Necroptose/pyroptose Flashcards
3 type de mort cellulaire (+exemples)
type 1= caspase dépendant (apoptose, phagocytose)
type 2= caspase indépendant, cathpsine dépendant (autophagie)
type3= caspase indépendant, médié par RIP3 et MLKL (nécrose et nécroptose)
c’est quoi la nécroptose
processus pro-inflammatoire et indépendant des caspases
4 caractéristiques morphologiques de la nécroptose
1) gonflement et arrondissement de la cellule
2) aspect granuleux du cytoplasme
3) noyau intact
4) rupture de la membrane et expulsion du contenu cellulaire
6 signaux qui peuvent initier la nécroptose
1)infection virale
2)drogues anti-cancéreuses
3) ARNdb et dommages à l’ADN
4) stress du RE
5)lippopolysaccharide
6) TNF, Fas, TRAIL, IFN
3 protéines effectrices de la nécroptose
RIPK1, RIPK3 et MLKL
c’est quoi le RIPK1
integrateur de signaux de stress cellulaire qui possède plusieurs domaines
c’est quoi les 4 domaines de la RIPK1 et leur fonction
-domaine kinase N-terminal: promouvoit l’apoptose et la nécroptose
-domaine intermédiaire: où RIPK1 est ubiquitiné (pas de nécroptose)
-domaine de mort C-terminal: activation de l’apoptose, recrute FADD et caspase-8
-domaine RHIM:recrute et lie RIPK3
c’est quoi le RIPK3
homologue de la RIPK1, nécessaire pour l’activation de MLKL et forme le nécrosome
c’est quoi le MLKL
une pseudokinase effectrice de la nécroptose qui possède un domaine de faisceau à 4 hélices N-terminales. Forme des pores dans la membrane plasmique
2 conformations possibles pour RIPK1
1) conformation fermée (kinase déficiente et ubiquitiné)
2) conformation ouverte (kinase active)
Que se passe lors de la conformation fermée de la RIPK1
la kinase est ubiquitinée et elle active NF-kB et MAPK alors pas de nécroptose
que se passe pendant la conformation ouverte de la RIPK1
la kinase est active et elle initie l’apoptose ET la nécroptose
3 étapes de la cascade de signalisation pour initier la nécroptose
1) RIPK1 se fait dé-ubiquitiner et se détache du récepteur TNF (forme ouverte)
2) RIPK1 recrute RIPK3 via domaine RHIM
3) RIPK3 recrute MLKL
3 conséquences sur l’assemblage des protéines après la stimulation de la voie du TNF
1) stimulation de la voie de NF-kB
2) activation de l’apoptose dépendante de la caspase 8
3) activation de la nécroptose lors de l’inhibitiom de la caspase 8
la conformation ouverte de RIPK1 mène à la formation de 2 complexes, lequels?
1) IIa=TRADD, FADD, CASP8 et RIPK1
2) IIb=FADD, CASP8, RIPK1
lors de l’inhibition de la caspase 8, que se passe avec RIPK3 et MLKL
RIPK3 phosphoryle MLKL et MLKL est transloqué à la membrane. MLKL induit des pores dans la membrane et relache les DAMPs
rôle de la nécroptose dans le cancer
elle peut aider à réduire la croissance tumorale, mais l’inflammation causée (par relachement des DAMPs) peut promouvoir la formation de métastases et les fonctions immunosuppressives
5 Méthodes pour étudier la nécroptose
1) effets des inhibiteurs pharmacologiques
2) translocation membranaire de la MLKL par immunostaining
3) mesure de l’expression de MLKL, RIPK1, RIPK3
4) Western pour voir la phosphorylation de RIP1, RIP3 et MLKL
5) détection de la formation du nécrosome
4 inhibiteurs de la nécroptose
1) Nec-1 (pour RIP1)
2) GSK843 et GSK872 (pour RIPK3)
3) NSA (pour MLKL)
4) zVAD-fmk (pour caspase 8)
c’est quoi la pyroptose
mort nécrotique programée pro-inflammatoire, gasdermine-dépendante
6 changements morphologiques de la pyroptose
1) gonflement de la cellule
2) apparition de petites bulles à la membrane juste avant la formation des pores
3)présence de corps pyroptotiques
4) présence de pores rend les cellules accessibles à l’iodure de propidium
5) cellules exposent leur phosphaditylsérine (PS)-permet marquage à l’annexine V
6) noyau demeure intact
c’est quoi les 6 gasdermines qui composent la superfamille
GSDM A, B, C, D, E et DFNB59
2 domaines de la GSDM
domaine N-terminal et C-terminal
que se passe avec les gasdermines lorsque la cellule est exposée à certains stimuli pour activer la pyroptose
les GSDM sont clivés par les caspases ou granzyme. Le domaine N-terminal s’oligomérise et forme des pores dans la membrane ce qui permet la liberation des molécules inflammatoires et la mort cellulaire
la voie canonique de la pyroptose est médié par quoi?
par l’inflammasome et la GSDM-D
comment l’inflammasome est formé et ses 3 composantes majeures
1) récepteurs
2) molécules adaptatrices (ACS)
3) pro-caspase 1
formé en présence de DAMPs
5 récepteurs rétrouvés chez l’inflammasome
NLRP1, NLRP3, NRLC4, AIM2 et pyrin
4 étapes de la voie canonique et la formation de l’inflammasome
1) inflammasome formé par NLRP1 ou NLRP3 qui vont former un pont avec la molécule ACS
2) ACS interagit avec caspase-1 via domaine CARD et l’active
3) Caspase-1 va cliver et activer GSDM-D
4) GSDMD-N migre à la membrane et se lie au phosphatidyl-inositol phosphate et à phosphatidylsérine pour induire la mort cellulaire par la formation des pores
2 étapes de la voie non-canonique de la pyroptose
1) lipopolysaccharides (LPS) intracellulaires se lient à la caspase 4/5/11 via domaine CARD
2) caspase activée et elle clive GSDM-D sur l’Asp276
c’est quoi la voie de la GSDM-E et la caspase 3 pour la pyroptose
un agent de chimiothérapie clive caspase-3 qui va ensuite activer la GSDM-E
n’implique pas la voie canonique ou la voie non-canonique
c’est quoi la voie des granzymes pour pyroptose
les lymphocytes produisent des granzymes A qui clivent la GSDM-B pour activer la pyroptose
Les cellules NK produisent des granzymes B qui vont cliver la GSDM-E pour activer la pyroptose
2 points d’interconnexion entre les mécanismes de mort programée et que se passe
1) caspase-8: inhibition mène à l’activatiom de RIP1 et à la nécroptose. Activation de la caspase-8 favorise l’apoptose
**caspase8 peut aussi cliver GSDM-D pour activer la pyroptose
2) RIP: inhibition par la nécrostatine active la voie apoptotique
Comment étudier la pyroptose (4)
1) Western pour caspase-1
2) western pour GSDM-D
3) évaluation des cytokines (forme clivée ou non)
4) microscopie électronique pour voir les pores formés
