Visualiseringsmetoder och färgningsmetodik Flashcards
Visualisering, färgmolekyler, metaller, DNA-prober
Vilka Hematoxylin-färgningar finns det och vilka betmedel har respektive färgning?
- Mayer (aluminium)
- Erlich (aluminium)
- Harris (aluminium)
- Weigert (järn)
- Heidenlhain (järn)
Vad beror permeabiliteten hos vävnaden på?
- Täthet av vävnad
- Ev. förbehandling
- Tid
Vad används oftast som lösningsmedel för färglösningar?
Dest. vatten eller alkohol av olika koncentrationer
Vad är skillnaden på översiktsfärgning och specialfärgning?
- Översiktsfärgning - cellkärnor kontra cytoplasma
- Specialfärgning - en mer detaljerad bild av vävnadens uppbyggnad (bindväv, elastiska fibrer, viruspartiklar, svamp, etc.)
Ge exempel på kromofora grupper
- -N=N- (azogrupp)
- -N=O (nitrosogrupp)
- -NO2 (nitrogrupp)
- >C=C< (alkengrupp, aromat)
- >C=O (oxogrupp)
Vilka två typer av färgämnen finns det?
Naturliga och syntetiska
Vad är detta för färgning?
Vilken färg färgas respektive delar?
Masson’s Trikrom
- Keratin och muskler färgas röda
- Kollagen och ben färgas blå/grön
- Cytoplasma färgas ljust rött/rosa
- Cellkärnor färgas bruna/svarta
Vad har auxokromer för egenskaper?
- Absorberar ej själv ljus utan binder till kromofort system
- Ändrar ljusabsorptionen mot längre våglängd
Färgningsmetodik indelning B - efter hur färgämnet får rätt styrka?
- Progressiv metod
- Regressiv metod
Vad beror färgmolekylers affinitet till vävnad på?
- Reaktiva grupper hos färgmolekyl och vävnad
- Diffusionshastigheten hos färgmolekylen
- Permeabiliteten hos vävnaden
Vad ska du göra för en lång hållbarhet när det gäller färglösningar?
- A- och B-lösning ska förvaras avskilt
- Filtrera tillbaka
- Förvara i mörk flaska i kylskåp
Vilka blåningslösningar finns till översiktsfärgningar?
- Ammoniakvatten
- Litiumkarbonat
- Kranvatten
Vad är definitionen för “äkta betmedel”?
En polyvalent (många valenselektroner) metalljon vilken bildar komplex med vissa färgämnen
Vilka metaller förekommer i vävnad?
Naturlig förekomst: Ca, Mg, Fe, Zn, Na, K
Patologisk förekomst: Pb, Hg, Ag, Th, Cd, Au, Cu
Färgningsmetodik indelning A - hur färgämnet fäster till vävnaden?
- Direkta/substantiva metoder
- Reducerande/oxiderande metoder
- Indirekta/adjektiva metoder
Vad ska du använda för färgämne vid histokemi?
- Aromatiskt eller heteroaromatiskt ämne
- Löslig i vatten eller i polära lösningsmedel
- Har en förmåga att binda sig till andra ämnen
Vad har färglösningar oftast för koncentration?
0.1 - 2 %
Vilka är användningsområdena för ISH?
- Sökande efter genetiska förändringar
- Kromosom-mapping
- Infektiösa sjukdomar
Vad betyder in-situ hybridisering (ISH, FISH)?
- In-situ* - på platsen
- Hybridysering* - enkelsträngad DNA-probe binder till framställt enkelsträngat DNA i vävnaden
Ge exempel på översiktsfärgning
Hematoxylin-Eosin
Vilka reaktiva grupper finns i vävnad?
- Nukleinsyra (DNA, RNA): =PO4-
- Sura heteropolysackarider och proteiner: -COO-
- Proteiner: -O-, -S-, -NH3+
- Sura heteropolysackarider: -SO4-
Vad är detta för färgning?
Vilken färg färgas respektive delar?
Hematoxylin-Eosin
- HTX färgar cellkärnor blå/lila
- Eosin färgar cytoplasman svagt rosa
Vad är simultanfärgning?
En färgblandning av två eller flera färgsubstanser i samma färglösning
Storlek på färgmolekyl och affinitet spelar stor roll här. Den ena färgen ska inte täcka över den andra
Vad är reducerande/oxiderande färgningsmetod?
Där medel behövs innan färglösningen
Exempel - Grokott; kromsyra oxiderar vävnaden innan silver
Hur ska du märka en färglösning?
- Ämne
- Koncentration
- Till vilken färgmetod det används
- Namn
- Datum
- Ev. farosymbol / piktogram
Vad är ett färgämne?
Ett ämne som absorberar elektromagnetisk strålning i det synliga området av spektrat (400 - 750 nm), och därmed ger färg
Ge exempel på vanliga inmärkningar av DNA/RNA-prober (IHC)
- Isotoper
- Biotin
- Fluorescerande ämnen
Vad är syntetiska färgämnen framställda av?
Stenkolstjära
Färgningsmetodik indelning C - hur anbringas de olika färgerna till vävnaden?
- Succedanfärgning
- Simultanfärgning
Ge exempel på katjonfärger och berätta vad de färgar?
Ex. metylgrönt, metylenblått, toludinblått, basisk fuschin
Färgar sura vävnadskomponenter som:
- proteiner med karboxylgrupp
- cellkärnor
- bakterier
- brosk
- slem
- nerver
Ge exempel på anjonfärger och berätta vad de färgar?
Ex. eosin, pikrinsyra, syrafuschin, anilinblå
Färgar basiska vävnadskomponenter som:
- proteiner med fria aminogrupper
- cytoplasma
- muskel
- kollagen
- bindväv
- erytrocyter
*
Sätt ut kromofor, auxokrom och kromogen i bilden
- Auxokrom
- Kromofor
- Kromogen
Färgämnens indelning - efter sätt att binda till vävnaden?
- Katjonfärgämnen (basiskt) - har pos. laddning och gillar syra vävnadskomponenter
- Anjonfärgämnen (surt) - har neg. laddning och gillar basiska vävnadskomponenter
- Amortera färgämnen (neutrala) - har både pos. och neg. laddning, ex. indikatorfärgämnen
- Indifferenta färgämnen (varken pos. eller neg. laddning) - färgegenskapen beror på löslighet och dessa löser sig direkt i cell- eller vävnadsdelarna
Ge exempel på specialfärgning
- Ziehl-Neelsen för TBC-bakterier
- Grocott, för upptäckt av svamp
Vad är detta för färgning?
Vilken färg färgas respektive delar?
Grocott’s methenamine silver
- Svamp och protozoer färgas svart/brunt
- Bakgrunden blir grön
Vilka intermolekylära bindningar finns det?
- Van der Waals krafter (svaga, tillfälliga, dipol-dipol-bindningar)
- Dispersionskrafter (elektrostatiska attraktiva krafter)
- Dipol-dipol bindning (dipol är en molekyl där den ena änden är mera negativt laddad än den andra)
- Vätebindning (mellan vätemolekyler)
Vilka bindningar finns det mellan atomer i molekyler?
- Jonbindning (stark) -
- Katjoner (+) för basiska färger → metylenblått
- Anjoner (-) för sura färger → eosin
- Kovalent bindning (stark)
- Komplexbindning (mellan en jon och en metalljon)
- Hydrofoba / hydrofila krafter
Vad är betmedlets uppgift?
Betmedlet gör att färgen fäster bättre om färgämnet har en dålig affinitet till vävnaden; är en förmedlande länk mellan färgmolekyl och vävnad
Vilka är de vanligaste betmedlen + andra mindre vanliga?
- Aluminium (3 valenselektroner)
- Järn (3 valenselektroner)
Andra betmedel - krom, kalcium, bly, wolfram, molybden, beryllium
Vilka metaller eller metallsalter är vanligast att använda vid visualisering?
Vilka andra metalljoner kan vara användbara?
Vanligast: Al3+, Fe3+, Fe2+, Cr3+
Andra användbara metalljoner: silver, guld, bly, uranyl
Vad är visualiseringsprincipen / syftet med visualisering?
Syftet med visualisering är att skapa kontrast i den mikroskopiska bilden genom att ändra ljusbrytningen
Vad innebär direkt/substantiv färgningsmetod?
Då färglösningen ej behöver några tillsatser
Exempel - Eosin
Vad är indirekt/adjektiv färgningsmetod?
Där ett betmedel fodras som förmedlande länk mellan färgmolekyl och vävnad: innan färglösningen eller blandat med färglösningen
Exempel - HTX: betmedel blandat med färg
Vad är kromoforer för något?
- Grupper av atomer som får färgämnet att absorbera ljus
- Flera kromofora grupper krävs för absorption i det synliga området
Vad är kromogen?
Ett färgmedel, oftast en aromatisk förening
Vad är regressiv metod?
En överfärgning sker. Överskottet av färg löses bort (differentierar) tills optimal färgnyans erhålles (selektiv differentiering).
Oftast då färglösningen innehåller flera färger, där olika färmolekyler har olika storlek - ex. trikrom
Vad är detta för färgning?
Vad färgar den?
Hematoxylin-vanGieson
Färgar elastiska fibrer i vävnad / skapar kontrast mellan elastiska fibrer och övrig vävnad (ex. kärl i hud)
Vad kallas ett färgämnes färgbärande respektive färgbindande grupp?
- Färgbärande = kromofor
- Färgbindande = auxokrom
Ge exempel på indifferenta färger och berätta vad de färgar?
Ex. Sudan III, IV, Sudan svart B, Oljerött som Oil ned O
Färgar då:
- fettsubstanser (neutralfett)
Ge exempel på auxokroma grupper
- -OH (hydroxylgrupp)
- -NH2 (aminogrupp)
- -SH (mercapto)
Vad är progressiv metod?
Färgningen avbryts då bästa optimala färgnyans erhållits
Vad kan diffusionshastigheten hos färgmolekyler bero på?
- Molekyl/aggregat-storlek
- Lösningsmedel
- Koncentration
- pH
- Temperatur
Vad kan man påvisa med hjälp av metalljoner?
Om det finns reduktorer och oxidatorer i vävnaden
Vad är succedanfärgning?
Flera färglösningar efter varandra
Om färgämnet har dålig affinitet till vävnaden används betmedel. Ge exempel på betmedel.
- Forformolybden
- Fosforwolframsyra
- Järnklorid
- Kalialun = kalium + aluminiumsulfat
- Ammoniumalun = ammonium + aluminiumsulfat
- Järnalun = ferri + ammoniumsulfat
- Kromalun = krom + kaliumsulfat
Ge tre exempel på naturliga färgämnen, och berätta vad de är gjorda av
- Hematoxylin - trädbark från Kampeschträd
- Saffranin - krokus
- Karmin - sköldlus
Bokstavskodning används inom färgsubstanser. Vad står bokstavskoden M, S, W respektive Y för när det gäller färglösningar?
- M = blandning / mix
- S = lättlöslig / spritlöslig / soluble
- W = vattenlöslig
- Y = gulaktig / yellowish
Ge exempel på neutrala amfortera färger och berätta vad de färgar?
Mest känd är en kombination av metylenblått/azur och Eosin
Färgar då:
- parasiter i blodet
- blodkropper
Vilka prober/reagenser används vid IHC?
- DNA-prober
- RNA-prober
