Révision 2/4 Flashcards
Vrai ou faux : la ligase est une enzyme qui coupe l’ADN en créant des fragments à extrémités cohésives.
Faux
Vrai ou faux : la polymérase est employée dans une amplification en chaîne pour compléter les fragments d’ADN.
Vrai
Vrai ou faux : la transcriptase inverse permet la production d’ADNc à partir d’ARN.
Vrai
Vrai ou faux : l’électrophorèse permet la séparation des fragments d’ADN.
Vrai
Quelle technique permet à un plasmide d’entrer dans une bactérie?
Transformation par électroporation ou choc thermique
Quel est le but d’un buvardage Southern?
Étudier un fragment d’ADN génomique
Parmi tous les facteurs, lequel n’influence pas la séparation des fragments d’ADN sur gel d’agarose?
La pureté
Quelle est la définition d’une sonde nucléique utilisé dans le buvardage Southern?
Molécule d’ADN ou d’ARN utilisée pour détecter une séquence complémentaire. Elle doit être marquée pour être détectée.
Quelle étape ne fait pas parie d’un buvardage Southern?
Amplification de l’ADN
Vous voulez faire une sonde non radioactive. Quel produit allez-vous utiliser?
Digoxigénine
Quels types de membrane peuvent être utilisés pour un Southern blot?
Nylon chargé positivement
Non chargé
Nitrocellulose
Comment se nomme un vecteur d’ADN circulaire dans lequel on peut insérer un fragment d’ADN?
Plasmide
Qu’est-ce qu’un vecteur navette?
+ que 1 ori
Différents marqueurs de sélection
Peut avoir marqueur nutritionnel
Pourquoi utilise-t-on une étiquette His?
Pour purifier les protéines recombinantes
Si dans une cellule il n’y a pas de lactose, est-ce que la beta-galactosidase va être synthétisée? Pourquoi?
Non
Le gène est inductible, il doit y avoir du lactose dans le milieu pour déclencher l’opéron lactose.
Expliquer la différence entre un marqueur de criblage et un marqueur de sélection.
Criblage : détermine quelles bactéries possèdent le plasmide avec l’insert.
Sélection : résistance à un AB. Seules les bactéries avec le gène vont pousser.
Nommer les 3 composantes de base d’un vecteur de clonage.
Origine de réplication
Gène de sélection
Site de clonage multiple
À quoi sert l’origine de réplication?
Permet la réplication du plasmide dans la bactérie
À quoi sert le gène de sélection?
Permet la sélection des bactéries qui ont intégré le plasmide.
À quoi sert le site de clonage multiple?
Séquence d’ADN qui contient une multitude de sites de restriction
Que signifie le terme vecteur dans la technique du clonage?
Un plasmide employé pour introduire de l’ADN dans une cellule vivante.
Quelle bactérie est fréquemment utilisée pour le clonage?
E. coli
Comment une bactérie peut devenir compétente?
Avec du CaCl2
Quel est le rôle du gène AMPr dans un vecteur de clonage?
Gène de résistance à l’ampicilline.
Des bactéries transformées avec un plasmide (LacZ), contiennent un insert d’ADN et sont ensemencées sur un milieu contenant du X-gal. De quelle couleur seront les colonies?
Blanches
Les bactéries transformées avec un plasmide (LacZ) ne contenant pas d’insert d’ADN sont ensemencées sur un milieu contenant du X-gal. De quelle couleur seront les colonies?
Bleues
Lors de l’insertion d’un ADN étranger dans un plasmide, pourquoi utilise-t-on la phosphatase alcaline?
Pour enlever les groupements phosphates du plasmide.
Dans quel cas il faut déphosphoryler le plasmide?
Quand le plasmide risque de se refermer sur lui-même sans insert.
Quel est le rôle du gène de résistance à un antibiotique contenu dans un plasmide?
Sélectionner les bactéries transformées.
Quel est le rôle de la polymérase?
Ajoute les nucléotides du côté 3’ (Activité 5’ - 3’)
Quel est le rôle de la ligase?
Liaison phosphodiester entre le groupement phosphate (5’) et le groupement hydroxyle (3’).
Quel est le rôle de l’hélicase?
Permet d’ouvrir la double hélice d’ADN
Quel est le rôle de la phosphatase alcaline?
Retire le groupement phosphate (5’) d’un acide nucléique.
Quel est le rôle de la polynucléotide kinase du phage T4?
Phosphorylation de l’ADN.
Transfert d’un phosphate sur l’extrémité 5’ de l’ADN.
