Cours 5 - Techniques de séparation des molécules : Chromatographie II Flashcards
Quel est le principe de la chromatographie échangeuse d’ions ?
Séparation des composés en fonction de leur charge nette (positive ou négative) grâce à une phase stationnaire contenant des groupes fonctionnels chargés.
Comment les solutés interagissent-ils avec la phase stationnaire dans la chromatographie échangeuse d’ions ?
Par des liaisons ioniques ; les solutés chargés interagissent avec la phase stationnaire, tandis que les contre-ions sont déplacés.
Quels composés ne sont pas retenus par la phase stationnaire en chromatographie échangeuse d’ions ?
Les composés ayant une charge nette neutre ou de même charge que la phase stationnaire.
Comment élue-t-on les composés en chromatographie échangeuse d’ions ?
En augmentant la concentration en sels (qui compétitionnent pour la phase stationnaire) ou en modifiant le pH (qui change la charge des composés).
Quel est l’effet du pH sur la charge des protéines en chromatographie échangeuse d’ions ?
Le pH modifie la charge des protéines en influençant la protonation ou déprotonation des groupements fonctionnels.
Qu’est-ce que le point isoélectrique (pI) ?
Le pH auquel la charge nette d’une protéine est nulle.
Comment utiliser le pI pour séparer les protéines ?
Une protéine est chargée positivement en dessous de son pI et négativement au-dessus ; en ajustant le pH de la phase mobile, on peut la fixer ou l’éluer.
Comment fonctionne une colonne échangeuse d’anions ?
La phase stationnaire est chargée positivement, elle retient les composés chargés négativement qui sont ensuite élués selon leur charge croissante.
Comment éluer les protéines selon leur charge négative croissante ?
En augmentant progressivement la force ionique de l’éluant.
Quels sont les avantages de la HPLC par rapport à la chromatographie classique ?
Séparation plus rapide et efficace grâce à l’utilisation de hautes pressions, meilleure résolution et détection en temps réel.
Quels sont les types de chromatographie compatibles avec la HPLC ?
Chromatographie d’exclusion, d’affinité, échangeuse d’ions, de partage, etc.
Quels sont les principaux composants d’un système HPLC ?
- Injecteur (échantillons de 10-100 µL)
- Pompe (pression de 5000-7000 psi)
- Colonne (différentes longueurs et diamètres)
- Phase mobile (choisie selon polarité et force éluante)
- Détecteur (UV, IR, MS, etc.)
Quelles sont les principales méthodes d’élution en HPLC ?
- Mode isocratique : phase mobile de composition constante
- Mode gradient : variation progressive de la force ionique ou du pH
Comment le gradient influence-t-il la séparation en HPLC ?
Une élution progressive améliore la résolution et la séparation des composés.
Comment fonctionne un détecteur UV-visible en HPLC ?
Il mesure l’absorption de la lumière par les analytes (190-800 nm), basé sur la loi de Beer-Lambert.
Quels sont les avantages et inconvénients du détecteur UV-visible ?
✅ Sensibilité jusqu’au ng, quantitatif
❌ Peu spécifique, nécessite des composés absorbant la lumière
Quels sont les avantages du fluorimètre (FLD) par rapport au détecteur UV-visible ?
Plus sensible et plus sélectif, mais limité aux composés fluorescents ou marqués.
Qu’est-ce qu’un détecteur électrochimique en HPLC ?
Il mesure le courant généré par la réduction ou l’oxydation des analytes à une électrode.
Quels sont les avantages et inconvénients du détecteur électrochimique ?
✅ Très grande sensibilité (fg)
❌ Méthode destructive, limitée aux composés oxydables ou réductibles
Pourquoi utilise-t-on la spectrométrie de masse (MS) en HPLC ?
Pour identifier et quantifier des composés inconnus avec une grande sensibilité (pg-ng).
Quels sont les inconvénients de la spectrométrie de masse en HPLC ?
Coût élevé, nécessite que les analytes soient ionisables.
Quels types d’échantillons sont analysés en chromatographie en phase gazeuse (CPG) ?
Des composés volatils ou vaporisables sans décomposition (ex : hydrocarbures, cétones, acides gras).
Quelle est la différence entre la phase mobile et la phase stationnaire en CPG ?
- Phase mobile : gaz inerte (hélium, azote, argon, hydrogène)
- Phase stationnaire : liquide non volatil ou solide adsorbant
Quels paramètres influencent la séparation en CPG ?
Solubilité dans la phase stationnaire et volatilité (point d’ébullition).
Quels détecteurs peut-on coupler à la CPG ?
Détecteurs UV, électrochimique, spectrométrie de masse (GC-MS).
Exemples d’applications en HPLC et CPG
Comment la HPLC est-elle utilisée pour analyser les cannabinoïdes ?
Elle permet de séparer et quantifier 17 types de cannabinoïdes, incluant le THC et le CBD.
Comment la CPG est-elle utilisée pour analyser le whisky ?
Elle identifie les molécules aromatiques et leur concentration pour caractériser le vieillissement et la qualité du whisky.
