Morfologisk metodik 1 Flashcards
Olika typer av prover, omhändertagande av prover
Histologi
Vävnadslära, ses makro- och makroskopiskt
Patologi
Läran om de sjukliga förändringarna i kroppen
Histopatologi
De sjukliga vävnads-rubbningars histologi
Cytologi
Cell-lära; läran om enskilda celler
Morfologi
Läran om organismens yttre form och inre struktur
Morfologisk metodik
Hantering och preparation av cell och vävnadsprover inför mikroskopisk analys
Histoteknik
Hantering - preparation av vävnader
Cytoteknik
Hantering - preparation av celler i kroppsvätska
PAD
Patologisk Anatomisk Diagnos
Vilka användningsområden finns för morfologisk metodik?
- Patologin är mycket viktig för behandlingen av patienter
- Hjälp vid diagnostisering och behandlingar av sjukdom hos patient
- Forskningsstudier av cellers påverkan från olika omgivande faktorer
Vilka olika typer av prover kommer till patologen?
- Avtryck
- Utstryk
- Biopsi-provexcision
- Operation-autopsy
Vad är ett avtryck?
Ett prov där vävnad trycks mot plattan
Ex. lymfkörtel vid misstanke om bröstcancer
Ge ett exempel på utstryk (provtyp)
Blodutstryk
Vad är biopsi-excision-provtagning?
Extraktion av cell/vävnad från patient; vart nålen sätts är viktigt eftersom olika celler hänger med
Vad kan hända vid biopsi av tumör/cysta och vad skall du tänka på vid biopsi av tumör/cysta vad gäller nål placering?
- Runt tumören/cystan finns de inflammatorisk vävnad vilket betyder att du endast kommer att få inflammatoriska celler om du missar tumören/cystan.
- Sticker du i mitten av tumören kommer du få nekrotiska celler pga nekros.
- Det kan också finnas intralesional blödning, träffar du detta område kommer du bara att få ut blod.
Du skall inte placera nålen i mitten utan strax om mitten för att få en så bra biopsi som möjligt.
Vad ska du tänka på vad gäller vad av prepareringsmetod?
- Vilken frågeställning som ska besvaras
- Vilken typ av vävnad provet består av
- Vilket analysinstrument som ska användas
- Frågeställning som efterfrågas av läkare
Vilka är prepareringsmomenten som ingår i rutinförfarandet för ett patologiskt prov?
- Provtagning - utskärning
- Fixering
- Inbäddning - dehydrering (kem. fix), klarning (kem. fix), infiltrering (kem. fix), inbäddning (kem. fix)
- Snittning - uppläggning, bränning / fasttorkning
- Visualisering - färgning
- Montering
Vad skall operationspersonal göra med ett prov vid operationsögonblicket?
Lägga vävnadsprovet i fixeringslösning eller frysa det
Undantag är bröst, som skickas färska
Vad innebär makroskopisk bedömning vid utskärning?
Vävnadsbiten och eventuella sjukliga förändringar beskrivs
Storlek, vikt, färg, form, sjuklig förändring i proportion till vävnad
Vad är viktigt att tänka på vid utskärning?
- Storlek
- Ta hänsyn till olika lager av organet
- Längsnitt / tvärsnitt
- Misstänkt patologisk förändring
- Resektionsranden
Vad är resektionsranden och varför är den viktig?
Resektionsranden är ett randområde mellan den patologiska förändringen och normalvävnad
Används för att se att hela förändringen är borttagen från patienten. Ses exempelvis ingen frisk vävnad vid resektionsrand finns sjuklig förändring kvar på/i patient
Vad är det viktigaste momentet vid preparatframställning?
Fixering
Vad är definitionen för idealisk fixering?
Idealisk fixering avbryter livsprocessen momentant och bevarar vävnaden så lik det levande tillståndet som möjligt
Vad händer i vävnaden vid fixering?
- Proteinerna och protoplasmatiska substanser stabiliseras och vävnaden hårdnar
- Enzymernas aktivitet minskar. Autolys förhindras
- Bakterier fäster ej på fixerade celler - ingen förruttnelse
- Gör cellulära substanser olösliga och motståndskraftiga mot processing i kommande lösningar
- Förbereder så att ett färgat preparat tydligt visar cellkärnarns mönster, de epiteliala cellmembranen och cytoplasman
Vad är artefakter?
Ej önskvärda saker som senare syns i mikroskopet
Veck, sprickor, luftbubblor, etc.
Vad beror valet av fixeringmetod och fixeringsmedel på?
Beror på val av prepareringsmetod
Man väljer fixeringsmedel beroende på vad det är som man ska leta efter av proteiner, kolhydrater och fetter - l**äkarens frågeställning
Vad är skillnaden på immersionsfixering och perfussionsfixering?
Immersionsfixering - vävnad placeras i en fixeringslösning, så att den täcks av vätskan
Perfussionsfixering - fixeringsmedel pumpas in i blodkärlen så att det sprids vidare till orgnanen
Vad finns det för typer av fixeringsmedel vid kemisk fixering?
Gelerande fixeringsmedel
Koagulerande fixeringsmedel
Vad är gelerande fixeringsmedel?
- Ett additivt fixeringsmedel
- Cross-linking: metylenbryggor bildas mellan proteinerna
- Strukturer bibehålls efter ingen denaturering av proteinerna sker
- Tertiärstruktur behålls med interna tvärbindningar + hydrofila grupper exponeras
- Dolda epitoper
- Till viss del reversibel
Ge exempel på gelerande fixeringsmedel
Formaldehyd
Glutaraldehyd
Osmiumtetraoxid
Vad är koagulerande fixeringsmedel?
- Det denaturerar vävnaden genom dehydrering
- Proteinstrukturen ändras
- Epitoperna hos antigen exponeras bättre - fördelaktigt för IHC
- Tertiärstrukturen öppnas + hydrofila och hydrofoba grupper exponeras
- Irreversibel reaktion
Ge exempel på koagulerande fixeringsmedel
Etanol
Aceton
Metanol
Pikrinsyra
Epitoper hos antigen kan maskeras och ej synas, hur då?
Beroende på bindningar inom och mellan proteinerna kan vissa epitoper naturligt vara gömda i av proteinets struktur
Vad ska volymen av fixeringsmedlet vara i förhållande till vävnaden?
Mängden 4% neutralt buffrat formalin (NBF) bör vara 10-20 gånger större än provets volym
Vad är den ungefärliga penetrationshastigheten vid kemisk fixering?
1 mm / timme
Vilka andra faktorer kan påverka den kemiska fixeringen?
pH
Osmolalitet
Jonstyrka
Vilken typ av vävnad kräver längre dehydreringstid?
Fettrik vävnad, som ex. bröstvävnad
Vad behöver du tänka på om det kommer in hård vävnad, exempelvis ben eller förkalkad vävnad?
Vävnaden behöver avkalkas så att den blir mjukare och lämplig för inbäddning och snittning
Vad kan användas som urkalkningsmedel?
Svaga syror, ex. myrsyra
Decalc (innehåller saltsyra) eller Parengy
EDTA-lösningar
Hur kan urkalkningsprocessen snabbas upp?
Med hjälp av värme eller mikrovågor
Vad är autopsi-prover?
Kan vara större vävnadsprov eller hela organ
Används för att förstå dödsorsaker, tex om patienten hade fettlever eller hjärnblödning
Vad är viktigt att tänka på när man urkalkar med starka syror?
Vävnaden kan förstöras, vilket gör att vi får en sämre histologi
Vilka fysiska metoder för fixering finns det?
Uppvärmning
Frys-torkning
Uppvärmning i mikrovågsugn
(Är sällan använda metoder inom medicinsk patologi)
Varför är EDTA-lösningar bra att använda vid urkalkning?
De bevarar proteinstrukturen och är bra vid immunohistokemi
Kan hårda vävnader bäddas in i något annat än paraffin?
Ja, de kan bäddas in i ett hårdare material som plast
Vad kan man frysa in vävnad med vid fysikalisk fixering?
Flytande kväve (-196ºC)
Torris - kolsyreis och alkoholen isopentan (-80ºC)
Vad snittas fryst vävnad med?
Kryostat
Vad är torris gjort av?
Kolsyreis och isopentan
Vad har vatten för funktion vid fysikalisk fixering, när vävnad fryses?
Vattnet fungerar som inbäddningsmedel och stabiliserar vävnaden och proteinerna, tillsammans med inbäddningen med OCT eller Tragakant
Vad är dehydrering?
Vatten avlägsnas genom en ökning av alkoholkoncentration
Vad används vid klarning?
Ett intermedium-medel blandbart med både dehydreringsmedel och infiltrationsmedel
Ex. xylen eller histoclear
Vad används vid infiltration?
Ett inert och stabiliserande medel
Ex. paraffin
Vad är viktigt att tänka på vid hantering av fryssnitt?
Hög smittorisk finns, eftersom vävnaden inte är behandlad kemiskt
Vilka instrument kan användas vid paraffinsnitt?
Slädmikroton eller rotationsmikroton
Hur tjocka får paraffinsnitt vara?
4 - 6 µm
Hur tjocka får fryssnitt vara?
4 - 6 µm
Vad skapas genom visualisering/färgning som möjliggör analys i mikroskop?
En kontrast mellan vävnaders olika sturkturer, celler och organeller
Varför används täckglas?
De skyddar vävnaden mot uttorkning och repor
Ger ett brytningsindex
Vad kan påverkas av fel vid fixering?
Det kan bli svårt att se detaljer i preparatet
Vilka typer av patientprov används till cytoplasmatisk diagnos?
- Abrasion
- Exfoliation
- Aspiration
- Smear
- Vätskebaserad cytologi
Vad är abrasio-prover?
Skrapning med hjälp av borste för cytologiska prover
Ex. för körtlar eller gynekologiska prover
Vad är en exfoliation?
Uppsamling av vätska från kroppen, innehållande celler som naturligt lossnat från epitelytan / slemhinnan
Ex. sputum (upphostning) eller urin
Vad är aspiration?
Utsugning av vätska
Ex. ryggmärgsvätska
Vilka olika typer av biopsinålar finns?
- Biopsi-spinalvätska
- Biopsi-finnål
- Biopsi-sternal
Vad är smear-prover?
Utstryksprover
Ex. gynekologiska prover med cyto-spatula
Varför är vätskebaserad cytologi så bra?
Har automatiserad preparering
Bättre provkvalitet
Säkerhet/miljö: vad ska du tänka på vid användning av formalin?
Hälsovådligt, arbeta på ventilerad arbetsplats
Använd rock och handskar
Samlas i särskild behållare
Säkerhet/miljö: vad ska du tänka på vid användning av xylen?
Organiskt lösningsmedel
Brandfarligt
Undvik inandning och hudkontakt
Använd dragskpå
Samlas i särskild behållare och skickas till destruktion
Säkerhet/miljö: vad ska du tänka på vid användning av etanol?
Organiskt lösningsmedel
Brandfarligt
Spolas ner i vasken med mycket vatten
Säkerhet/miljö: vad ska du tänka på vid användning av Mayer’s Hematoxylin?
Giftigt för vattenlevande organismer
Samlas i särskild behållare
Säkerhet/miljö: vad ska du tänka på vid användning av väteperoxid (30%)?
Starkt oxiderande medel, kan ge frätskador
Använd skyddshandskar
Kan spolas i vasken
Säkerhet/miljö: vad ska du tänka på vid användning av DAB?
CMR-ämne
Använd handskar, skyddsglasögon, skyddskläder
Jobba ALLTID i dragskåp
Samlas i särskild behållare och skickas till destruktion
Vad står CMR för?
Cancerframkallande, Mutagent, Reproduktionstoxiskt
