preparáty Flashcards
1
Q
Typy preparátů
A
- Bazické anilínové barviva = vážou se na nukleovou kyselinu v jádře
a. Nativní preparáty
b. Trvalé preparáty
2
Q
Nativní preparát
A
- Neobarvené nativní preparáty se v bakteriologii příliš nevyužívají
- Nefixovaný preparát
- Nativní preparáty slouží hlavě k diagnostice parazitárních a mykotických infekcí
- V bakteriologii se nativní preparát využívá například pro pozorování pohybující se Treponema pallidum pomocí mikroskopie v zástinu
- Postup přípravy nativního preparátu je jednoduchý:
- Na podložní sklíčko kápneme kapku fyziologického roztoku, do kterého kličkou vneseme vzorek
- Následně to celé přiklopíme krycím sklíčkem (bez bublinek) a pozorujeme mikroskopem.
3
Q
Fixovaný barvený preparát
A
- K fixaci preparátu dochází před barvením (chemikálií, plamenem)
1. Jednoduchý = methylenová modř (jestli tyčky/koky, jestli spóry)
2. Diagnostické = uspořádání G+/G- - Na sklíčko kápneme fyziologický roztok a do této kapky přidáme kličkou vzorek
- Celé to pak necháme zaschnout
- Nakonec připravený vzorek fixujeme pomocí plamene kahanu nebo například metanolem
- Účelem fixace je usmrcení bakterií a jejich pevné přichycení ke sklíčku, aby se při následném barvené nesmyly
- Barvení preparátů se provádí po fixaci vzorku
- Barvení jednotlivých struktur mikroorganismů nám ulehčuje jejich identifikaci
- Pro bakterie o velikosti několika µm se používá mikroskopie s imerzním objektivem s 1000x zvětšením pozorování
- Preparát na sklíčku zakápneme kapkou imerzního oleje, krycí sklíčko se nepoužívá
- Poté ponoříme objektiv do imerzního oleje
- Na konci pozorování je nutné očistit objektiv (buničinou navlhčenou benzinem)
4
Q
Barvení podle Grama - co to je
A
- Barvení podle Grama rozděluje bakterie na grampozitivní a gramnegativní
- Toto barvení je rychlé a jednoduché
- Principem je absorpce komplexu krystalové violeti s Lugolovým roztokem (roztok jodu v jodidu draselném) do bakteriálních buněk
- Rozdělení bakterií do dvou skupin je založeno na rozdílném vymývání tohoto komplexu organickým rozpouštědlem (acetonem) z bakteriální stěny
- Správnější název by tedy bylo Gramovo odbarvování
- K různému odbarvení dochází díky odlišné struktuře bakteriální stěny
- Bakteriální stěna obsahuje peptidoglykan murein
- Stěna gramnegativních bakterií je tenká, obsahuje velké množství lipidů
o Tenká stěna umožňuje lepší průnik organického rozpouštědla a snadné vymytí komplexu krystalové violeti z bakterií
o Proto se musí stěna dobarvovat karbolfuchsinem na růžovo - Stěna grampozitivní bakterií je silnější a vrstevnatá
o Silná stěna v sobě zadrží krystalovou violeť ve vazbě s jódem a nedochází k vymývání
o Grampozitivní bakterie se díky krystalové violeti zbarví tmavě modře až modrofialově
5
Q
Postup barvení dle Grama: (vlak)
A
- Připravíme si sklíčko = opálíme si z obou stran
- Nakreslíme na sklíčko ovál tužkou + číslo vzorku
- Opálíme nepopsanou stranu
- Na opálenou nepopsanou stranu dáme kapku fyziologického roztoku a do ní dáme trochu bakteriální kultury
- Necháme zaschnout
- Poté rychle 3x zafixujeme nad plamenem
- Na připravený fixovaný preparát kápneme krystalovou violeť a necháme ji působit (20 sekund)
- Pak přidáme Lugolův roztok, který obsahuje jód (20 sekund)
- Opláchneme vodou.
- Poté aplikujeme aceton (20 rychlých sekund)
- Opláchneme vodou
- grampozitivní bakterie díky silné stěně zůstanou obarveny, gramnegativní bakterie se odbarví. - Nakonec přidáme karbolfuchsin pro kontrast a dobarvení (30 sekund)
- Opláchneme vodou
- grampozitivní bakterie poté zůstávají stejně barevné, gramnegativní bakterie se barví do růžova
6
Q
Barvení na ACIDOREZISTENCI (podle Ziehl-Neelsena)
A
- Barvení na acidorezistenci je určeno pro acidorezistentní bakterie rodu Mycobacterium tuberculosis (TBC) a Nocardia
- Tyto mikroorganismy se nebarví podle Grama kvůli buněčné stěně, která obsahuje lipidy s mykolovými kyselinami
- Tyto lipidy špatně absorbují barviva a musejí se proto barvit za horka
- Takto absorbovaná barviva se poté nedají vymýt ani odbarvením rozpouštědly s příměsí silných kyselin (acidorezistence) nebo zásad.
- Acidorezistentní bakterie jsou karbolfuchsinem obarveny růžově až červeně
- Kontrastní pozadí je zelené, bakterie růžové
7
Q
Barvení Fleming
A
- Barveni endospór
- Spóry = červené
- Tělo bakterie = šedé/bezbarvé
8
Q
Barvení podle Giemsy
A
- Používá se nejčastěji k obarvení krevního nátěru nebo fixovaného vaginálního stěru
- Znázorňují se prvoci, chlamydie, bakterie, mykoplazmata, virové inkluze, organely a buněčné struktury
- Zjištění např. MALÁRIE
- Hlavně v parazitologii
- Diagnostické barvení
