Gammal tenta, 2018 Flashcards
Vad är skillanden på denaturerande och gelerande fixeringsmedel?
Gelerande fixeringsmedel
- Behåller tertiärstrukturen på proteinerna
- Bildar metylenbryggor mellan proteinerna
- Additivt fixeringsmedel
- Till viss del reversiblel
Denaturerande fixeringsmedel
- Ändrar proteinstrukturen, genom dehydrering
- Bryter metylenbryggor
- Irreversibel reaktion
Är formaldehyd ett denaturerande eller ett gelerande fixeringsmedel?
Gelerande
Nämn exempel på gelerande fixeringsmedel
Formaldehyd, glutaraldehyd, osmiumtetraoxid
Ge exempel på denaturerande fixeringsmedel
Etanol, metanol, aceton, pikrinsyra
Vilket fixeringsmedel är det vanligaste man använder vid kemisk fixering av vävnader som skall paraffininbäddas?
Formalin - 4% formaldehyd
Nämn en fördel respektive nackdel med formalin
- Fördel - konserverar vävnadens struktur bra, eftersom proteiner inte denatureras
- Nackdel - tar lång tid, hälsofarligt medel, epitoperna kan gömmas
Vilken koncentration har formalin vid kemisk fixering?
4%
Vilken volym ska fixeringsmedel ha, i förhållande till vävnadens volym?
10-20 gånger mer
Vilken fördel finns det med att perfusionsfixera en vävnad istället för att immersionsfixera den?
Perfusionsfixering är en snabbare metod
Fixeringsmedlet sprids till hela kroppen och tränger in i all vävnad
Vid utskärning av tumörinnehållande vävnad är man särskilt intresserad av resektionsrand-området. Vilket område menar man då? Varför är man intresserad av detta område?
Resektionsranden är området runt tumören där frisk vävnad finns. Används för att säkerställa att all sjuklig vävnad har tagits bort
Varför vill man ha mindre bitar inför preparering?
Lättare att snitta mindre bitar
Utskärning till mindre bitar ska ge en bättre bild av sjuklig förändring
Paraffin måste nå överallt
Vilken storlek är vanligast att man skär vävnadsbitarna i?
15 x 15 x 4mm
Tjocklek är viktigast att hålla koll på
Hur behandlas vävnaden, från att vävnadsbiten är utskuren och ligger i kemisk fixering tills att det är en färdig paraffinkloss?
Vävnad som innehåller hårdsubstans måste behandlas med ”urkalkningsmedel” innan den kan prepareras och snittas på vanligt vis (paraffinsnittning). Vilken/vilka lösningar lämpar sig som urkalkningsmedel?
- Formaldehyd
- EDTA
- Myrsyra
- Etanol
- Saltsyra
- Xylene
- EDTA
- Myrsyra
- Saltsyra
Om man vid snittning skall tillverka flera objektglas av samma vävnadspreparat (för att möjliggöra olika färgningsmetoder på samma vävnad) så skall man alltid lägga snitten åt samma håll. Varför gör man så?
Om man färgar med olika metoder, och vill hitta samma position i vävnaden, underlättas det med att vävnaden ligger likadant
- Vilken snittjocklek brukar man eftersträva vid paraffinsnittning?
- Varför tycker man att detta är en lämplig snittjocklek?
4 - 6 µm
Det representerar ett cellager
När och varför föredrar man ibland att utföra en frysning av vävnad följt av fryssnittning, istället för preparering inför paraffininbäddning följt av paraffinsnittning?
- Snabbedömning, ex. vid operation att för bedöma om mer ska skäras ut
- Känsliga vävnader som ej är motsåndiga mot kemikalier som krävs - muskler, fett, fettvävnad (CNS)
- Antigen bevaras (för IHC)
Vid kärnfärgning med hjälp av Hematoxylin (HTX) används alltid ett betmedel. Vilken funktion har detta betmedel?
Det vanligaste betmedlet för HTX är aluminium eller järn
Är en förmedlande länk som fodras mellan färgmolekyl och vävnad
Är Mayers Hematoxylin som vi använde på laborationen en direkt/substantiv metod eller en indirekt/adjektiv metod?
En indirekt/adjektiv metod eftersom betmedel används
Vilka är de 2 vanligaste lösningsmedlen i färglösningar (dvs det man löser färgen i)?
Dest. H2O eller 70%-etanol
Nedan ser du en schematisk bild på ett färgämne. Märk ut vad som är: ”kromofor grupp”, ”auxokrom grupp” och ”kromogen grupp”.
Markera också vad som ger färgen = den färgbärande gruppen.
- OH - auxokrom
- NO2 - kromofor, färgbärande grupp
- Hela cirkeln - kromogen
Vad är skillnaden på progressiv och en regressiv färgning?
- Progressiv - färgar fram tills önskad färg uppnås
- Regressiv - överfärgar och sedan tvätta bort färg med syror, alkohol, H2O. Oftast färgning med flera färger.
Vid metallimpregnering, vad är skillnaden på en argentaffin reaktion och en argyrofil reaktion?
- Argentaffin - vävnaden reducerar silvernitrat till metalliskt silver
- Argyrofil - kräver behandling med reducerande ämne för att få ut önskad effekt
Nämn två reaktiva grupper i vävnad
- Nukleinsyror (DNA/RNA)
- Proteiner
- Sura heteropolysackarider
Vilken färg har cellkärnorna när man lyfter upp sitt glas ur kyvetten med hematoxylin?
Röd-aktiga (svag färg)
Vilken färg har kärnorna när man är klar med hematoxylinfärgningen?
Mörkblå
Vad är det som gör att kärnan får sin slutliga färg efter hematoxylinfärgning?
Preparatet blånas med kranvatten vilket gör att det sker en pH-förändring
Reduceras eller oxideras silverjoner till metalliskt silver i Grokott-färgningen?
Reduceras till metalliskt silver
Varför använder man guldklorid i Grokott-färgningen?
Förstärker instensitet på målstrukturer och reducerar färg på bakgrund
Du skall göra en IHC-inmärkning med en antikropp på ett stort antal snitt. Den primära antikroppen skall ha en spädning på 1:150. Du måste göra en total volym på minst 3000 μl (eller så nära denna volym som är rimligt) för att det skall räcka till alla snitten. Hur mycket antikropp skall du ta och hur mycket PBS (diluent) skall du ta för att få korrekt spädning och volym?
3000 / 150 = 20
1 + 149
1 x 20 + 149 x 20
- 20 µl primär antikropp
- 2980 µl PBS
Vad innebär affinitet?
Bindningsförmåga, styrkan i reaktionen mellan antigen epitop och antikropp
Vad innebär aviditet?
Sammanlagda styrkan mellan en antikropp bindning site och antigen
Vad är skillnaden mellan Cytolyt och Preservlösning vid ThinPrep?
Metanolbaserade buffrade konserveringslösningar
Cytolyt - ett transport medium, innehåller 14-20% metanol, kan ej avdöda mikrober men kan reducera dem
Preservcyt - ett förvaringsmedium, bibehåller cellernas immunreaktivitet och förhindrar korsreaktioner och bakrgundsfärg, innehåller 30-60% metanol
Vid ThinPrep, varför används DTT, och till vilka provtyper?
DTT (ditiotrietol) löser upp slem och bryter svavelbindnignar
För mukösa prover, endast från övriga luftvägar
Celler fastnar vanligtvis i muccin, och det tas bort av DTT
Ge exempel på 2 ”ljus-”/elektronkällor som används vid EM
- Glödtråd - wolframtråd
- LaB6 - lanthanum hexaboride
- FEG - field emission gun
Varför använder man sig av en kombinationsfixering bestående av glutaraldehyd och paraformaldehyd för vävnadsprover till TEM?
Formaldehyd penetrerar vävnaden snabbare (än glutaraldehyd), medan glutaraldehyd bevarar strukturer bättre (än formaldehyd). I en blandning, kompleterar dessa varandra
Inkubatorer som används för cellodling måste fylla minst tre kriterier:
- Temperatur 37°C
- Luftfuktiget >95-98%
- CO2 5%
Varför?
- Temperatur 37°C - celler trivs bäst i denna temperatur, och det är för att det är den optimala tillväxttemperaturen
- Luftfuktiget >95-98% - förhindrar att mediumet avdunstar och cellerna torkar ut
- CO2 5% - CO2 ingår i cellernas buffertsystem, håller pH 7.2 - 7.5
Nämn minst 3 infektionskällor vid cellodlingen? (mikroorganismer)
- Mykoplasma
- Bakterier
- Virus
- Svamp
- Prioner
Vad är skillnaderna mellan en basal och ett komplettmedium?
Basalmedium ger näringsämnen så att celler kan leva och växa
Komplettmedium skyddar cellerna eftersom de förlorar sina försvarsmekanismer vid cellodling
Komplettmedium = basalmedium + antibiotika, insulin, tillväxtfaktorer.
Beskriv passiv respektive aktiv adhesion? Vilken bör man undvika?
- Passiv - fäster snabbt men dör
- Aktiv - fäster långsammare men effektivare, kan göra ämnesutbyte så att de överlever
UNDVIK PASSIV ADHESION
Används embryonala stamceller eller adulta stamceller vid benmärgstransplantation?
Adulta benmärgstransplantation
Förklara vad reprogrammering är och ge två exempel.
Vid kloning förs en cellkärna från en differentierad cell in i ett ägg utan egen cellkärna
- Ny individ genom SCNT
- ESC/ESC-liknande genom SCNT eller iPS
Nämn två typer av aberrationer (avbildningsfel) vid ljusmikroskopi?
- Sfärisk Aberration betyder att linsens centrala delar och dess perifera delar har olika fokallängd och yttrar sig praktiskt som att man inte kan får en skarp bild någonstans. Strålar som egentligen ska gå mot fokus bryts i stället på ett kortare avstånd. Hela bilden blir alltså suddig
- Kromatisk aberration betyder att en lins har olika fokallängder för olika våglängder eftersom brytningsindex är olika
Vad menas med brytningsindex (refraktivt index)?
Ett tal som bestämmer ljusets hastighet i ett material i förhållande till ljushastigheten i vakuum
Ljuset förändrar sin hastighet i olika medier, beroende på dess densitet/täthet
