Outils et recherche?? Flashcards
Définition artéfact
Structure artificielle qui apparait dans une lecture au microscope
Comment prouver qu’une structure n’est pas un artéfact?
- Préparer les échantillons de pls facons
- Différents fixateurs ou sans fixateur
Grossissement stérile vs efficace
Stérile c’est agrandir une image et ne pas voir plus de pixel, efficace c’est que ca devient encore plus clair et précis
Explique la limite de résolution et de (d)
Expression quantitative de la capacité de grossissement efficace d’un appareil optique
d est la distance minimale entre 2 points qui peuvent être distingué
Inconvénients (3) des microscopes à lumière UV
- Utilisation du quartz au lieu du verre
- Miroir à première surface
- Invisible pour l’œil humain
** Encore utilisé dans les microscopes électronique/photonique et avec la fluorescence
Microscopes photonique vs microscope électronique à transmission
Meilleure res. et grossissement efficace plus fort chez MET
Contraintes du MET
Coût très cher
Faire le vide
Préparations très minces
C. mortes
Explique l’utilisation du MET
- Faire le vide, pour s’assurer que les électrons ne vont pas se frapper ensemble
- Électrons voyagent à travers des structure et part électromagnétisme concentre les électrons sur le spécimen
- Électrons frappent le spécimen qui arrive sur la plaque fluorescente
- Électrons reguider sur une plaque phosphorescente
Explique la préparation de l’épaisseur du spécimen
- Fixation
- Déshydratation (Alcool remplace H2O)
- Intermédiaire (Toluène remplace alcool)
- Inclusion (Paraffine remplace toluène)
- Spécimen mis dans la paraffine
- Microtome fait des coupes très fine du spécimen
**La paraffine vient coller les coupes ensembles
Explique l’ultramicrotome
- Fixation
- Déshydratation (Alcool remplace H2O)
- Intermédiaire (Glutaraldéhyde remplace alcool)
- Inclusion (Tétroxyde d’osmium remplace glutaraldéhyde)
- Spécimen mis dans du plastique (oxyde de propylène qui se mélange mieux que la résine)
- coupe du bout du plastique
- Coupe du spécimen et dépot dans le ‘boat’ où il flotte
Explique le cryodécapage
- Préparation d’un spécimen en azote liquite
- Fracture par microhache (du bloc de glace)
- Sublimation de l’eau du cytoplasme
- Dépot de platine/carbone qui va faire un moule sur le bloc de glace
Comparaison coupe vs fracture
Fracture il y a du relief
Phénomène additif de la fluorescence
En gros, les couleurs primaires peuvent s’ajouter et montrer de nouvelles couleurs si des structures colorés de 2 ou plus de couleurs
Explique les 2 fluorescence
En lumière bleu
1. Lumière passe par filtre excitateur bleu, pour que juste le bleu passe.
2. La lumière bleue passe à travers le spécimen.
3. On passe à travers un filtre orange qui fait des couleurs rouge jaune et verte.
En UV
1. UV Passe à travers plusieurs filtre
2. Passe à travers le spécimen
3. Passe à travers filtre d’arrêt, et les couleurs bleus, rouges, jaunes et vertes passent.
Explique un exemple de l’immunofluorescence
Qu’est-ce que la cytoenzymologie?
Si une substance à des enzymes, ont peut colorés durant les réactions pour créer un complexe colorant-produit pour marquer ces substances.
Ça dl’aire de quoi une imprégnation métallique?
Ça dl’aire de quoi une coloration négative et son principe?
En gros, il va y avoir une solution métallique qui ne laisse pas passer les électrons, tandis que le spécimen va laisser passer le spécimen.
Ne peut pas se faire sur une coupe, besoin d’un structure en 3d
Explique la technique d’ombrage
Un fil de métallique est roulé sur un fil électrique, et le métal est évaporé est envoyé sur le spécimen.
Fait un effet négatif (on voit l’ombre en blanc, on veut inverser les couleurs pour voir le spécimen)
Requiert un objet en 3D (cryodécapage)
Explique l’immunocytochimie
Anticorps reliée à un complexe protéique comme la ferritine, qui a beaucoup de Fe3+, donc très dense aux électrons.
Explique l’immunocytoenzymologie
C’est quand un anticorps va se couplée à une enzyme
Explique les microscope à champ sombre
Explique la technique de contraste de phase
Lors que la lumière passe à travers un mileu, elle est ralenti. On observe la différence de déphasage entre le milieu sans spécimen et le milieu avec spécimen.
L’orsque les rayons lumineux déviés d’un quart de longueur d’onde par le spécimen et est dévié encore par l’anneau de phase qui le dévie encore d’un quart de longuer d’onde
Explique l’autoradiographie
Préparation au microtome du spécimen. Émulsion de crystaux d’AgBr qui vont se déposer sur le spécimen. On va développer le spéciment en chambre noire et on peut observer les grains d’Ag sur le spécimen.
Explique le microscope électronie à balayage
Explique la centrifugation différentielle
Les plus grosses sous-unités vont centrifuger en premier. On peut change le mélange de fiole pour avoir des plus petites sous-unités.
Noté qu’on peut enlver les objets sédimenté au fur et à mesure pour avoir juste l’objet désiré
Coefficient de sédimentation «s» un S vaux 1x10^-13 sec
Explique la centrifugation zonale
Basée sur l’équation de stokes.
Centrifugation où l’homogénat est déposé sur une solution de saccharose
Les objets les plus gros vont être dans le fond
Explique la centrifugation en gradient de densité
Basée seulement selon la densité. Les objets les plus denses sont dans le fond.
