Gammal tenta, 2018

Question 1

Vad är skillanden på denaturerande och gelerande fixeringsmedel?

Answer 1

Gelerande fixeringsmedel

• Behåller tertiärstrukturen på proteinerna
• Bildar metylenbryggor mellan proteinerna
• Additivt fixeringsmedel
• Till viss del reversiblel

Denaturerande fixeringsmedel

• Ändrar proteinstrukturen, genom dehydrering
• Bryter metylenbryggor
• Irreversibel reaktion

Question 2

Är formaldehyd ett denaturerande eller ett gelerande fixeringsmedel?

Answer 2

Gelerande

Question 3

Nämn exempel på gelerande fixeringsmedel

Answer 3

Formaldehyd, glutaraldehyd, osmiumtetraoxid

Question 4

Ge exempel på denaturerande fixeringsmedel

Answer 4

Etanol, metanol, aceton, pikrinsyra

Question 5

Vilket fixeringsmedel är det vanligaste man använder vid kemisk fixering av vävnader som skall paraffininbäddas?

Answer 5

Formalin - 4% formaldehyd

Question 6

Nämn en fördel respektive nackdel med formalin

Answer 6

• Fördel - konserverar vävnadens struktur bra, eftersom proteiner inte denatureras
• Nackdel - tar lång tid, hälsofarligt medel, epitoperna kan gömmas

Question 7

Vilken koncentration har formalin vid kemisk fixering?

Answer 7

4%

Question 8

Vilken volym ska fixeringsmedel ha, i förhållande till vävnadens volym?

Answer 8

10-20 gånger mer

Question 9

Vilken fördel finns det med att perfusionsfixera en vävnad istället för att immersionsfixera den?

Answer 9

Perfusionsfixering är en snabbare metod

Fixeringsmedlet sprids till hela kroppen och tränger in i all vävnad

Question 10

Vid utskärning av tumörinnehållande vävnad är man särskilt intresserad av resektionsrand-området. Vilket område menar man då? Varför är man intresserad av detta område?

Answer 10

Resektionsranden är området runt tumören där frisk vävnad finns. Används för att säkerställa att all sjuklig vävnad har tagits bort

Question 11

Varför vill man ha mindre bitar inför preparering?

Answer 11

Lättare att snitta mindre bitar

Utskärning till mindre bitar ska ge en bättre bild av sjuklig förändring

Paraffin måste nå överallt

Question 12

Vilken storlek är vanligast att man skär vävnadsbitarna i?

Answer 12

15 x 15 x 4mm

Tjocklek är viktigast att hålla koll på

Question 13

Hur behandlas vävnaden, från att vävnadsbiten är utskuren och ligger i kemisk fixering tills att det är en färdig paraffinkloss?

Question 14

Vävnad som innehåller hårdsubstans måste behandlas med ”urkalkningsmedel” innan den kan prepareras och snittas på vanligt vis (paraffinsnittning). Vilken/vilka lösningar lämpar sig som urkalkningsmedel?

• Formaldehyd
• EDTA
• Myrsyra
• Etanol
• Saltsyra
• Xylene

Answer 14

• EDTA
• Myrsyra
• Saltsyra

Question 15

Om man vid snittning skall tillverka flera objektglas av samma vävnadspreparat (för att möjliggöra olika färgningsmetoder på samma vävnad) så skall man alltid lägga snitten åt samma håll. Varför gör man så?

Answer 15

Om man färgar med olika metoder, och vill hitta samma position i vävnaden, underlättas det med att vävnaden ligger likadant

Question 16

• Vilken snittjocklek brukar man eftersträva vid paraffinsnittning?
• Varför tycker man att detta är en lämplig snittjocklek?

Answer 16

4 - 6 µm

Det representerar ett cellager

Question 17

När och varför föredrar man ibland att utföra en frysning av vävnad följt av fryssnittning, istället för preparering inför paraffininbäddning följt av paraffinsnittning?

Answer 17

• Snabbedömning, ex. vid operation att för bedöma om mer ska skäras ut
• Känsliga vävnader som ej är motsåndiga mot kemikalier som krävs - muskler, fett, fettvävnad (CNS)
• Antigen bevaras (för IHC)

Question 18

Vid kärnfärgning med hjälp av Hematoxylin (HTX) används alltid ett betmedel. Vilken funktion har detta betmedel?

Answer 18

Det vanligaste betmedlet för HTX är aluminium eller järn

Är en förmedlande länk som fodras mellan färgmolekyl och vävnad

Question 19

Är Mayers Hematoxylin som vi använde på laborationen en direkt/substantiv metod eller en indirekt/adjektiv metod?

Answer 19

En indirekt/adjektiv metod eftersom betmedel används

Question 20

Vilka är de 2 vanligaste lösningsmedlen i färglösningar (dvs det man löser färgen i)?

Answer 20

Dest. H₂O eller 70%-etanol

Question 21

Nedan ser du en schematisk bild på ett färgämne. Märk ut vad som är: ”kromofor grupp”, ”auxokrom grupp” och ”kromogen grupp”.

Markera också vad som ger färgen = den färgbärande gruppen.

Answer 21

• OH - auxokrom
• NO₂ - kromofor, färgbärande grupp
• Hela cirkeln - kromogen

Question 22

Vad är skillnaden på progressiv och en regressiv färgning?

Answer 22

• Progressiv - färgar fram tills önskad färg uppnås
• Regressiv - överfärgar och sedan tvätta bort färg med syror, alkohol, H₂O. Oftast färgning med flera färger.

Question 23

Vid metallimpregnering, vad är skillnaden på en argentaffin reaktion och en argyrofil reaktion?

Answer 23

• Argentaffin - vävnaden reducerar silvernitrat till metalliskt silver
• Argyrofil - kräver behandling med reducerande ämne för att få ut önskad effekt

Question 24

Nämn två reaktiva grupper i vävnad

Answer 24

• Nukleinsyror (DNA/RNA)
• Proteiner
• Sura heteropolysackarider

Question 25

Vilken färg har cellkärnorna när man lyfter upp sitt glas ur kyvetten med hematoxylin?

Answer 25

Röd-aktiga (svag färg)

Question 26

Vilken färg har kärnorna när man är klar med hematoxylinfärgningen?

Answer 26

Mörkblå

Question 27

Vad är det som gör att kärnan får sin slutliga färg efter hematoxylinfärgning?

Answer 27

Preparatet blånas med kranvatten vilket gör att det sker en pH-förändring

Question 28

Reduceras eller oxideras silverjoner till metalliskt silver i Grokott-färgningen?

Answer 28

Reduceras till metalliskt silver

Question 29

Varför använder man guldklorid i Grokott-färgningen?

Answer 29

Förstärker instensitet på målstrukturer och reducerar färg på bakgrund

Question 30

Du skall göra en IHC-inmärkning med en antikropp på ett stort antal snitt. Den primära antikroppen skall ha en spädning på 1:150. Du måste göra en total volym på minst 3000 μl (eller så nära denna volym som är rimligt) för att det skall räcka till alla snitten. Hur mycket antikropp skall du ta och hur mycket PBS (diluent) skall du ta för att få korrekt spädning och volym?

Answer 30

3000 / 150 = 20

1 + 149

1 x 20 + 149 x 20

• 20 µl primär antikropp
• 2980 µl PBS

Question 31

Vad innebär affinitet?

Answer 31

Bindningsförmåga, styrkan i reaktionen mellan antigen epitop och antikropp

Question 32

Vad innebär aviditet?

Answer 32

Sammanlagda styrkan mellan en antikropp bindning site och antigen

Question 33

Vad är skillnaden mellan Cytolyt och Preservlösning vid ThinPrep?

Answer 33

Metanolbaserade buffrade konserveringslösningar

Cytolyt - ett transport medium, innehåller 14-20% metanol, kan ej avdöda mikrober men kan reducera dem

Preservcyt - ett förvaringsmedium, bibehåller cellernas immunreaktivitet och förhindrar korsreaktioner och bakrgundsfärg, innehåller 30-60% metanol

Question 34

Vid ThinPrep, varför används DTT, och till vilka provtyper?

Answer 34

DTT (ditiotrietol) löser upp slem och bryter svavelbindnignar

För mukösa prover, endast från övriga luftvägar

Celler fastnar vanligtvis i muccin, och det tas bort av DTT

Question 35

Ge exempel på 2 ”ljus-”/elektronkällor som används vid EM

Answer 35

• Glödtråd - wolframtråd
• LaB6 - lanthanum hexaboride
• FEG - field emission gun

Question 36

Varför använder man sig av en kombinationsfixering bestående av glutaraldehyd och paraformaldehyd för vävnadsprover till TEM?

Answer 36

Formaldehyd penetrerar vävnaden snabbare (än glutaraldehyd), medan glutaraldehyd bevarar strukturer bättre (än formaldehyd). I en blandning, kompleterar dessa varandra

Question 37

Inkubatorer som används för cellodling måste fylla minst tre kriterier:

• Temperatur 37°C
• Luftfuktiget >95-98%
• CO2 5%

Varför?

Answer 37

• Temperatur 37°C - celler trivs bäst i denna temperatur, och det är för att det är den optimala tillväxttemperaturen
• Luftfuktiget >95-98% - förhindrar att mediumet avdunstar och cellerna torkar ut
• CO2 5% - CO₂ ingår i cellernas buffertsystem, håller pH 7.2 - 7.5

Question 38

Nämn minst 3 infektionskällor vid cellodlingen? (mikroorganismer)

Answer 38

• Mykoplasma
• Bakterier
• Virus
• Svamp
• Prioner

Question 39

Vad är skillnaderna mellan en basal och ett komplettmedium?

Answer 39

Basalmedium ger näringsämnen så att celler kan leva och växa

Komplettmedium skyddar cellerna eftersom de förlorar sina försvarsmekanismer vid cellodling

Komplettmedium = basalmedium + antibiotika, insulin, tillväxtfaktorer.

Question 40

Beskriv passiv respektive aktiv adhesion? Vilken bör man undvika?

Answer 40

• Passiv - fäster snabbt men dör
• Aktiv - fäster långsammare men effektivare, kan göra ämnesutbyte så att de överlever

UNDVIK PASSIV ADHESION

Question 41

Används embryonala stamceller eller adulta stamceller vid benmärgstransplantation?

Answer 41

Adulta benmärgstransplantation

Question 42

Förklara vad reprogrammering är och ge två exempel.

Answer 42

Vid kloning förs en cellkärna från en differentierad cell in i ett ägg utan egen cellkärna

• Ny individ genom SCNT
• ESC/ESC-liknande genom SCNT eller iPS

Question 43

Nämn två typer av aberrationer (avbildningsfel) vid ljusmikroskopi?

Answer 43

• Sfärisk Aberration betyder att linsens centrala delar och dess perifera delar har olika fokallängd och yttrar sig praktiskt som att man inte kan får en skarp bild någonstans. Strålar som egentligen ska gå mot fokus bryts i stället på ett kortare avstånd. Hela bilden blir alltså suddig
• Kromatisk aberration betyder att en lins har olika fokallängder för olika våglängder eftersom brytningsindex är olika

Question 44

Vad menas med brytningsindex (refraktivt index)?

Answer 44

Ett tal som bestämmer ljusets hastighet i ett material i förhållande till ljushastigheten i vakuum

Ljuset förändrar sin hastighet i olika medier, beroende på dess densitet/täthet