Eukaryota vektorer

Question 1

Varför vill man uttrycka gener i eukaryoter?

Answer 1

Alla proteiner uttrycks inte korrekt i bakterier

Question 2

Vad behövs för en eukarot expressionsvektor?

Answer 2

• Selekterbar markörgen
• Origin of replication
• Promoter
• Transkriptionell och translationell stoppsignal
• Polyadenyleringssignal

Question 3

Vad är en polyadrenyleringssignal?

Answer 3

En sekvens som kan stoppa transkriptionen

Question 4

Nämn tre fördelar med jäst som värd för eukaryota proteiner

Answer 4

• Lätt att odla
• Lätt att manipulera genetiskt
• Utsöndrar i sig själv få proteiner vilket gör det lätt att rena fram protein

Question 5

Vad är skyttelvektorer?

Answer 5

Vektorer som kan användas i flera organismer

Question 6

Ange tre vektorer för att uttrycka rekombinanta proteiner i jäst

Answer 6

• YEp (yeast episomal plasmid)
• YIp (yeast integrating plasmid)
• YAC (yeast artifical chromosome)

Question 7

Vad har YEp, YIp och YAc för selektionsmarkörer i jäst?

Answer 7

YEp: LEU2
YIp: URA3+
YAC: TRP1, URA3

Question 8

Hur fungerar YAC i värdcellen?

Answer 8

Innehåller kromosomala fragment som gör att den beter sig som en stabil kromosom i jästcellen och nedärvs till dotterceller

Question 9

VIlka regioner finns hos Ti-plasmiden?

Answer 9

• T-DNA med gener för tillväxthormon och opiner (näringsämne för bakterier)
• Virulensregion (Vir), fungerar som maskineri för att klippa ut, överföra och integrera T-DNA i växtens DNA

Question 10

Binär strategi för genetiskt modifierad Ti-plasmid?

Answer 10

• Avväpnad Ti-plasmid där man tagit bort T-DNA-regionen men har Vir
• Replikerande Ti-plasmid där gen + selektionsmarkör sätts in mellan T-DNA-flankerna

Inserteras i agorabakterium –> växt infekteras –> T-DNA-gen integreras på kromosom –> gen uttrycks

Question 11

Kointegrationsstrategin för genetiskt modifierade Ti-plasmid?

Answer 11

• Avväpnad Ti-plasmid, har Vir och T-DNA-flankerna
• Icke-replikerande Ti-plasmid, har gen + selektionsmarkör inklonat i T-DNA-flankerna

Sätts in i Agorabakterium –> blir en vektor genom homolog rekombination –> T-DNA + gen integreras på växternas kromosom –> gen uttrycks

Question 12

Varför använder man genkloning i däggdjursceller?

Answer 12

1. Identifiera funktion hos människogen
2. Producera rekombinanta proteiner
3. Genterapi

Question 13

Vad är ex-vivo?

Answer 13

Patients celler tas ut och odlas, gen överförs –> genetiskt modifierade cellerna återinförs

Question 14

Vad är in-vivo?

Answer 14

Gen överförs via injektion till cell/vävnad hos patient

Question 15

Vad är CRISPR/Cas9-systemet?

Answer 15

En bakteriell försvarsmekanism mot bakteriofager

Question 16

Hur fungerar CRISPR/Cas9?

Answer 16

Bakteriofag inserterar sitt DNA i bakteries kromosom. Om bakterien överlever sparas delar av DNA:t i en “databas”, CRISPR för att känna igen ny attack. Om bakterien attackeras igen kommer Cas9-enzymet att klippa bort bakteriofagens DNA och reparera skadan på kromosomen.