Cours 4 - Techniques de séparation des molécules : Chromatographie I Flashcards
Qu’est-ce que la chromatographie ?
C’est l’ensemble des méthodes qui assurent la séparation des constituants d’un mélange en utilisant deux phases non-phases non miscibles
Quelles sont les deux phases non miscibles?
1- Phase stationnaire
2 - Phase mobile
En quoi consiste la phase stationnaire?
C’est une phase qui doit être solide et immobiliser certains types de solutés par grande affinité
En quoi consiste la phase mobile?
C’est la phase qui entraîne les solutés au long de la phase stationnaire pouvant être liquides, gazeuses ou solides
Sur quoi repose la séparation de substances?
Sur l’affinité des substances pour la phase stationnaire ou la phase mobile
Qu’arrive t-il lorsque certains composés ont une plus grande affinité pour la phase stationnaire?
Leur migration sera plus lente
Qu’arrive t-il lorsque certains composés ont une petite affinité pour la phase stationnaire?
Migration rapide des composés
Quels sont les deux critères qui influencent l’affinité des molécules?
- Solubilité différente dans chaque phase
- Adsorption et désorption sur la phase stationnaire solide
Quels sont les 4 types de chromatographies
- L’état des phases
- Mode d’immobilisation de la phase stationnaire
- Principe des interactions entre les solutés et la phase stationnaire
- Modalités de migration de la phase mobile
Quels types de chromatographie peut-ont effectuer selon l’état des phases mobile?
Phase liquide et gazeuse
Quels sot les deux façons d’immobiliser la phase stationnaire?
- Étendue sur surface plane, chromatographie de surface
- Intérieur d’une colonne, chromatographie sur colonne
Quelles sont les différentes sortes de chromatographies selon le principe des interactions entre les solutés et la phase stationnaire (6)?
- Adsorption
- Partage
- Échange d’ions
- Filtration sur gel
- Affinité
- Interactions hydrophobes
Quels sont les deux types de chromatographies selon les modalités de migration de la phase mobile?
- Chromatographie par élution (ex : colonne)
- Chromatographie par déplacement (ex : surface)
En quoi consiste la chromatographie sur couche mince?
- Phase lignite et la phase stationnaire est fréquemment fixée sur une planche polaire par gel de silice
- Phase mobile migre par capillarité et par le fait que les composés sont moins polaires
- Rétention à la phase stationnaire est faite par adsorption pas forces électrostatiques
Comment est disposée la couche mince par rapport à la substance qu’on souhaite analyser?
Elle est légèrement trempée dans la solution avec une ligne de dépôt
Quelles sont les applications des chromatographies sur couche mince?
- Contrôle facile et rapide de la pureté d’un composé organique
- Utile pour rechercher le meilleur solvant avant d’entreprendre une séparation par chromatographie sur colonne
Quels sont les deux types de révélation pour la chromatographie sur couche mince?
- Directe : pour les substances naturellement colorées
- Indirecte : UV, révélateurs chimiques
Comment fonctionne la chromatographie par filtration sur gel
Méthode séparation basée selon taille solutés qui utilise un tamis moléculaire
Par quel principe fonctionne le tamis moléculaire pour la chromatographie sur gel?
Microbilles poreuses qui se retrouvent dans la phase stationnaire qui séparent différentes molécules dans les pores
Y a t-il une liaison moléculaire entre le soluté et la phase stationnaire dans la chromatographie par filtration sur gel?
Non, il n’y a aucune liaison
Sur quel principe repose la chromatographie d’affinité?
Sur l’interaction spécifique entre deux molécules, le soluté va se séparer et se fixer irréversiblement à un ligand spécifique attaché à une matrice insoluble (covalent)
Quel est la suite de manipulations moléculaires de la chromatographie d’affinité?
Adsorption spécifique - lavages - désorption
Quels sont les applications de la chromatographies d’affinité ?
Enzyme - substrat
Anticorps - antigène
ligand - récepteur
Dans quelles conditions fait-on une chromatographie d’affinité?
En conditions non-dénaturantes
