préparation protéines Flashcards
C’est quoi le principe de base de la chromatographie par échange d’ions
une interaction entre des ion de charges opposées ou on exploite les groupes chargés de la protéine d’intérêt
Que fait la désorption
diminue la charge nette par un changement de pH et augmente la concentration d’ions compétitifs
Que sont les étapes de la chromatographie par échange d’ions
équilibration, application de l’échantillon, élution par gradient et régénération.
Que sont les avantages de la chromatographie par échange d’ions
très flexible, choix entre cation et anion, beaucoup de résine différentes, pas cher et purification possible avec dénaturants sans charge et en présence d’urée
Que sont les limites de la chromatographie par échange d’ions
pas spécifique, peut pas utilisé guanudine comme dénaturant, besoin d’un système de chromatographie avec deux pompes
la séparation de la chromatographie par filtration sur gel est basées sur quoi
sur la taille moléculaire, les gels sont poreux et le protéines pénètrent dans les gels
Que son les étapes de la chromatographie par filtration sur gel
équilibration, application de l’échantillon, élution
Que son les avantages de la chromatographie par filtration sur gel
résines différentes, résine pas cher, purification possible avec des dénaturants, purification des protéines dans les corps d’inclusion et pas cher
Que son les limites de la chromatographie par filtration sur gel
pas bon pour purifier de grandes quantité de protéine, résine pas résistantes ou durables, vitesses très faibles
la séparation de la chromatographie en phase inverse est basée sur quoi
Sur les interactions hydrophobes, avec une désorption des protéines avec un solvant organique
Que son les étapes de la chromatographie en phase inverse
équilibration, application de l’échantillon, élution et régénération
Que son les avantages de la chromatographie en phase inverse
plusieurs type de résines qui donnent une très bonne résolution, purification dans les corps d’inclusion, résine résistantes et durables et vitesses d’écoulement sont très variées
Que son les limites de la chromatographie en phase inverse
colonnes cher, pas bon pour toutes les protéines comme grosses ou trop hydrophobe, entraine une dénaturation de la protéine d’intérêt et équipement cher
Comment est ce qu’on détermine la pureté de protéine
SDS-PAGE: gel avec dénaturant SDS ou les protéines sont séparées selon leur taille moléculaire
que sont les types de détection de SDS-PAGE
bleu de coomassie, coloration à l’Argent
Comment on verify l’identité de la protéine
spectrométrie de masse: méthode précise et sensible mais cher
Que sont les méthodes standard pour la synthèse de l’ARN
synthèse chimique et synthèse enzymatique
Que sont les étapes de la méthode standard pour la purification de l’ARN
construire vecteur, purification avec résine, purification avec échangeur de charge, purification par filtration sur gel t vérification de la pureté
Que sont les avantages de la méthode standard pour la purification de l’ARN
bonne résolution, pas d’instrument chromatographie et purification de grosses quantités d’ARN
Que sont les limites de la méthode standard pour la purification de l’ARN
long, fastidieux, dénature l’ARN et contamination avec des oligocènes d’acrylamide
Que sont les étapes de la purification par affinité avec la ARiBo-Tag
transcription in vitro de l’ARN fusionnée à ARiBo, immobilisation de l’ARN, auto-clivage avec la GlcN6P et élution de l’ARN
