Tecnologia del hibridoma

Question 1

hibridomas

Answer 1

celulas diseñadas para producir: anticuerpos monoclonales, los anticuepos son producidos por la tecnologia
1975- Kohler y Milstein usaron los hibridomas para generar anticuerpos monoclonales

Question 2

anticuerpos monoclonales

Answer 2

anticuerpos monovalentes que se unen a una misma epitope, son producidos por una clona de linfocitos B, todos reconocen 1 epitope con la misma afinidad, 1 anticuerpo: 1 epitope

Question 3

anticuerpos policlonales

Answer 3

mezcla de varios anticuerpos producidos por diversas copias de linfocitos B, estos reconocen y atan a muchos diversos epitopos de un unico antigeno

Question 4

anticuerpos

Answer 4

producidos por: + clona de linfocitos B, cada uno reconoce un antigeno distinto o diferentes epitopes de un mismo antigeno, se obtienen inmunizando un animal con el antigeno de interes y purificando los anticuerpos que produce

Question 5

estructura de los anticuerpos

Answer 5

estructura que reconoce y se une a antigenos
4 cadenas unidas por puentes disulfuro, 2 ligeras: region variable (sitio de union a antigeno) y region constante, 2 pesadas: region variable y constante

Question 6

Produccion de anticuerpos

Answer 6

sintesis de inmunoglobulinas:
cel B maduras expresan IgM e IgD, cuando se activan: proliferan y se diferencian, cuando se transforman en cel plasmaticas secretan anticuerpos capaces de neutralizar a un antigeno especifico

Question 7

procedimiento

Answer 7

1- raton inmunizado con antigenos, en el bazo proliferan celulas B con anticuerpos
2- se obtienen las cel B y se fusionan por electrofusion o polietilinglicol a cel de mieloma multiple, cultivadas en HAT
3- las cel hibridas se cultivan de 10-14 dias en HAT
4- las celulas hibridas se cultivan en pocillos separados y se analizan
5- las cel que contienen el anticuerpo apropiado se clonan

Question 8

Produccion de anticuerpos

Answer 8

sintesis de inmunoglobulinas
cel B maduras expresan IgM e IgD, cuando se activan: proliferan y se diferencian, cuando se transforman en cel plasmaticas secretan anticuerpos capaces de neutralizar a un antigeno especifico

Question 9

Tipos de anticuerpos monoclonales

Answer 9

murinos: -omab, 0% humano, pot inmunologico alto
quimerizacion: la region variable es la murina, 25%. raton, -ximab, Pot inmunologico intermedio
humanizacion: solo las regiones hipervariables de las cadenas liegras y pesadas son murinas, 10% raton, -zumab, potencial inmunologico bajo
humanos: -umab, 100% humanos, pot inmunologico bajo

Question 10

Fagos

Answer 10

Fago M13, se inserta un genoma de una secuencia externa de ADN, estos fagos expresan en su superficie la prot codificada por el adn insertado

Question 11

Tecnologia del Ribosoma Display

Answer 11

sintesis de anticuerpos monoclonales in vitro, aisla el gen de los anticuerpos de cel humanas mediante PCR, se genera el transcrito in vitro

Question 12

aplicacion de los anticuerpos monoclonales

Answer 12

uso en investigacion, determinan las concentraciones de proteinas: pruebas de embarazo, tratamiento: enf oncohematologicas, rechazo a transplantes, reumatologia, cardiologia

Question 13

Mecanismo de accion: anticuerpos monoclonales

Answer 13

union a:
receptores en la membrana, prot, prot circulantes, causa un efecto directo o indirecto sobre la funcion de un tejido

Question 14

reacciones adversas de los anticuerpos monoclonales

Answer 14

inmunosupresion, respuestas inmunologicas, reacciones de hipersensibilidad, sd de liberacion masiva de citocinas: artralgias, mialgias, fiebre, hipo o hipertension, nauseas, vomito, rash cutaneo (reaccion alergica)

Question 15

ADN RECOMBINANTE

Question 16

formas de reproduccion pansexual de las bacterias

Answer 16

• transformacion: bacteria incorpora ADN libre, lo transforma en plasmido, pueden tener hasta 25 plasmidos
• conjugacion: 2 bacterias se unen, se replica el plasmido para que las 2 bacterias lo tengan
• transduccion: bacteriofago inserta su ADN en la bacteria, la bacteria genera bacteriofagos hasta morir

Question 17

ADN RECOMBINANTE

Answer 17

secuencias de ADN derivadas de una mas fuerte

Question 18

biotecnologia

Answer 18

aplicacion de las bases biotecnologicas para producir productos que pueden usarse para diagnostico, prevencion y tratamiento

Question 19

ingenieria genetica, pasos

Answer 19

1- identificacion y aislamiento de un gen
2- seleccion y diseño de un vetor
3- ligacion del gen al vector
4- transformacion, transfeccion de clones recombinantes a cel huesped
5- seleccion de recombinantes y optimizacion de la integracion del gen en las cel huesped

Question 20

Enzimas de restriccion

Answer 20

endonucleasas de restriccion, cortan nucleotidos en medio de ADN extraño, es un mecanismo de defensa de las bacterias. Degradan ADN extraño, NO degradan el propio ADN

Question 21

Tipos de enzimas de restriccion

Answer 21

• endonucleasas: degradan ADN extraño, cortan enlaces fosfodiester en secuencias especificas, reconocen secuencias palindromicas, producidas por bacterias
• enzimas del sistema modificador: metilasas: modifican el propio ADN para que no sea degradado. metilacion en residuos de Adenina o citosina

Question 22

nomenglatura de enzimas de restriccion:

Answer 22

1- primera letra del genero de la bacteria
2- nombre de la especie
acronimo de 3 letras cursivas
agregar letras o numero segun la cepa o serotipo
# romanos: de acuerdo a la cronologia que se aislaron

Question 23

endonucleasas de restriccion, tipos:

Answer 23

I: corta 6-7 pares aleatorio, rio arriba o abajo
II: reconoce secuencias cortas de 4 a 8 pares, corta en la secuencia palindromica
III: corte lejos de la secuencia palindromica
IV: reconoce ADN metilado

Question 24

tipos de corte

Answer 24

cohesivos: cortes en dif posicion, zig zag, deja Nucleotidos libres, 3-5 nt de diferencia
romos: corte simetrico en ambas cadenas

Question 25

recombinacion de ADN

Answer 25

ADN de 2 fuentes diferentes se tienen que cortar con la misma enzima
los fragmentos generados por la misma enzima de restriccion son complementarios

Question 26

vectores

Answer 26

molecula de doble cadena de ADN con capacidad de albergar un fragmento de ADN exogeno, 2 tipos:
- clonacion
- expresion

Question 27

vectores de clonacion

Answer 27

almacenar secuencias, obtener mucho ADN, plasmido, bacteriofago, fagemidos, cosmidos (combinacion de un plasmido y bacteriofago), contienen: ORI-origen de replicacion, sitio multiple de clonacion (secuencia especifica que es reconocida por las enzimas de restriccion para insertar el adn complementario), marcador de seleccion (resistencia antibioticos, Gen lacZ- b- galactosidasa), prot verde fluorescente

Question 28

vectores de expresion

Answer 28

producir un transcrito o proteina, plasmido o bacteriofago, contiene: ORI, sitio multiple de clonacion, promotor, IRES (sitio de entrada a ribosoma), secuencia de poli A

Question 29

clonacion

Answer 29

origen de replicacion: ORI
sitio multiple de clonacion: secuencia especifica reconocida por las enzimas de restriccion para insertar ADN complementario
marcador de seleccion- AmP

Question 30

expresion

Answer 30

origen de replicacion
sitio multiple de clonacion
promotor
IRES: sitios de entrada a ribosoma
secuencia de poli A

Question 31

plasmidos

Answer 31

2 cadenas adn, circulares, separados del adn normal, NO es esencial,

Question 32

bacteriofagos

Answer 32

virus que infectan a las bacterias, se modifican geneticamente, eliminan genes que no se requieren para la replicacion y empaquetamiento

Question 33

cosmidos

Answer 33

vectores hibridos, se combina el ADN de un plasmido (gen de resistencia a los ab) con el de un bacteriofago (Cos-empaquetamiento)

Question 34

Fagemidos

Answer 34

plasmido al que se le incorpora el ori de un fago
no tiene sitios cos
adn lineal

Question 35

clonacion molecular

Answer 35

transformacion celular
el material genetico se incorpora de manera extracromosomica, se replica, se transcribe y se traduce

Question 36

clonacion, pasos

Answer 36

1- preparacion del inserto que se va a clonar: enzimas de restriccion
2- preparacion del vector, desfosforilacion del vector, purificacion del plasmido
fragmento de adn se introduce en un plasmido
3- ligacion del inserto y el vector: adn ligasa
4- preparacion de cel competentes, permeabilidad de la membrana para aceptar el vector,
5- transformacion celular, adquisicion del gen, nuevo fenotipo a la celula
6- identificacion de las colonias celulares con el vector recombinante

Question 37

nucleasas programables

Answer 37

enzimas modificadas geneticamente, reconocen secuencias especificas de un ADN. 2 monomeros: uno reconoce la secuencia, nucleasa
corregir y editar defectos geneticos
disrupcion, insercion, delecion