Techniques immunologiques Flashcards
Qu’est-ce que l’immunologie ?
L’immunologie est l’étude du système immunitaire et de ses mécanismes de reconnaissance et de défense contre le non-soi (agents pathogènes, cellules cancéreuses, etc.).
Quels sont les deux types d’immunité chez les eucaryotes et comment interagissent-ils ?
- Immunité innée : Rapide, non spécifique, première ligne de défense (macrophages, complément).
- Immunité adaptative : Spécifique, mémoire immunitaire (lymphocytes B et T).
Quelles sont les classes d’anticorps et pourquoi se concentre-t-on sur les IgG ?
Il existe cinq classes : IgG, IgA, IgM, IgE, IgD. On étudie les IgG car ce sont les plus abondants dans le sang et ils sont largement utilisés en immunodiagnostic et en recherche.
Quelle est la différence entre un épitope et un paratope ?
- Épitope : Région spécifique d’un antigène reconnue par un anticorps (peut être séquentiel ou conformationnel). 5-6 a-a
- Paratope : Région de l’anticorps qui interagit avec l’épitope, déterminant sa spécificité. 5-10 a-a
Comment se forme un complexe antigène-anticorps ?
Par des interactions non covalentes : liaisons hydrogène, électrostatiques, interactions hydrophobes, Van der Waals.
Quelles sont les étapes du Western Blot
- Électrophorèse SDS-PAGE : Migration des protéines en fonction de leur masse moléculaire.
- Transfert sur membrane (nitrocellulose ou PVDF).
- Blocage avec du lait écrémé ou BSA pour éviter les interactions non spécifiques.
- Incubation avec l’anticorps primaire spécifique de la protéine d’intérêt.
- Lavage pour éliminer l’anticorps primaire non lié.
- Incubation avec l’anticorps secondaire couplé à un fluorophore ou enzyme (ex : HRP).
- Révélation par fluorescence ou chimiluminescence.
Quels sont les principaux problèmes (3) rencontrés en Western Blot et leurs solutions ?
- Pas de bande : Protéine faiblement exprimée, mauvais anticorps, conditions de dénaturation inadaptées.
- Bande à mauvaise masse : Dégradation, modifications post-traductionnelles.
- Bruit de fond élevé : Trop d’anticorps, mauvais blocage, lavages insuffisants.
Quelles sont les étapes de l’immunoprécipitation ?
- Ajout d’anticorps au mélange.
- Formation du complexe Ac-Ag.
- Ajout de billes protéiques A/G liant l’anticorps.
- Centrifugation et lavages.
- Élution et récupération de l’antigène.
Quels sont les premiers mécanismes immunitaires apparus dans l’évolution ?
Chez les bactéries, la méthylation de l’ADN et l’édition génique par CRISPR pour cliver le matériel génétique exogène. Chez les eucaryotes, les mécanismes sont plus complexes.
Qu’est-ce qu’un anticorps IgG?
Une protéine produite par les lymphocytes B en réponse à un antigène. Il reconnaît spécifiquement un antigène via son site de liaison (paratope) et peut neutraliser des pathogènes.
Qu’est-ce qu’un antigène ?
Une substance étrangère reconnue par un anticorps. Il peut être issu d’un microbe, d’une protéine, d’un polysaccharide ou d’un lipide, et peut être naturel ou synthétique.
Pourquoi les techniques immunologiques sont-elles très sensibles ?
Parce que l’affinité des anticorps pour leurs antigènes est extrêmement élevée, permettant une détection à des concentrations très faibles (fmol, 10⁻¹⁵ M).
Quels sont les deux types d’épitopes ?
- Épitope séquentiel : 5-6 acides aminés contigus, détectable si la protéine est dénaturée.
- Épitope conformationnel : Dépend de la structure tertiaire/quaternaire de la protéine.
Quelle est l’importance de la conformation de l’épitope ?
Elle doit être prise en compte selon la technique et les détergents utilisés (ex : SDS-PAGE peut dénaturer un épitope conformationnel).
Qu’est-ce qu’un anticorps polyclonal et comment est-il généré ?
Un mélange d’anticorps reconnaissant plusieurs épitopes d’un même antigène. Produit en injectant un antigène à un animal, puis en récupérant son sérum contenant des anticorps variés.
Qu’est-ce qu’un anticorps monoclonal et comment est-il généré ?
Un anticorps qui reconnaît un unique épitope, produit en isolant un lymphocyte B et en le fusionnant avec une cellule de myélome pour créer un hybridome, qui sera criblé et cultivé puis purifié.
Quels sont les avantages et inconvénients des anticorps polyclonaux et monoclonaux ?
- Polyclonaux : Plus grande sensibilité, mais spécificité moindre.
- Monoclonaux : Haute spécificité, mais production longue et coûteuse.
Quelle est la méthode principale pour purifier les anticorps ?
Chromatographie d’affinité : Dépôt d’un ligand dans une colonne, passage de l’échantillon, lavages pour éliminer les contaminants, puis élution des anticorps.
À quoi sert le Western Blot ?
Détecter une protéine spécifique, vérifier son expression relative par rapport à une protéine de ménage (ex : actine, tubuline).
Quel est le but de l’ELISA ?
Détecter et quantifier un antigène ou un anticorps dans des plaques à 96-384 puits.
Quels sont les trois types d’ELISA et leurs caractéristiques ?
ELISA direct : Un seul anticorps, rapide, mais bruit de fond élevé.
- ELISA indirect : Utilise un anticorps secondaire conjugué pour amplification.
- ELISA sandwich : Capture d’un antigène par deux anticorps spécifiques.
À quoi peu servir l’immunoprécipitation ?
Purifier un antigène et identifier des protéines qui lient l’ADN.
À quoi sert l’hémagglutination ?
Détecter des pathogènes ou déterminer les groupes sanguins.
Quel est le principe de l’hémagglutination ?
Les antigènes présents sur les globules rouges interagissent avec des anticorps spécifiques, entraînant leur agglutination.
Qu’est-ce qu’un anticorps recombinant ?
Un anticorps modifié (fragments synthétiques, chimères, multivalents) utilisé en thérapie pour cibler spécifiquement des maladies.
Quelle est l’usage d’un phage display?
Permet de découvrir des nouvelles molécules afin de traiter des patients atteints de cancers ou pathogènes sujets à la résistance antibiotique.
Quelle est le principe du cycle de biopanning?
Consiste à infecter E. coli avec des phages qui possèdent des plasmides qui contiennent des séquences qui pourraient exprimer des anticorps. On garde les anticorps qui ‘‘adhère’’ aux bactéries et on amplifie l’ADN des phages pour analyse. Effectue ce cycle plusieurs fois.
