Laboratorní diagnostika G+, kataláza+ koků

Question 1

Stafylokoky se rozlišují na:

Answer 1

• Plazmakoaguláza pozitivní
• Plazmakoaguláza negativní

Question 2

Mikroskopie

Answer 2

G+ koky v:
- Hloučcích
- Řetízcích

Question 3

Plazmakoaguláza pozitivní STAF

Answer 3

(nejvýznamnější je Staphylococcus aureus)
o Běžně na: kůži, v nose, ale i v přírodě
o Způsobuje onemocnění např:
 Infekce kůže a měkkých tkání (flegmóna, impetigo, infekce ran, folikulitida, zánět nehtového lůžka)
 Mastitis (infekce prsu)
 Pneumonie
 Osteomyelitis (kostí)
 Arthritis (klouby)
 Spondilodiscitis (páteř)
 Endokarditis (vlastní srdeční chlopeň)
 Umělé materiály (TEP = totální endoprotéza = umělé klouby, žilní katetry, kardiostimulátory, umělé srdeční chlopně…)
* Tvoří biofilm (stafylokoky milují umělé materiály, uchytí se na nich a kolem sebe začnou tvořit polysacharidovou hmotu zvanou biofilm)
o Podle rezistence k ATB se aureus dělí na:
 MSSA (=methycilin citlivý St. aureus)
 MRSA (=methycilin rezistentní St. aureus)

Question 4

Plazmakoaguláza negativní STAF

Answer 4

o Styphylococcus epidermidis, capitis, hominis
o Běžně na: kůži (komenzálové)
o Patologicky v:
 Krvi
 umělé materiály (hlavně umělé srdeční chlopně = endokarditis)
* Tvoří biofilm (stafylokoky milují umělé materiály, uchytí se na nich a kolem sebe začnou tvořit polysacharidovou hmotu zvanou biofilm)

Question 5

Selektivní půdy

Answer 5

Halotolerantní bakterie
- 5 % NaCl = Streptokoky, Enterokoky, Stafylokoky
- 8 % NaCl = Stafylokoky

Question 6

Biochemické testy

Answer 6

• Kataláza
• Fermentace glukózy
• Oxidázový test
• Plazmakoaguláza (Clumping)
• Hyaluronidáza
• ATB novobiocín

Question 7

Kataláza

Answer 7

• Využívá enzym peroxidáza
• Rozkládá peroxid vodíku za vzniku kyslíku
• 2H2O2 = 4HO = O2 + 2H2O

POZITIVNÍ (vznikají bublinky O2) = STAFYLOKOKY, MIKROKOKY

NEGATIVNÍ = STREPTOKOKY, ENTEROKOKY

Question 8

Fermentace glukózy

Answer 8

• Rozklad glukózy bez přístupu kyslíku

POZITIVNÍ = STAFYLOKOKY

NEGATIVNÍ = MIKROKOKY

Question 9

Oxidázový test

Answer 9

• Využívají ji aerobní bakterie
• Zda je přítomný cytochrom c oxidáza
• Využívá redukční činidlo

POZITIVNÍ (modrá) = MIKROKOK

NEGATIVNÍ (bez zbarvení, šedá) = STAFYLOKOKY

Question 10

Plazmakoaguláza (Clumping)

Answer 10

• Bakterie přeměňuje fibrinogen na fibrín (srážecí faktory)
• V kapilárách vznikají tromby
• Zastavuje fagocytózu
• Staphylococcus aureus dělá v králičí a lidské plazmě shluky (aglutinaci)

2 možnosti, jak udělat clumping:
= Vázaná koaguláza
- Shlukovací clumping
- Při „zdrcnutí‘‘ = POZITIVNÍ
- Reakce musí být rychlá
= Volná koaguláza
- Citrát v králičí plazmě
- Pokud je reakce POZITIVNÍ = plazma zkoaguluje = želé konzistence
- Ve zkumavkách
- Kultivace 4 h, 37C

POZITIVNÍ = STAPHYLOCOCCUS AUREUS

NEGATIVNÍ = OSTATNÍ PLAZMAKOAGULÁZA NEGATIVNÍ STAFYLOKOKY

Question 11

Hyaluronidáza

Answer 11

• Staphylococcus aureus ničí pouzdro Streptococcus equi

POZITIVNÍ = STAPHYLOCOCCUS AUREUS

NEGATIVNÍ = OSTATNÍ STAFYLOKOKY

Question 12

ATB novobiocín

Answer 12

ROZLIŠENÍ PLAZMAKOAGULÁZA NEGATIVNÍCH STAFYLOKOKŮ
- Toto ATB je různě citlivé
- Musíme změřit inhibiční zóny (v mm) a vyhodnotit dle tabulek

POZITIVNÍ = STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS
- Bakterie je citlivá (neroste v blízkosti ATB)

NEGATIVNÍ = STAPHYLOCOCCUS HOMINIS
- Bakterie je rezistentní (roste v blízkosti ATB)

Question 13

kataláza (postup)

Answer 13

1. vezmeme si sklíčko, na které dáme 1 kapku H2O2
2. vezmeme si sterilní kličku a nabereme si 1 bakteriální kolonii a romícháme v kapce

Question 14

plasmakoaguláza (postup)

Answer 14

1. na kartičku si všude kápneme 1 kapku latexového testu
2. nabereme si sterilní platovou tyčinkou trochu kolonie a rozmícháme jí v kapce latexového testu
3. kroužíme kartičkou a hledáme aglutinaci