Le complexe golgien Flashcards
Traffic intracellulaire des prot
- Prot non résidente du RE vont aller au Complexe golgien
- Golgien va agir comme centre de tri (voir diapo 2)
Qui a découvert le complexe golgien?
Camillo golgi grâce à l’argent métallique. A fait plusieurs échantillons pour montrer que ce n’était pas un artéfact
Le golgien au MET
Coupe mince: on voit un golgiosome en forme de saccule
Coupe épaisse(MET à haut voltage):
- le Golgi est fait de l’ensemble des golgiosomes des cellules
- Golgiosome est un empilement de saccules régulièrement espacés
- Golgiosome sont courbé avec une face concave et convexe
MET à haut voltage
Permet de voir des coupes épaisses
Pourquoi ont a utilisé l’acinus pancréatique?
Les prot vont se retrouver dans la lumière de l’acinus pancréatique
Étapes de l’expérience de pulse et chasse autoradiographique
- On met acinus pancréatique dans milieu chaud de leucine 3H
- Ensuite dans un Milieu froid de leucine pendant 10,40,120 min
- AG va se déposer sur substance
Ce qu’on a vu de l’expérience des prot sécrétés par cellules acineuses du pancréas
Chemin des prot
- RE (3min)
- Golgi (10 min)
- Vacuoles de sécrétion (40min)
- milieu extracellulaire(120 min)
Qu’est-ce résulat par fractionnement cellulaire des protéines dans l’acinus pancréatique nous indique?
On voit les conc des différentes fractions cellulaire de la prot
- Fraction dans microsomes rugueux (endoplasmique rugueux) -> on voit qu’au début très haute conc en baisse avec le temps
- Fraction dans microsomes lisse (complexe golgien) -> commence bas puis monte puis redescend
- Fraction dans grains de zymogène (vésicules de sécrétion -> augmente tranquillement avec le temps pour finir par être le plus concentré de tous
- Fraction du surnageant demeure constante (prot du cytoplasme sont constante)
Modèle de la migration des saccules
Les saccules qui vont avoir été sujet aux vésicules de transition migrait de la face cis vers la face trans.
- Laisse entendre que les saccules sont composé de la même façon
Description moderne du complexe golgien
(mettre image de diapo 12)
- Il y a un compartiment intermédiaire entre RE et Golgi: Le CIREG : Compartiment Intermédiaire Réticulum Endoplasmique Golgi (aussi nommé agrégats vésiculaires tubulaires) -> diffère du RE, car pas les memes prot que sur RE
- CIREG va fusionner avec le complexe golgien
Explique la fonction rétention des prot résidentes du RE par le complexe golgion
- Les prot solubles qui se sont évadés du RE vont se faire capter par des récepteurs dans le Golgi. Ils ne vont pas être lié au niveau du RE, mais avec une baisse de pH (RE = 7,2 et golgi=6,2) il va avoir une hausse de l’Affinité et la prot va se lier avec son récepteur.
- Des prot enchassé ds la membrane du RE avec une partie KKXX sur la partie cytosolique vont se faire reconnnaite par prot de recouvrement (p.ex COP1) -> va créer une vésicule qui va se détacher du Golgi et revient vers RE
Fonctions sécrétion cellulaire du golgi (les 2 types)
Constitutive: fusion membranaire non régulé
Contrôlé: fusion membranaire régulé (besoin de messager)
Fonction sunthèse des molécules transitant par la voie de sécrétion
On va faire la N-glycosylation
- On va terminer la glycolysation de la région terminal des N-glycoprotéaines et glycosylation des glycolipides. Le début se fait dans le RE
- Partie centrale de l’oligosaccharide n’est jamais attaquée par enzymes golgiennes
4 types d’oligosaccharide n-glycosidique
- Oligosaccharides phosphorylés
• Oligosaccharides riches en mannose
• Oligosaccharides complexes
• Oligosaccharides hybrides
Fct de la glycosylation
- Résistance aux protéases dans les
lysosomes
• Remplacement de la paroi de
peptidoglycane (par le glycocalyx) chez
les eucaryotes ancestraux car la paroi
empêchait la phagocytose
• Adhérence intercellulaire
• Contrôle de la qualité (RE) -> repliement des prot
Mais où vont certaines N-glycoprotéine
- Ceux qu’ion retire des bhay (oligosaccharide complexe) -> vers granules de sécrétion ou membrane plasmique
- Ceux qui sont phosphorylé (oligosaccharides phosphorylé -> vers le lysosomes
Jase moi de la O-glycosylation
- principalement dans le Golgi, mais desfois peut start dans le RE
- Pas d’ajout en bloc d’oligosaccharide
- Fini souvent par l’ajout de l’acide sialique
Les étapes:
1. Ajout de GalNAC (ds le saccule cis)
2. Ajout de galactose (saccule cis
A3. Ajout d’acide sialique (ds saccules médian et trans)
B3. Complexification (ds le saccule médian)
Qu’est-ce qu’on conclu de la centrifugation en gradient de densité (travaux de Rothman)?
- Les saccules ont une densité et contenu enzymatique différente
• Plus denses : Phosphotransférases
• Moyennement denses : Mannosidases et N-acétylglucosamine transférases •
• Moins denses : Galactoses transférases et acides sialiques transférases
Travaux d’immunocytochimie
Ac dirigé sur diverses glycosyl-transférases marquent spécfiquement chacune des saccules => conclusion: chaque saccule ont une identité enzymatique unique
Contradiction avec migration des saccules où chaque saccules ont les mêmes enzymes
Expliquer par le transport vésiculaire
Hypothèse du transport vésiculaire (Rothman)
Saccules sont fixe et leur contenu enzymatique varie d’un saccule à l’autre
- Les prot sont transportés d’un saccule au suivant par vésicule en périphérie
Hypothèse du transport vésiculaire -> mise à jour avec notion de CIREG
- CIREG né de la fusion des vésicules envoyé par le RE
- CIREG se déplace sur microtubule pour se joindre au Golgi en cis.
- Enzyme demeuerent dans leur saccule, alors que les prot migrent par vésicule périphérique (COP 1)
- Golgi recoit du RE 10% de sa surface totale membranaire par minute
Retour de l’hypothèse de la migration des saccules
Il y a des trop grosse prot de procollagène des fiborblaste qui ne peuvent pas être transporté par vésicule.
Fonctionnement:
• Les agrégats tubulaires vésiculaires (CIREG) fusionnent entre eux pour former le réseau cis - golgi.
• Maturation du réseau Cis -golgi produit un saccule cis qui deviendra un saccule médian etc.
• Les saccules reçoivent leurs enzymes par un flux rétrograde (trans vers cis) de vésicules enrobées de COP I.
L’hypothèse mixte de transport vésiculaire et migration des saccules
Le transport vésiculaire et migration des saccules ne sont pas mutuellement exclusifs
- Transport vésiculaire antérograde et rétrograde
- Transport rapide de petite molécule de cis vers trans
- Transport lent de gros agrégt par migration de sacules de cis vers trans
- Retour des enzymes ds saccules par un flux rétrograde de vésicule périphérique
Bon ok organisation des saccules par la matrice golgienne de prot
- Golgines: lonques prot fibrillaire de la matrice
- Kinésine de cis vers trans et dynéine de trans vers cis
- Les golgines s’associent aux prot Rab qui sont connecté aux vésicules de transport.
Fonction de directeur du traffic des macromolécules sécrétées
3 grands groupes de prot transitent en meme temps dans le golgi
- Prot lysosomales
- Prot sécrétées
- Prot membranaires
Le Réseau Trans Golgien (RTG) est le site du TRI des protéines => les envoi aux lysosomes ou membrane plasmique ou vésicule sécrétoire
Comment on fait distinction entre c. polarisé et non polarisé?
C. épithéliale (polarisée)
- Zonula occludens fait que c’est polarisé!
- 2 types de membrane: apicale et baso-latérale
Fibroblaste du tissu conjonctif (non polarisé)
- Possède même membrane partout et entièrement en contact avec milieu intérieur
Ok les trucs qui permettent de cibler les différentes membranes d’une cellule polarisé
Si on va vers membrane basolatérale:
- Prot solubles: il ya probablement des séquences de ciblages
- Prot membranaires: A séquences de ciblage cytosolique
> Motif tyrosine: YxxΦ ou NPxY; Φ résidus hydrophobes
> Motif dileuxcine (D/ExxxLL
> Reconnus par AP1B (comme l’adaptine) qui recrute ensuite la clathrine
Si vers membrane apicale:
- Prot sécrétées: Active SPCA1 quand il y a radeau lipidique (hause [cholestérol] et [sphingomyéline])
- Prot membrnaire:
> Ciblage par N- ou O- glycosylation : association à des lectines de ciblage
> Domaine transmembranaire associé aux radeaux lipidique
> Ciblage par présence d’une ancr GP1 : Activation de SPCA1, puis l’entrée de calcium active Cab45 qui provoque l’agrégation des protéines avec ancres GPI et favorise leur exportation.
Explique le mécanisme de rétention des enzymes résidentes du golgi
- Exclusion par épaisseau de la membrane (radeau lipidique)
> les prot résidents ont un court domaine transmembranaire donc ne peuvent pas aller dans le radeau lipidique - Retenu par un domaine transmembranaire spécifique : certaine prot plus stables dans un env composé différement (cholestérol, phospholipide)
Renouvellement de la membrane plasmique par le Golgi
Transport des vésicules vers la membrane plasmique par la kinésine sur les microtubules. Le golgi est un site important de synthèse des sphingolipides. Le RE synthétise des précurseurs de sphingolipides.
Chronologie de la sécrétion cellulaire
La pompe à protons -> hausse acidification -> entassement des prot -> réduction volume des vésicules
