Testat 3 Antigen-AK-Reaktionen

Question 1

ELISA

Answer 1

wichtigstes Diagnostikum: 1.AK-Nachweise (“normaler” AG-ELISA, “Capture”-ELISA);
2. AG-Nachweise (Sandwichprinzip, kompetitver ELISA)
=> MERKE: Im ELISA erkennt man nur, dass AK vorhanden sind. Im Westernblot erfährt man gegen welche Antigene AK vorhanden sind.

Question 2

“normaler” AG-ELISA

Answer 2

AK-Nachweis

Question 3

“Capture” ELISA

Answer 3

AK-Nachweis

Question 4

Sandwich ELISA

Answer 4

Antigen-Nachweis

Question 5

kompetitver ELISA

Answer 5

Antigen-Nachweis

Question 6

Direkte Immunfluoreszenz

Answer 6

spezifischer AK ist selbst Fluoreszenz-markiert => direkter Antigennachweis

Question 7

Indirekte Immunfluoreszenz

Answer 7

ein anti-AK (Sekundär-AK) ist Fluoreszenz-markiert => Nachweis spezifischer AK im Serum

Question 8

Ablauf HIV-Diagnostik

Answer 8

1. ELISA-Testung auf HIV-AK (=Suchtest)
2. Bei pos. ELISA, erneute Probenentnahme und Testung (=Wdh.test)
3. Bei pos. Wdh.test erfolgt d. Bestätigungstest im Westernblot (oder PCR)

Question 9

Wie können falsch positive Ergebnisse im ELISA entstehen?

Answer 9

Durch kreuzreaktive AK. Dies erkennt man dann im Westernblot, da nicht gegen mehrere HIV-Antigene AK voliegen (entscheiden ist d. Vorgabed. Westernblot Herstellers!). Bsp.: anti-MHC-II-AK und gp120, anti-IgG-AK und p24

Question 10

HIV-Westernblot

Answer 10

Bestätigungstest; Alle HIV-Antigene sind im SDS-PAGE entsprechend ihreer Größe aufgetrennt worden und auf eine Membran geblottet. Freie Bindungsstellen werden mit Protein (z.B. Albumin) abgesättigt; Die Membran wird mit dem zu testenden Serum inkubiert; Gebundene AK werden über Enzym-gekoppee

Question 11

PCR

Answer 11

=Polymerase-Ketten-Reaktion-Prinzip: Amplifizierung eines spezifischen Genfragments, im 1. Zyklus (Denaturierung d. Templates, Annealing d. Oligonucleotide, Elongation); ab d. 2. Zyklus Denaturierung (92-95°C) d. Anlagerunf und Elongation (bei 68-75°C)

Question 12

Molekulare HLA-Typisierung

Answer 12

1. SSP (=sequence specific primer) - D. Primerpaare treffen präzise auf verschiedene HLA-Allele. Amplifikation nur dann, wenn “perfect match” stattfindet, 2. SSO(=sequence specific olionucleotide) - PCR-Produkte werden auf Nylonmembranen geblottet und mit Farbstoff-gebundenen Oligonukleotiden hybridisiert, 3. SBT (=sequence based typing) - HLA-Typisierung durch direkte DNS-Sequenzierung