Expression et purification des Protéines Flashcards
C’est quoi l’avantage de l’isolation de protéines de tissus animaux
protéine native, modifications post-traductionnelles, pas cher
que sont les limites de l’isolation de protéines de tissus animaux
sources limitées, petite quantité de protéines spécifiques et pas d’étiquettes
Que sont les étapes de l’isolation de protéines de tissus animaux
localisation d’une source, prélever l’organe optimal, homogénéiser les tissus et purifier la protéine
Que sont les étapes de l’expression de protéines dans la bactérie
construction de vecteur, sélection avec antibiotique, culture et induction de la protéine et purifier et analyser
C’est quoi l’avantage de l’expression de protéines dans la bactérie
Beaucoup de protéine pas cher, rapide culture et expression, vecteurs d’expression différentes et l’expression de protéines marquées est facile
que sont les limites de l’expression de protéines dans la bactérie
pas de modifications post-traductionnelles ou ponts disulfures, pas bon pour les protéines membranaires et différents codons chez la bactérie
Que sont les étapes de l’expression de protéines dans la levure
construction de vecteur, sélection avec acide aminé, cultiver et induction et purifier et analyser
C’est quoi l’avantage de l’expression de protéines dans la levure
Beaucoup de protéines et pas cher, pont disulfures et modification post-traductionnelles, expression de protéine marquées
que sont les limites de l’expression de protéines dans la levure
moins rapide, différents codons, pas bonne pour la protéine glycosylées
Que sont les étapes de l’expression de protéines chez l’insecte
construction de vecteur, identification et amplification de baclovirus, cultiver et infection de cellules et purifier et analyser
Que sont les avantages de l’expression de protéines chez l’insecte
ponts disulfures et modification post-traductionnelles, bon pour protéines glycosylées, vecteur avec His-tage et GST-tag et meilleures codon
Que sont les limites de l’expression de protéines chez l’insecte
pas rapide, moins de protéines, milieux spéciaux et production de protéines marquées difficile
Que sont les étapes de l’expression dans les cellules humaines
construction de vecteur, production de vecteur, cultiver et transfection de cellules et purifier et analyser
Que sont les avantages de l’expression dans les cellules humaines
Ponts disulfures, modifications post-traductionnelles et protéines membranaires, Les protéines contaminantes ne sont pas immunogènes, Vecteurs production avec His-tag et Codons parfaits- meilleur choix pour les très grosses protéines humaines
Que sont les désavantages de l’expression dans les cellules humaines
pas rapide, moins de protéines besoin d’un fermenter, milieux spéciaux et production de protéines marquées est impossible
Que sont les étapes de la purification à 3 étapes
capturer:isoler et concentrer, purifier: retirer grosses impuretés et polir: retirer petites impuretés
Que sont les agents chaotropiquess
le guanidinium et l’urée
qu’est ce qui arrive durant la précipitation saline de protéines
commence avec fraction soluble, la concentration de sulfate d’ammonium augmente, centrifuge et resurpendre le culot, répétition jusqu’à 80-90%, electrophorèse, puis resurpendre
que sont les types de chromatographie
FPLC/pression moyenne et HPLC/ pression haute
C’est quoi l’élution linéaire
un tampon, protocole facile, pas cher, mais séparation moins efficace
C’est quoi l’élutionpar gradient
plusieurs tampon, protocole compliqué, cher et séparation efficace
Comment fonctionne la détection par ultraviolets
La loi de beer-Lambert relie la quantité d’absorption de la radiation à la nature des espèces absorbantes
où est ce que les groupes amide absorbent dans l’ultaviolet
en bas de 250 nm
où est ce que les acides aminés aromatiques absorbent dans l’ultaviolet
au dessus de 250 nm
C’est quoi le principe de base de la chromatographie d’affinité
une liaison spécifique entre une protéine et une résine qui est réversible où on exploite une propriété biochimique unique de la protéine d’intérêt
Quand est la chromatographie d’affinité utilisé
durant les deux premières étapes de purification
Que sont les protéines de fusion pour la chromatographie d’affinité
glutathione-S-transférase (GST) et Attache-(His)
Que sont les ligands pour la chromatographie d’affinité
glutathione et nickel
Que sont les étapes de la chromatographie d’affinité
Étape d’équilibration, de liaison, puis d’élution
Que sont les avantages de la fusion de GST pour la chromatographie d’affinité
augmente solubilité des protéines, purification facile et édition facile
Que sont les désavantages de la fusion de GST pour la chromatographie d’affinité
grosse étiquette, purification n’est pas possible avec dénaturants et GST forme un dimère
Pourquoi doit ton avoir un site de coupure
il est parfois essentiel de cliver la protéine de fusion
Que sont les avantages de la fusion de la poly-histidine pour la chromatographie d’affinité
purification facile avec résine de nickel, édition facile avec un petit ligand, purification possible avec dénaturants et petite étiquette
Que sont les désavantages de la fusion de la poly-histidine pour la chromatographie d’affinité
augment la formation de corps d’inclusion, purification n’est pas possible avec antioxydants, pas bon pour purification de protéines qui lient des métaux de transition
