FISH

Question 1

Vad står förkortningen FISH för?

Answer 1

Fluorescence in situ hybridization

Question 2

Vad är en probe?

Answer 2

Kort DNA-sekvens

Question 3

Beskriv grundprincipen för FISH, steg för steg

Answer 3

1. Glas med metafaser från provet
2. Tillsätt prob på provet
3. Denaturera prov + prob
4. Hybridisering
5. Tvätta, färga in DNA med DAPI + antifade
6. Analysera i fluoroscensmikroskop

Question 4

Hur fungerar multicolor-FISH?

Answer 4

Varje kromosom infärgas med en specifik färg

Question 5

Nämn var två prober kallas och därmed binder till

Answer 5

• Centromerspecifika prober

- Lokusspecifika prober

Question 6

Nämn några mutationer som kan ses mha FISH

Answer 6

Amplifiering, deletion, insertion, translokation

Question 7

Hur förbereder man en metafas-FISH?

Answer 7

1. Cellodling
	○ Odla celler i cellodlingsmedium i 72 h, 37 grader
2. Preparation av celler och glas med metafaser
	○ Pipettera colcemid 2 h
	○ Späd i hypoton lösning
	○ Inkubation 20 min + centrifugering
	○ Späd med fixeringslösning
	○ Centrifugering
	○ Droppa på glas

Question 8

Vad gör colcemid vid metafas-FISH?

Answer 8

Förhindrar att kärnspolen bildas, stoppar celldelning och gör att kromosomerna blir mest kontraherade och synliga

Question 9

Vad gör den hypotona lösningen vid metafas-FISH?

Answer 9

Att cellerna sväller vilket gör att kromosomerna kan sprida sig på ett större område på objektsglaset

Question 10

Vad gör fixeringslösningen i metafas-FISH?

Answer 10

Att kromosomerna bevaras och erytrocyterna lyseras

Question 11

Vad består fixeringslösningen av?

Answer 11

metanol:ättiksyra (3:1)