Labbhandledning 1 Flashcards
Färgning, snittning, inbäddning, IHC-färg, fryssnitt
Hur stora får vävnadsbitar vara?
15 x 15 x 4 mm
Vad ska man lägga märke till vid utskärning?
Patologiska förändringar, randområden mellan patologiska förändringar och normalvävnad, längdsnitt, tvärsnitt
Vad är dehydrering?
Avlägsnande av vatten från vävnad
Vad sker vid infiltrering av vävnad (utförs av dehydreringsapparat)?
Ett inert ämne (ex. paraffin) infiltrerar vävnaden, och därefter hårdnar och stabiliserar vävnaden
Hur tjocka ska snitten vara vid snittning?
2-6 µm
I vilken värme och tid bränns snitten fast på objektsglasen?
60°C, i 15-30 minuter
När används nedfrysning och fryssnitt av vävnad?
Vid snabbdiagnostik och vid känslig vävnad
Vad fryses vävnad i inför fryssnitt?
Flytande kväve, -200°C
Vilken maskin används för fryssnitt?
En kryostat
Vilken tjocklek har fryssnitten?
4-6 µm
Vad finns det för risker vid hantering av fryssnitt?
Smittorisk, eftersom vävnaden inte är behandlad med några kemiska medel
Vad är betmedel?
En länk mellan vävnaden och färgen
Vad har Mayers Hematoxylin för betmedel?
Mayers HTX är en basisk metallkomplexfärg, med betmedel = aluminium
Vad menas med deparaffinering?
Paraffinet avlängsnas med hjälp av xylen. Detta gör att färgmolekyler kan tränga in i vävnad
Vad menas med rehydrering?
Vatten återförs till vävnaden (genom sjunkande koncentrationer av alkohol)
Vad menas med dehydrering?
Vatten avlägsnas med hjälp av stigande koncentration av alkohol innan montering
När sker visualiseringen/färgningen?
Efter rehydreringen
Är Hematoxilyn basiskt eller surt?
Basiskt
Vad färgar HTX och vilken färg?
Negativt laddade nukleinsyror (kärnor och ribosomer) färgas blåa
Är Eosin basiskt eller surt?
Surt
Vad färgar Eosin och vilken färg?
Eosin färgar proteiner och övrig vävnad i en röd/rosa färg
Vad färgas och vilken färg i HTX-Eosin?
- Kärnor - blå
- Erytrocyter och eosinofila granula - ros till röd
- Cytoplasma - varierande nyanser av rosa
- Muskelfibrer - djupt rosaröd
Vad är principen för Grocott?
Polysackarider oxideras till aldehyder. Silvernitrat reduceras till metalliskt silver
Vilka felkällor finns vid grocott?
- Silvernitratlösningen filtreras och förvärms
- Föroreningar kan orsaka störande fällningar i snittet. Använd rena utensiler, rent vatten, rena kemikalier och plastpincett
- Ofärgat snitt - glömt kromsyra
- Inget silver syns - glömt natriumtiosulfat som gör att silvret kan fastna på snittet
Vad händer om du inte ser någon färg på Grocott?
Du har glömt kromsyra och då har polysackariderna inte har oxiderats till aldehyder
Vad har hänt om du inte ser något silver på preparatet vid Grocott?
Du har glömt natriumtiosulfat som gör att silvret kan fästa på snittet
Hur färgar Grocott?
- Svamp och protozoer - mörkbruna eller svarta
- Bakgrund - grön
Vad är principen för visualisering med indirekt metod (IHC)?
Beskriv hur täckglas-montering går till
Glasen monteras från xylen. En liten sträng Mountex monteringsmedel (Xylen-baserat) anbringas på objektsglaset
Täckglaset läggs på objektsglaset
Tryck försiktigt bort eventuella luftbubblor
Torka bort överflödigt monteringsmedel
Varför stannar man ibland i destvatten och ibland i 70%-etanol vid deparaffinering?
Allt beror på vad mina färger/metoder är baserade på
Varför blånar man?
Det sker en pH-förändring, vilket gör att kärnorna får en mer intensiv färg. Går från rödaktig till blå
Hur tjocka ska snitten vara fryssnittning respektive paraffinsnittning?
- Frys: 4-6 µm
- Paraffin: 2-5 µm
Du sitter och monterar, din montering blir bra, du ser inga luftbubblor. När du sedan kommer tillbaka ser du att de kommit luftbubblor under tiden du varit borta. Vad kan detta bero på?
Detta kan bero på att ditt snitt är tjockt och att du använt för lite lim
