrikcijsko mjesto je istovjetno onom na fragmentu

Question 16

koji su eukariotski vektori

Answer 16

YAC (yeast artificial chromosome)
virusi
liposomi

Question 17

koji virusi se koriste ko vektori

Answer 17

adenovirusi (ne ubacuju fragment u jezgru, treba ponavljati proces)
retrovirusi
adenoassociated virusi

Question 18

koji su prokariotski vektori

Answer 18

plazmidi
kozmidi (plazmid+fag)
bakteriofag
BAC (bacterial artificial chromosome)

Question 19

kaj spaja vektor i fragment DNA

Answer 19

DNA ligaza

Question 20

koji su načini unosa rekombinantne DNA u organizam

Answer 20

1. pucanje zlatnim zrncima na membranu
2. elektrošok (otvaranje kanalnih proteina)
3. kemijska transformacija (CaCl2)
4. heatshock

Question 21

kaj se desi pri kemijskog transformaciji s CaCl2

Answer 21

Ca2+ neutralizira DNA, ali nedostaju pore na membrani (za to je zaslužan heatshock)

Question 22

kaj se radi pri heatshocku i kaj on osigurava

Answer 22

uzorak na led, pa 42 stupnja pa led –> membrana postaje permeabilnija za strana tijela)

Question 23

na temelju čega provjeravamo je li se plazmid ugradio u bakteriju

Answer 23

na temelju rezistencije na ampicilin i tetraciklin

Question 24

kad želimo provjeriti jeli se plazmid uopće ugradio u bakteriju onda ga nasadimo na

Answer 24

amplicin –> one bakterije koje su rezistentne rastu na podlozi (jer plazmid ima gen koji daje rezistentnost)

Question 25

ako želimo saznati jeli plazmid ugrađen na mjestu za tetraciklin onda ga nasadimo na

Answer 25

tetraciklin --> one koje nisu rezistentne su ugrađene na ispravnom mjestu

Question 26

primjer plazmida za rekombinantu DNA

Answer 26

pBR322

Question 27

koji uvjet moraju ispuniti oni proteini koji se rekombinacijom proizvode u bakteriji (npr. inzulin)

Answer 27

ne prolaze posttranslacijsku modifikaciju u glatkom ER-u (jer bakterije nemaju organele)

Question 28

restrikcijska endonukleaza reže DNA u obliku

Answer 28

palindroma