Td AgInf Flashcards
3 techniques de culture des virus?
Culture in vivo, in ovo, in vitro
Comment récupérer que les virus à partir d’un organe?
L’organe est réduit en broyât que l’on met en suspension dans une solution
Centrifugation pour éliminer les fragments de tissus et on recueille le surnageant qui contient une quantité importante de virus
Définition culture in vivo? Pourquoi est-ce majoritairement utilisé?
Le virus est directement inoculé à un animal
Tester un vaccin ou un médicament, étude de la physiopathogénie d’une infection virale (voie d’entrée du virus, lieu de réplication…)
4 inconvénients de la culture in vivo?
Réglementation lourde
Il pue y avoir des interférences avec le système immunitaire de l’animal
Pas dans de véritables conditions naturelles (stress…)
Il peut y avoir présence d’éléments pathogène dans l’animal qui peuvent être activées et contaminer
Définition culture in ovo?
On utilise un œuf fécondé contenant un embryon à l’intérieur : on inocule le virus dans l’œuf
3 avantages de la culture in ovo?
Peu onéreux
Facile à réaliser
Rentable : production de vaccins en grande quantité
Description principe de l’avianisation? Qu’obtient-on? Pour quoi est-ce intéressant? Risque? Limite?
Injection du virus dans un œuf, broyage, ré administration a un autre œuf et ainsi de suite sur au moins 10oeufs
On obtient un mutant = virus avianisé -> virus modifié par passages successifs sur des œufs => virus avirulent : il a perdu sa pathogenicite
Intéressant pour la vaccination
Il peut y avoir possibilité de réversion
Certains virus sont impossibles à cultiver sur une espèce aviaire
Qu’est que qu’on utilise pour la culture in vitro?
Des flacons de Roux
Avantage cellules de premier explant (=1 seul passage dans les flacons Roux)? Et inconvénient?
Travail en systeme homologue
Beaucoup plus long, probleme de repetatibilite, risque de contamination, coûte cher, danger d’exposition à des agents cryptiques
Comment on obtient les cellules de 2nd explant?
À partir de la culture primaire on fait des passages successifs
Définition passage?
Transfert d’une partie de la culture dans un autre flacon de Roux
Avantage des cellules de 2nd extant? Et inconvénient?
Facile d’expérimentation, moins cher que les cellules de 1er explant
Mort des cellules au bout d’un moment (durée de vie limitée)
Définition de la lignée cellulaire continue? Avantage? Et inconvénient?
Cellules ayant acquis une propriété immortelle et qui se multiplient sans cesse
Peu onéreux, aise d’utilisation, rapide, cellules peu exigeantes
Cellules cancéreuses (non utilisable pour vaccins), perte d’inhibition de contact
Méthode pour estimer le nombre X de cellules sur cellule de Malassez?
Il faut compter le nombre de cellules sur un grand carré et répéter cette action 10fois et calculer la moyenne M
X (nombre de cellules par mL) = M*10^5
Protocole pour déterminer le titre d’une suspension virale? Que cherche-t-on à calculer? Méthode pour y trouver?
On ensemence des cellules dans une microplaque puis on effectue des dilutions du virus de 10 en 10
On fixe les cellules au MMG : si les cellules sont adhérentes elles sont vivantes, sinon elles sont mortes
On cherche la dilution virale pour laquelle 50% des cellules meurent par effet cytopathogène = DCP50% ou DL50%
Il faut repérer les dilutions qui encadrent la DL50
Quand on cherche à calculer la DL50, quand on compte le nombre de cellules mortes sur un ligne, que doit-on inclure? Et quand on compte le nombre de cellules vivantes?
Celles en dessous
Celles au dessus
Quels sont les 3 critères à prendre en compte pour affirmer le pouvoir pathogène d’une bactérie à partir d’un prélèvement clinique?
Culture pure
Connaissance que j’ai de la bactérie
Présence de cellules de l’immunité
Avec quel instrument on réalise un isolement de bactéries?
Une oese stérile
2 critères pour valider l’isolement des bactéries?
Des colonies isolées et pures (pas de contaminant)
Méthode pour distinguer les bactéries Gram+ des bactéries Gram-? comment les reconnaître? Quelles autres paramètres peut-on aussi distinguer?
Coloration de Gram
Gram+ : violet
Gram- : rose
La forme : bacille, coque
Que mettons en évidence avec le test oxydases? Chez quel type de bactéries ce test se fait-il?
La présence de cytochrome c
chez les bactéries Gram-
Méthode de réalisation du test de l’oxydase? lecture des résultats?
Prélever une colonie et ajoutez une goutte de réactif
Changement de couleur vers le bleu-violet : le test est positif / sinon il est négatif
Que mettons en évidence avec le test catalase? Chez quel type de bactéries ce test se fait-il?
Dégradation de H2O2 par la catalase
Chez les bactéries Gram+
Méthode de réalisation du test de la catalase? lecture des résultats?
Prélever une colonie et la déposer sur une lame y ajouter une goutte de réactif
Si il y a apparition de bulles ou de mousse le test est positif sinon il est négatif
4 types respiratoires possible chez une bactérie?
Aérobie stricte
Anaérobie stricte
Aero anaérobie facultative
Micro aérophilie
Protocole expérimental pour déterminer le type respiratoire d’une bactérie? Lecture des résultats?
On utilise une gélose viande-foie liquide
Dans le tube se forment un gradient d’O2 : la surface est riche en O2 alors qu’au fond il y a peu d’O2
- si la croissance se fait à la surface : aérobie stricte
- si la croissance se fait juste en dessous de la surface : Micro aérophile
- si la croissance se fait au fond du tube : anaérobie stricte
- si la croissance se fait dans tout le tube : Aero anaérobie facultative
3 types de métabolisme énergétique chez les bactéries?
Oxydatif, fermentaire ou les deux (mixte)
Matériel utilisé pour la détermination du métabolisme énergétique chez les bactéries? Lecture des résultats?
Deux tubes : l’un sera anaérobie et l’autre en aérobiose
- si il y a un changement de couleur dans le tube en aérobiose : métabolisme oxydatif
- si il y a un changement de couleur dans le tube en anaérobiose : métabolisme fermentaire
- si il y a un changement de couleur dans les deux tubes : métabolisme mixte
Qui utilise-t-on pour la détermination de l’espèce de la bactérie?
On utilise une galerie API
