ATB citlivosti

Question 1

KVALITATIVNÍ test citlivosti na ATB a něco o něm

Answer 1

Diskový difúzní test (DDT)
- Ten nám určí, zda je bakterie k ATB citlivá či rezistentní dle inhibičních zón kolem ATB disků
= zda je tedy ATB účinné
- Je to levný test
- Neurčí nám, kolik je potřeba koncentrace ATB k usmrcení bakterie na rozdíl od kvantitativních metod
- Difúzní metoda

Question 2

provedení DDT

Answer 2

1. Z čisté, izolované kolonie, kterou chceme testovat připravíme suspenzi mikroba tak, že pomocí bakteriální kličky sejmeme kolonii bakteriálního kmene a přeneseme do fyziologického roztoku (2ml)
   - Zde je potřeba dodržet stanovený zákal hodnocený pomocí McFarlandových jednotek = Doporučená hodnota zákalu je 0,5 McFarlanda
2. Suspenzi mikroba naočkujeme pomocí sterilní vatovou tyčinkou na celý povrch MH půdy
   - Rozestíráme tak, že nejdříve uděláme kříž přes půdu a pak rozestíráme do všech stran
3. Pomocí speciálních dávkovačů přiklademe (narazíme) ATB disky
4. Kultivujeme – nejčatěji 24 hod./ 37 °C
5. Po inkubaci se měří průměr inhibičních zón = měříme celý průměr zóny (minimální inhibiční koncentrace = ještě taková koncentrace, která zastaví růst a množení bakterie)
6. Výsledek se porovná s tabulkou NCCLS a tak se zjistí, zda kmen je na antibiotikum citlivý nebo rezistentní nebo i intermediální (= musíme dát vyšší dávky ATB)

Question 3

pravidlo 15 minut (DDT)

Answer 3

• Do 15 minut rozetřít po půdě
• Do 15 minut narazit ATB disky
• Do 15 minut začít kultivovat

Question 4

KVANTITATIVNÍ - testy na citlivost ATB a něco o nich

Answer 4

• Jsou to testy kvantitativní, při kterých zjistíme nejen zda je bakterie rezistentní/citlivá/intermediální, ale i jakou koncentraci ATB musíme dát
• Ukážou nám i break point (taková koncentrace, který ještě neublíží pacientovi)E-test
  MIC

Minimální inhibiční koncentrace (taková koncentrace, která usmrtí bakterii)

Question 5

MIC postup

Answer 5

1. Vypálíme si všechny kličky
2. Čistou kličkou si nabereme kolonii vyšetřované bakterie z půdy a rozmícháme jí v MH-bujónu (2?ml, 0,5 McFarlanda)
3. Dáme do termostatu:
   G+ bakterie = 4 hodiny
   G- bakterie = 2 hodiny
4. Dále si pipetou odpipetujeme:
   G+ bakterie = 400ul
   G- bakterie = 200ul
5. Odpipetované množství dáme do fyziologického roztoku (ml) a promícháme
6. Obsah zkumavky se suspenzí vylejeme do petriho misky
7. Dále si vezmeme vypálené sterilní ježky, které vložíme do petriho misky a zakvedláme s nimi, aby všechny hroty byly ponořené v suspenzi
8. Dále ježka vložíme do jamiček testu MIC a znovu s ním zakvedláme
9. Dále dáme kultivovat na 24h/37C
10. Výsledky vyhodnocujeme pomocí tabulky a speciálního zrcátka

PRVNÍ ČIRÁ JAMIČKA = BAKTERIE JE USMRCENÁ
ZÁKAL JAMIČKY = BAKTERIE TAM STÁLE ROSTE

Question 6

E-TEST postup

Answer 6

• Používáme proužek, který je napuštěný různými koncentracemi ATB

1. Vypálíme si všechny kličky
2. Nabereme si 1 kolonii vyšetřované bakterie
3. Rozmícháme ji ve fyziologickém roztoku (2ml, 0,5 McFarlanda) = zákal se měří denzilametrem
4. Vezmeme si sterilní vatovou tyčinku a tu dáme do fyziologického roztoku s bakteriemi
5. Vezmeme si MH půdu, kterou si popíšeme číslem vzorku
6. Na půdu uděláme tyčinkou kříž a od něho rozetíráme do všech stran
7. Poté přidáme proužek E-testu doprostřed půdy
8. Dáme kultivovat na 24h/37C a vyhodnocujeme dle inhibičních zón