Enzymes de modification de l'ADN Flashcards
Quelle est l’origine des enzymes de restriction?
Bactérienne
Qu’est-ce qu’un endonucléase?
Une enzyme qui coupe à l’intérieur de la chaîne d’ADN.
Qu’est-ce qu’une exonucléase?
Une enzyme qui coupe à partir des extrémités.
Qu’est-ce qu’un palindrome?
Une séquence de nucléotides identique de 5’ en 3’ sur les deux brins.
Que sont les isoschizomères?
Deux enzymes différentes qui reconnaissent le même site de restriction.
Qu’est-ce que l’activité étoile?
Une enzyme de restriction effectue des digestions non spécifiques de l’ADN dans des conditions non optimales.
Quelle précautions est essentielle avec les enzymes de restriction en biologie moléculaire?
Manipulation sur glace
Comme agit la ligase sur deux brins d’ADN digérés par une enzyme de restriction?
Elle reconstitue la liaison phosphodiester entre le groupement phosphate d’un carbone 5’ et le groupement hydroxyle d’un carbone 3’ de deux nucléotides adjacents des brins d’ADN.
À quoi sert la phosphorylation de l’ADN en biologie moléculaire? Quelle est l’enzyme utilisée?
Elle permet le marquage radioactif de l’ADN grâce à la polynucléotide kinase du phage T4.
Qu’est-ce que la déphosphorylation de l’ADN?
Prévient la ligation d’ADN au cours de constructions de molécules d’ADN.
Quelle est l’utilité du magnésium dans certains tampons de réaction en biologie moléculaire?
Il agit comme cofacteur des enzymes de restriction.
À quoi peut-on généralement attribuer une digestion enzymatique incomplète? (5)
Enzyme mal entreposée
Mauvais tampon
Temps de digestion trop court
Impuretés dans l’ADN
Température de digestion incorrecte
En quoi le glycérol peut-il influencer l’activité de l’enzyme de restriction? Comment y remédier?
Il inhibe l’activité de l’enzyme de restriction. On peut l’éviter en s’assurant que le volume d’enzymes ne dépasse pas 1/10 du volume total de réaction.
Quelles sont les conditions habituelles d’activité de l’enzyme de restriction en biologie moléculaire?
37 degrés Celsius pendant 2 heures.
Est-il possible de rendre une extrémité 3’ saillante simple brin en une extrémité franche en remplissant la portion simple brin?
Non, car il n’existe aucune polymérase à ADN capable de synthétiser de l’ADN à partir d’une extrémité 5’ libre.
