Preparation av DNA och modiferade enzymer

Question 1

Hur prepareras total cell-DNA?

Answer 1

1. man odlar bakterierna i odlingsmedium
2. cellerna centrifugeras ned som pellet och resuspenderas sedan
3. man lyserar cellvägg och cellmembran fysikaliskt eller med kemikalier
4. centrifugering skiljer nu cellextrakt från större cellkompononenter i pelleten

Question 2

Hur många nm i spektrofotometer krävs för att kunna mäta koncentrationen av DNA och RNA samt protein?

Answer 2

DNA och RNA: 260 nm

Protein: 280 nm

Question 3

Hur fungerar organisk och enzymatisk nedbrytning av cellextrakt för att få ut DNA?

Answer 3

Fenol/kloroformextraktion. DNA och RNA hamnar i vattenfas medan proteiner hamnar i mellanskikten. Man bryter ned RNA genom RNAs –> rent DNA-prov i vattenskikt