Omtenta, 2019 Flashcards
Man kan preparera vävnadsprover på fler olika sätt, då man ska ställa en morfologisk diagnos. Vilket fixeringsmedel är det vanligaste man använder vid kemisk fixering av vävnader som ska paraffininbäddas?
Formalin - 4% Neutral Buffrad Formaldehyd
Vilken koncentration och vilket pH har oftast formalin?
4% koncentration
pH 7.2 - 7.4
Vilken volym ska formalin ha i relation till den volymen av den vävnad som ska fixeras?
10 - 20 gånger
Finns det några hälsorisker för personal som kommer i kontakt med formalin? Om ja - vilka i så fall?
Formalin är cancerogent
Varför är det viktigt att alla nytagna vävnadsprover fixeras så snabbt som möjligt?
Förhindrar nedbrytningsprocessen av vävnad
Autolys
Hur gör man när man immersionsfixerar en vävnadsbit?
Den läggs in i fixeringsmedel så att den omsluts av medlet
Hur gör man när man perfusionsfixerar en vävnadsbit?
Fixeringsmedlet injiceras in i blodkärlen så att medlet sprids jämnt
Hur binder en polyklonal antikropp i jämförelse med en monoklonal antikropp, till ett antigens epitoper?
- Monoklonal - kan binda till endast en typ av epitop, ex. IgG
- Polyklonal - kan binda till flera olika typer av epitoper, ex. IgM
Ibland vid immunhistokemisk visualisering av vissa antigena epitoper, har man i metoden behövt använda sif av en antigen retrieval buffer. Vad gör en antigen retrieval buffer?
Den bryter metylenbryggor blottar epitoperna
I språkbruket inom immunhistokemi använder man sig av förkortningar ibland. Vad står förkortningen LSAB-peroxidas för?
Labelled streptavidin biotin - peroxidas
Under kursen har ni gjort en immunohistokemisk laboration (på patologen). Metodutförandet var enligt LSAB- peroxidas metoden. Redogör för de olika stegen vid LSAB-peroxidas-metoden:
- Blockerar endogent peroxidas med väteperoxid
- Blockerar proteine (hindrar ospecifik inbindning) med goat serum
- Tillsätter anti-human primär antikropp gjord i rabbit
- Tillsätter anti-rabbit sekundär antikropp gjord i goat som är biotinylerad
- ABC-lösning (avidin biotin complex) tillsäts
- Kromogen-substrat-lösning
Du har gjort en indirekt visualiseringsmetod med immunohistokemisk inmärkning. Du har använt dig av:
- 1 st negativt kontrollglas
- 1 st positivt kontrollglas
- 1 okänt provglas
Resultatet visar att alla tre glasen har fått färg. Är det en sann positiv inmärkning av ditt provglas?
Nej, vi har en falskt positivt analyssvar, vilket innebär att det har skett en ospecifik inbinding som ej varit önskvärd
Vid snittning av paraffininbäddad kloss ska man först grovsnitta och sedan finsnitta innan man tar det/de snitt man är intresserad av. Varför grovsnittar man?
För att komma så pass djupt in i vävnaden att alla vävnadsstrukturer kommer med på snittet
Varför finsnittar man?
Tillräckligt tunna snitt för att klart kunna se cellerna och vävnadsstrukturerna. Finsnitt är 4-6 µm
Nämn minst två mikrotomtyper som används inom histopatologi-området för att framställa olika typer av vävnadssnitt?
- Kryostat (fryssnitt)
- Rotationsmikrotom
- Slädmikrotom
- Ultrotom (EM)
Ge ett förslag på en fixerings/preparerings/inbäddningsmetod som är lämplig att använda när man vill studera fettinlagring i vävnad?
Frys
Vid nedfrysning av vävnad som ska snittas i fruset tillstånd, är det viktigt att nedfrysningen går snabbt. Varför?
Iskristaller bildas inte i vävnaden och det sker ingen förändring i vävnadsstrukturen
Förhindrar autolys
Vid er ”frysningslabb” använde ni er av flytande kväve. Vilken temperatur har flytande kväve?
- 196ºC
Nämn fyra väsentliga risker ur arbetsmiljösynpunkt, vilka kan förekomma vid nedfrysning av färsk vävnad med hjälp av flytande kväve?
- Smittorisk av bakterier / virus eftersom preparatet inte behandlats med kemiska medel
- Klytande kväve har väldigt låg temperatur - frysskada
- Vid förångning kan kväve tränga undan syre från luften vilket kan medföra syrebrist
- Kontamination
Ange hur du kan skydda dig mot dessa risker
- Smittorisk - skyddskläder
- Frysskada - använd handskar, glasögon, långarmad rock, ej sandaler
- Syrebrist - larm som varnar om syrehalten sjunker eller ökar
- Kontamination - byta utrustning och använda rena verktyg
- Jobba minst 2
Infärgning med hjälp av färgmolekyler baseras delvis på att olika färgmolekyler binder sig till olika vävnadskomponenter. Vilka olika typer av kemiska bindningar kan man se mellan färgmolekyler och vävnad?
- Jonbindning
- Kovalent bindning
- Komplexbindning
- Vätebindning
- Hydrofoba / hydrofila krafter
Vid kärnfärgning med hjälp av hematoxylin används alltid ett betmedel. Vilken funktion har detta betmedel?
Det är sammlänkning mellan vävnaden och färgämnet
Om färgen har för låg affinitet till vävnaden så kan den inte binda själv, därför behövs betmedel
HTX-betmedel: aluminium eller järn
Hur går en ”succedanfärgning” till?
En färg i taget, efter varandra
Ex. HTX-Eosin
Hur går en simultanfärgning till?
En färgblandning görs av två eller flera färgsubstanser i samma storlek
Storlek på färgmolekyl, affinitet och annat spelar roll. Den ena färgen ska inte täcka över den andra
De två huvudtyperna av elektronmikroskopi är TEM och SEM.
Vad står förkortningen TEM för?
Transmissionselektronmikroskop
Vad står förkortningen SEM för?
Svepelektronmikroskop
Beskriv den huvudsakliga skillnaden mellan ett TEM och ett SEM objekt/snitt?
- TEM - 2D, ljus igenom - OTOTO, objekten är nanometer, plastinbäddning + snittning med diamantkniv,
- SEM - 3D, ljus på ytan - översiktlig bild, torkning utan skrumpning
Hur ökar man kontrasten i ett TEM-snitt?
Grids med ultratunna snitt utsätts för lösningar av tungmetaller (ex. uranyl, bly, wolfram)
Även postfixering med osmium och “en bloc”-behandling med uranyl innan dehydrering och inbäddning ger en ökad kontrast
Odlade celler kan växa på två sätt, hur / vilka?
Adherenta celler - fäster sig på en yta
Suspensionskulturer - skvalpar runt utan problem
Hur definierar du en primär kultur?
Celler som sätts i odling, som är tagna ur en vävnad eller kroppsvätska
Hur definierar du en cellinje?
Celler från primär kultur har överförts till ny odlingsbehållare, har flyttats flera gånger
Nämn minst två källor / orsaker till kontamination av en cellkultur?
- Virus
- Bakterier
- Prioner
- Mykoplasma
- Svamp
Nämn minst två symptom vid en kontamination av en cellkultur?
- Tillväxthastighet minskar
- Färgomslag
- Celler börjar flyta upp till ytan = är döda
- Förändrad morfologi av celler
- Cellprodukter - ex. förbrukar inte mediumet
Vad är en embryonal stamcell?
En pluripotent stamcell - kan bli alla celler men inte placenta, inte navelsträng och inte ny individ
Kan odlas in vitro
Vad är en adult stamcell?
En multipotent stamcell - kan ge upphov till en eller flera celler i en vävnad/organ
Förklara vad reprogrammering är?
När man manipulerar celler till att bli någonting annat
Programmerar om en cell så att man förändrar dess terminala fenotyp
- SCNT - somatic cell nuclei transfer
- iPS metoden - induced pluripotent stemcells
Namnge och beskriv minst fyra olika hanterings-/-preparationsmetoder för cytologiskt material.
- Thinprep
- DiffQuik - snabbversion av HTX-Eosin, görs vid ROSE
- ROSE - rapid on-site evaluation - akutbedömning inom cytologi
- Immunocytokemi
- PAP-färg - papanikolau
- MGG-färg - May-Grünewald Giemsa
Vilken är den vanligaste översiktfärgningen inom cytologi området?
- PAP-färg - papanikolau
- MGG-färg - May-Grünewald Giemsa
- DiffQuik
