Cellodling Flashcards
Vilka är de 3 viktiga vändpunkterna i historien, gällande cellodling?
Hemmagjorda medium
Standariserat medium
Antibiotika
Vilka användningsområden finns för cellodling?
- Forskning - cellkulturer kan i vissa fall ersätta djurförsök, vilket för att man slipper etiska tillstånd
- Diagnostik
- Behandling - celltransplantationer
- Läkemedelsindustri - se läkemedels effekt
- In vitro fertilisering
- Tillverkning av monoklonala antikroppar
Vilka är säkerhetsriskerna för laboranten vid cellodling?
- Virus/virusinfektion - ex. hepatit B, HIV
- Tumörceller
- Cellgifter (cytostatika)
- Tillväxtfaktorer - kan orsaka cancer
- Isotoper
- Prioner
- Tryptanblått - cancerogent
Vad är viktigt att tänka på gällande arbetsutförande?
- Skyddskläder, handskar och rena skor
- LAF-bänk - används vid arbete med celler, homogenisering, spädning och tömning av rör
- Använd engångsbrukspipettspetsar
- Allt kosmetika är förbjudet - jäst växer gärna i kosmetika
Hur hanteras avfall?
Samlas i speciella, täta behållare - autoklaveras och förstors
Skärande, stickande avfall samlas i speciella behållare för autoklavering och desinfektion innan bortskaffande eller återanvändning
Vilka instrument används på laboratoriet vid cellodling?
- Laminar Air Flow-bänk
- Inkubator
- Centrifug
- Invertmikroskop
Vad är en LAF-bänk?
LAF = Laminar Air Flow
Arbetsbänk med goda förhållanden för cellodling
Skyddar cellerna genom att tillåta ständigt luftflöde
Vilken temperatur ska en CO2-inkubator ha och varför?
37ºC, eftersom de flesta celltyperna trivs bäst i kroppsnära temperatur
Vilken luftfuktighet ska en CO2-inkubator ha och varför?
95 - 98%, nästan fullt mättad luft är optimal
Om luften inte är tillräckligt mättad kommer inte odlingsväggen mellan mediumet och cellerna att hålla. Om väggen försvinner, stiger osmolariteten och cellerna torkar ut
Vilket procent CO2 ska en CO2-inkubator ha och varför?
5% CO2, pH 7.2 - 7.5
Koncentrationen av CO2 är viktigt, eftersom CO2 används i cellernas buffertsystem för att tåla pH-förändringar
I vilken temperatur sker kort förvaring av celler?
-80ºC till -130ºC
Om -80ºC, kan hållas i 3 månader
Om under -130ºC, kan hållas längre tid
Vilket ämne används till långtidsförvaring av celler?
Flytande kväve, -196ºC
Här kan inte enzymer fungera, inga metaboliska processer sker
Vilka är säkerhetsriskerna för cellerna vid cellodling?
- Bakterier
- Mykoplasma
- Virus
- Svamp
- Prioner
Vilka är symptomen att cellodlingen har blivit kontaminerad?
- Färgomslag
- Långsam tillväxtlighet
- En förändrad struktur på celler
- Cellprodukter - om de minskar = kontamination
- Celler flyter upp till ytan av mediumet - innebär celldöd
Vad består ett basalt odlingsmedium av?
- Aminosyror (Arg, Cys, Glu, His och Tyr + ESS. AA). 13 måste finnas, de essentiella + 5
- Vitaminer
- Glukos
- Salter
- pH 7.2 - 7.5 + pH-indikator
- Buffertsystem (koldioxid / bikarbonat)
- Osmolaritet (ca. 290 osmo/l) - samma som vår kropp
Vad innehåller ett komplett medium?
- Basalt medium
- Antibiotika (PEST)
- Fetal kalv serum (FCS)
- Tillväxtfaktorer
- Insulin
Viktigt att dessa tillsatser inte förändrar osmolariteten för mycket
Det finns två olika typer av cellkulturer, som skiljer sig åt. Vilka är dessa?
- Adherenta celler - behöver en yta att fästa till
- Suspensionsceller - skvalpar omkring utan problem
Vilka celler i kroppen är adherenta?
- Epitelceller
- Bindvävsceller
- Muskelceller
- Fibroblaster
Var i kroppen kan suspensionsceller hittas?
I vävnadsvätskor
Hur går odling av adherenta celler till? Vad är de olika stegen, vad heter de och vad händer?
- Primär kultur (passage 1): vävnad från patient läggs i medium. Delas (sterilt) i mindre bitar och sprids ut i plattor med medium. Inom 24h tillväxt har vi primärt medium. Vävnadsodling; hud, muskel, nervvävnad
- Cellinje: celler från primärkultur, passage 2, har splittrats och överförts till nya odlingsbehållare. Från denna ounkt framåt talar vi om cellinje.
- Etablerad cellinje: kan genomgå oändliga passager (immortaliserad). Hur? Cellerna transformeras till cancerceller
Vilka två typer av adhesion finns?
- Passiv adhesion - sekunder - dåligt eftersom cellerna dör
- Aktiv adhesion - minuter/timmar - bra eftersom cellerna lever
Vilka är stegen för aktiv adhesion?
- Absorption, adhenssionsfaktorer: fetuin, fibronektin. Cellen tillverkar proteiner för att möjliggöra vidhäftning (ligander)
- Filopodia skadas strukturer som möjliggör att cellen kopplar till sina ligander
- Vidhäftning sker
- Cellen breder ut sig och växer
När är det dags att skörda cellerna?
Vid konfluens 75-90%
Då börjar det bli trångt för cellerna, och för fortsatt tillväxt måste de delas, skördas eller flyttas
Hur lossar man på celler?
Mekaniskt - skaka, skrapa
Enzymatiskt - med trypsin
Vad ska du tänka på vid nedfrysning av celler?
- Ska ske efter få passager från primär kultur eller cellinje
- Cellerna ska ha bra tillväxt och inga infektioner
- Rätt koncentration av kryoskyddande ämne DMSO
- Långsam nedfrysning
- Rätt förvaringstemperatur
Hur snabbt ska celler frysas ned och varför?
1 - 3ºC / minut
Cellens vätska får ej bli kristall, för då spricker den
Långsam process ökar vätskans osmolaritet, cell dehydreras sakta
Hur går upptiningen av celler till?
Snabbt: 1 minut i 37ºC
Vad kan en tillväxtkurva användas till?
- Effekten av läkemedel
- Effekten av celltransfektion, tillväxtfaktorer, hormon, mm.
- Test och jämförelse av olika odlingsmedier
- Bestämning av tillåtna antal passager för en viss celltyp
Vad beräknas med hjälp av tillväxtkurvans exponentiella fas?
Den används till beräkning av fördubblingstid
