Spectrophotométrie (examen 1) Flashcards
Qu’est-ce que la spectrophotométrie?
Méthode analytique qui permet de mesurer la DO ou ABS d’une substance chimique en vue de déterminer sa concentration
Que nous indique le flux émergent?
L’abs de la solution
Quelles sont les 2 manières de décrire le rayonnement électromagnétique?
1) corpusculaire : propagation des photons
2) ondulatoire: onde électromagnétique qui se manifeste sous la forme d’un champ magnétique
Qu’est-ce qu’un spectre électromagnétique?
C’est une classification qui présente l’ensemble des ondes électromagnétiques selon leur longueur d’onde et leur fréquence
Qu’est-ce qu’un longueur d’onde?
Distance entre 2 pics d’onde
Elle est exprimée en nm ou en cm ou en m
Quel est le spectre de la lumière visible?
longueur d’onde entre 388 nm et 720 nm
Quel est le spectre de la lumière ultraviolette?
longueurs d’ondes entre 100 et 388 nm
De quoi dépend l’énergie de la radiation électromagnétique?
De sa longueur d’onde
Qu’est-ce que la loi de Planck
E= h x c/longueur d’onde
h= constante de Planck
c= vitesse de la lumière
l’énergie d’un rayonnement est inversement proportionnel à sa longueur d’onde (plus les longueurs d’onde sont faibles, plus les rayonnements ont de l’énergie)
Qu’est-ce que l’absorption?
Lorsqu’un atome ou une molécule (après avoir été exposée aux rayonnements) absorbe une partie de l’énergie de celui-ci.
Que représente les pics sur un spectre de l’absorption (graphique)?
Les pics représentent les longueurs d’onde pour lesquelles on observe un maximum d’absorption
La position des pics et leur hauteur est spécifique pour chaque substance (spécificité d’absorption)
Expliquer la couleur des choses?
On voit les couleurs dont les longueurs d’onde ne sont pas absorbées
ex: un chandail rouge signifie que le bleu, le vert ont été absorbés, mais le rouge non, il est réfléchi donc on le voit
Qu’est-ce qu’un chromophore?
Groupe d’atomes qui absorbe des radiations du visible
Qu’est-ce que la transmittance?
Mesure de la proportion de la lumière qui travers un corps absorbant
T= I/I°
I: rayon émergent
I°: rayon incident
Qu’est-ce que la loi de Beer-Lambert?
A= - log I°/I
Plus une solution est concentrée, plus l’intensité de la lumière transmise diminue
Plus le trajet à parcourir par la lumière est long, plus l’intensité de la lumière transmise diminue
Quels sont les différents types de coefficient d’absorption?
E (bizzare) = coefficient d’absorpiton molaire
E0,1%= coefficient d’absorption spécifique
E1%= coefficient d’absorption spécifique
Pour passer de E0,1% à E1% il faut: E0,1% x 10
Quelles sont les 4 conditions à respecter pour pouvoir appliquer la loi de Beer-Lambert?
1) la lumière doit être monochromatique (une seule longueur d’onde)
2) la solution doit etre homogène
3) le soluté ne doit pas émettre de fluorescence
4) la concentration de la solution ne doit pas être trop élevée
Vrai ou Faux: les absorbances sont additives
Vrai, si une solution contient plusieurs espèces absorbantes, alors l’absorbance de la solution est l’addition de tout
Quel est le principe de dosage de Bradford:
- le colorant se lie aux acides aminés
- on mesure l’abs à 595nm (détecte les protéines)
- seuil de sensibilité : 1 à 10 microgramme
- la couleur passe de brun-rouge à bleu
Quel est le principe de dosage de Biuret?
- réagit avec les liaisons peptidiques
- on mesure l’abs à 540 nm
- seuil de sensibilité 1 à 20 mg
- forme un composé bleu-pourpre
