Cellodling

Question 1

Vilka är de 3 viktiga vändpunkterna i historien, gällande cellodling?

Answer 1

Hemmagjorda medium

Standariserat medium

Antibiotika

Question 2

Vilka användningsområden finns för cellodling?

Answer 2

• Forskning - cellkulturer kan i vissa fall ersätta djurförsök, vilket för att man slipper etiska tillstånd
• Diagnostik
• Behandling - celltransplantationer
• Läkemedelsindustri - se läkemedels effekt
• In vitro fertilisering
• Tillverkning av monoklonala antikroppar

Question 3

Vilka är säkerhetsriskerna för laboranten vid cellodling?

Answer 3

• Virus/virusinfektion - ex. hepatit B, HIV
• Tumörceller
• Cellgifter (cytostatika)
• Tillväxtfaktorer - kan orsaka cancer
• Isotoper
• Prioner
• Tryptanblått - cancerogent

Question 4

Vad är viktigt att tänka på gällande arbetsutförande?

Answer 4

• Skyddskläder, handskar och rena skor
• LAF-bänk - används vid arbete med celler, homogenisering, spädning och tömning av rör
• Använd engångsbrukspipettspetsar
• Allt kosmetika är förbjudet - jäst växer gärna i kosmetika

Question 5

Hur hanteras avfall?

Answer 5

Samlas i speciella, täta behållare - autoklaveras och förstors

Skärande, stickande avfall samlas i speciella behållare för autoklavering och desinfektion innan bortskaffande eller återanvändning

Question 6

Vilka instrument används på laboratoriet vid cellodling?

Answer 6

• Laminar Air Flow-bänk
• Inkubator
• Centrifug
• Invertmikroskop

Question 7

Vad är en LAF-bänk?

Answer 7

LAF = Laminar Air Flow

Arbetsbänk med goda förhållanden för cellodling

Skyddar cellerna genom att tillåta ständigt luftflöde

Question 8

Vilken temperatur ska en CO₂-inkubator ha och varför?

Answer 8

37ºC, eftersom de flesta celltyperna trivs bäst i kroppsnära temperatur

Question 9

Vilken luftfuktighet ska en CO2​-inkubator ha och varför?

Answer 9

95 - 98%, nästan fullt mättad luft är optimal

Om luften inte är tillräckligt mättad kommer inte odlingsväggen mellan mediumet och cellerna att hålla. Om väggen försvinner, stiger osmolariteten och cellerna torkar ut

Question 10

Vilket procent CO₂ ska en CO₂​-inkubator ha och varför?

Answer 10

5% CO₂, pH 7.2 - 7.5

Koncentrationen av CO₂ är viktigt, eftersom CO₂ används i cellernas buffertsystem för att tåla pH-förändringar

Question 11

I vilken temperatur sker kort förvaring av celler?

Answer 11

-80ºC till -130ºC

Om -80ºC, kan hållas i 3 månader

Om under -130ºC, kan hållas längre tid

Question 12

Vilket ämne används till långtidsförvaring av celler?

Answer 12

Flytande kväve, -196ºC

Här kan inte enzymer fungera, inga metaboliska processer sker

Question 13

Vilka är säkerhetsriskerna för cellerna vid cellodling?

Answer 13

• Bakterier
• Mykoplasma
• Virus
• Svamp
• Prioner

Question 14

Vilka är symptomen att cellodlingen har blivit kontaminerad?

Answer 14

• Färgomslag
• Långsam tillväxtlighet
• En förändrad struktur på celler
• Cellprodukter - om de minskar = kontamination
• Celler flyter upp till ytan av mediumet - innebär celldöd

Question 15

Vad består ett basalt odlingsmedium av?

Answer 15

• Aminosyror (Arg, Cys, Glu, His och Tyr + ESS. AA). 13 måste finnas, de essentiella + 5
• Vitaminer
• Glukos
• Salter
• pH 7.2 - 7.5 + pH-indikator
• Buffertsystem (koldioxid / bikarbonat)
• Osmolaritet (ca. 290 osmo/l) - samma som vår kropp

Question 16

Vad innehåller ett komplett medium?

Answer 16

• Basalt medium
• Antibiotika (PEST)
• Fetal kalv serum (FCS)
• Tillväxtfaktorer
• Insulin

Viktigt att dessa tillsatser inte förändrar osmolariteten för mycket

Question 17

Det finns två olika typer av cellkulturer, som skiljer sig åt. Vilka är dessa?

Answer 17

• Adherenta celler - behöver en yta att fästa till
• Suspensionsceller - skvalpar omkring utan problem

Question 18

Vilka celler i kroppen är adherenta?

Answer 18

• Epitelceller
• Bindvävsceller
• Muskelceller
• Fibroblaster

Question 19

Var i kroppen kan suspensionsceller hittas?

Answer 19

I vävnadsvätskor

Question 20

Hur går odling av adherenta celler till? Vad är de olika stegen, vad heter de och vad händer?

Answer 20

1. Primär kultur (passage 1): vävnad från patient läggs i medium. Delas (sterilt) i mindre bitar och sprids ut i plattor med medium. Inom 24h tillväxt har vi primärt medium. Vävnadsodling; hud, muskel, nervvävnad
2. Cellinje: celler från primärkultur, passage 2, har splittrats och överförts till nya odlingsbehållare. Från denna ounkt framåt talar vi om cellinje.
3. Etablerad cellinje: kan genomgå oändliga passager (immortaliserad). Hur? Cellerna transformeras till cancerceller

Question 21

Vilka två typer av adhesion finns?

Answer 21

• Passiv adhesion - sekunder - dåligt eftersom cellerna dör
• Aktiv adhesion - minuter/timmar - bra eftersom cellerna lever

Question 22

Vilka är stegen för aktiv adhesion?

Answer 22

1. Absorption, adhenssionsfaktorer: fetuin, fibronektin. Cellen tillverkar proteiner för att möjliggöra vidhäftning (ligander)
2. Filopodia skadas strukturer som möjliggör att cellen kopplar till sina ligander
3. Vidhäftning sker
4. Cellen breder ut sig och växer

Question 23

När är det dags att skörda cellerna?

Answer 23

Vid konfluens 75-90%

Då börjar det bli trångt för cellerna, och för fortsatt tillväxt måste de delas, skördas eller flyttas

Question 24

Hur lossar man på celler?

Answer 24

Mekaniskt - skaka, skrapa

Enzymatiskt - med trypsin

Question 25

Vad ska du tänka på vid nedfrysning av celler?

Answer 25

• Ska ske efter få passager från primär kultur eller cellinje
• Cellerna ska ha bra tillväxt och inga infektioner
• Rätt koncentration av kryoskyddande ämne DMSO
• Långsam nedfrysning
• Rätt förvaringstemperatur

Question 26

Hur snabbt ska celler frysas ned och varför?

Answer 26

1 - 3ºC / minut

Cellens vätska får ej bli kristall, för då spricker den

Långsam process ökar vätskans osmolaritet, cell dehydreras sakta

Question 27

Hur går upptiningen av celler till?

Answer 27

Snabbt: 1 minut i 37ºC

Question 28

Vad kan en tillväxtkurva användas till?

Answer 28

• Effekten av läkemedel
• Effekten av celltransfektion, tillväxtfaktorer, hormon, mm.
• Test och jämförelse av olika odlingsmedier
• Bestämning av tillåtna antal passager för en viss celltyp

Question 29

Vad beräknas med hjälp av tillväxtkurvans exponentiella fas?

Answer 29

Den används till beräkning av fördubblingstid