Técnicas de coloração

Question 1

Ao exame microscópico devem ser observadas as reações de gram, quanto a coloração como se espera encontrar?

Answer 1

• as gram positivas são enocntradas em uma coloração púrpura-azulada
• as gram negativas são encontradas em uma coloração vermelha

Question 2

O que se observa microscópicamente sobre a morfologia das bactérias?

Answer 2

• cocos
• bastonete
• fusiforme

Question 3

As bactérias em esfregaço coradas pelo método gram permite a identificação das espécies?

Answer 3

NÃO

Question 4

O que sugere os cocos gram-positivos apresentados em grupo?

Answer 4

sugere estafilococos

Question 5

Quais os materiais necessários para a realizar a técnica de coloração?

Answer 5

• meios de cultura com colônias mistas ou isoladas
• bico de bulsen
• EPI (máscara, luva, jaleco e toca)
• alça de platina
• lâmina e lamínulas
• kit para a coloração de gram
• água destilada
• microscópio
• óleo de imersão

Question 6

Como é realizada a técnica de esfregaço do material bacteriano?

Answer 6

• colocar com a ansa uma pequena gota de água sobre a lâmina
• tocar ligeiramente com alça esterilizada a superfície da cultura de bactérias previamente isoladas e suspender o material recolhido na gota de água
• estender a suspensão em uma área pequena com movimentos circulares de forma que o esfregaço fique bem delgado (quanto menor a espessura mais fácil a visualização)
• passar a lâmina 3 vezes sobre a parte mais quente do bico de bulsen ou 5 vezes na chama da lamparina, durante esse processo a face da lâmina contendo o esfregaço deve estar voltada para cima, movimento da mão sobre a chama deve ser lento mas contínuo afim de evitar a carbonização do esfregaço
• cobrir a lâmina com crista de violeta (violeta de genciada) por 1 minuto
• lavar com água (não esfregar)
• cobrir com solução de iodo (lugol) por 1 minuto
• lavar com água (não esfregar)
• descorar por 10-30 s por agitação suave com solução de álcool (70ml) acetona (30 ml)
• lavar com água (não esfregar)
• cobrir com safranina (ou fucsina) por 10 a 30 s (solução a 2,5% em etanol a 95%)
• lavar com água (não esfregar)
• deixar secar em estufa com temperatura não muito alta ou em ar livre. não aplicar óleo de imersão na lâmina caso ainda esteja molhada ou com resíduos de água
• levar ao microscópio para observação