Brainscape's Knowledge GenomeTM

Browse over 1 million classes created by top students, professors, publishers, and experts.


See full index

BMA031, Morfologisk metodik och cellodling > Prepareringstekniker för elektronmikroskopi > Flashcards

Prepareringstekniker för elektronmikroskopi Flashcards

1
Q

Vilka krav måste ställas på vårt preparat för att det ska kunna mikroskoperas i TEM?

A
  • Vakuum → dehydrering
  • e- transmission → tunnsnittning
  • e- osynlig → kontrastering
  • Högspänning → stabilitet
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Hur prepareras vävnad för TEM?

A
  1. Fixering
  2. Dehydrering
  3. Inbäddning
  4. Snittning
  5. Kontrastering
  6. Mikroskopering
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Vilken fysikalisk fixering görs (TEM)?

A

Frysning (cryo), mikrovågsbehandling

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Vilka krav finns för den kemiska fixeringen (TEM)?

A
  • Lämplig jonsammansättning
  • Lämplig osmolaritet
  • Förmåga att behålla konstant pH-värde
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Vad är dubbelfixering, vilka sorts bitar används det på och hur går det till?

A

Används vid små vävnadsbitar (ca 1 mm)

  1. Primärfixering med formaldehyd, glutaraldehyd

Vanligt med kombinationsfixering bestående av båda aldehyderna

  1. Postfixering med osmiumtetraoxid (tungmetall)

“En bloc”-behandling med t.ex. uranylacetat, garvsyra

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Krav för inbäddning av preparat för TEM?

A
  • Låg viskositet, lättflytande
  • Uniform polymerisering (härdning)
  • Ingen volymförändring
  • Lämplig hårdhet
  • Stabil och jämn kvalitet
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Vad bäddas preparaten in med (TEM)?

A

Härdplast - epoxyplast eller akrylatplats

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

För- och nackdel med epoxyplast?

A

Fördel - krymper 2%, jämn polymerisering, stabil i elektronstrålen

Nackdel - hydrofob, högviskös, polymeriserar i värme (60ºC)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

För- och nackdel med akrylatplast?

A

Fördel - hydrofil, lågviskös, polymeriserar både i rumstemp. / minustemp, UV-ljus

Nackdel - krymper 10-20%, ojämn polymerisering, mindre stabil i elekronstrålen

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Vad sker snittning med (TEM)?

A

Ultramikrotom / ultrotom

Glas- eller diamantkniv

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Hur går kontrastering till och varför görs det?

A

Varför? Ökar effekten av den elastiska avlänkningen - scattering, alltså det som skapar bild

Hur? Grids med ultratunna snitt utsätts för lösningar av tungmetaller, ex. uranyl, bly, wolfram

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Vad dehydreras TEM-preparat med?

A

Etanol

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Snittning av TEM-preparat?

A
  1. “Tjocksnitt”, ca 1 µm
  2. Tunnsnitt på grid, ca 60 nm
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Vad är konduktiv montering och vad händer om det inte används?

A

Det innebär att preparatet sitter fast på metallen (är jordat).

Annars kan man få överslag i mikroskopet

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Vad beläggs SEM-preparatets yta med och varför?

A

Beläggs ofta med tungmetaller, för att öka den sekundära strålningen

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Hur går vävnadspreparering till (SEM)?

A
  1. Primärfixering: aldehydfixering
  2. Postfixering enl. OTOTO-metod = upprepad osmifiering:
    • Osmium(VIII)tetroxid
    • Thiocarbohydrazide
    • Osmium(VIII)tetroxid
    • Thiocarbohydrazide
    • Osmium(VIII)tetroxid
  3. Dehydrering: stigande konc etanol (70-100%)
  4. Torkning: Hexametyldisilazande; t-butanol-sublimation; critical point drying; frystorkning
  5. Sputtercoating - tunn film av Au, Cr, Pd
17
Q

Skillnad mellan TEM och SEM?

A
18
Q

Vad är pre-embedding?

A

Immunoinkubering innan postfixering, dehydrering och inbäddning

19
Q

Vad är post-embedding?

A

Immunoinkubering görs på plast-inbäddade snitt (akrylatplast)

20
Q

Vad är kryosnittning?

A
  • Görs vid -100ºC till -120ºC
  • Snitt immunoinkuberas på grids
  • Kontrasteras med uranyl
  • Snitten inbäddas i metylcellulosa
21
Q

Vad är PLT-metoden (post-embedding)?

A

PLT - Progressive Lowering of Temperature

  • Kemisk “lättfixering”
  • Dehydrering med etanol under progressiv temperatursänkning (-30ºC till -50ºC)
  • Inbäddning i akrylatplast vid -30ºC till -50ºC
  • Polymerisering med UV-ljus
  • Snittning i rumstemperatur
22
Q

Hur går detektering till vid immunocytokemi för TEM?

A

Sker med hjälp av guldmärkta antikroppar, där guldstorleken är 1-25 nm

23
Q

Vad är problemet med immunocytokemi för TEM?

A

Antigen-epitoperna förstörs av traditionell TEM-preparering. Det är en kompromiss mellan att behålla antigeniciteten och god morfologi. Krävs god planering för att bestämma metod.

24
Q

Vilka metoder finns för immunocytokemi för TEM?

A

Pre-embedding, post-embedding, kryosnittning

25
Q

Varför kombinationsfixerar man med både glutaraldehyd och formaldehyd vid TEM?

A

Användningen av en aldehydblandning kan kompensera för nackdelarna som finns hos glutaraldehyd (långsam penentreringshastighet) och formaldehyd (mindre stabil fixering) när de appliceras individuellt

BMA031, Morfologisk metodik och cellodling (16 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2024 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions