Necroptose/pyroptose

Question 1

3 type de mort cellulaire (+exemples)

Answer 1

type 1= caspase dépendant (apoptose, phagocytose)
type 2= caspase indépendant, cathpsine dépendant (autophagie)
type3= caspase indépendant, médié par RIP3 et MLKL (nécrose et nécroptose)

Question 2

c’est quoi la nécroptose

Answer 2

processus pro-inflammatoire et indépendant des caspases

Question 3

4 caractéristiques morphologiques de la nécroptose

Answer 3

1) gonflement et arrondissement de la cellule
2) aspect granuleux du cytoplasme
3) noyau intact
4) rupture de la membrane et expulsion du contenu cellulaire

Question 4

6 signaux qui peuvent initier la nécroptose

Answer 4

1)infection virale
2)drogues anti-cancéreuses
3) ARNdb et dommages à l’ADN
4) stress du RE
5)lippopolysaccharide
6) TNF, Fas, TRAIL, IFN

Question 5

3 protéines effectrices de la nécroptose

Answer 5

RIPK1, RIPK3 et MLKL

Question 6

c’est quoi le RIPK1

Answer 6

integrateur de signaux de stress cellulaire qui possède plusieurs domaines

Question 7

c’est quoi les 4 domaines de la RIPK1 et leur fonction

Answer 7

-domaine kinase N-terminal: promouvoit l’apoptose et la nécroptose
-domaine intermédiaire: où RIPK1 est ubiquitiné (pas de nécroptose)
-domaine de mort C-terminal: activation de l’apoptose, recrute FADD et caspase-8
-domaine RHIM:recrute et lie RIPK3

Question 8

c’est quoi le RIPK3

Answer 8

homologue de la RIPK1, nécessaire pour l’activation de MLKL et forme le nécrosome

Question 9

c’est quoi le MLKL

Answer 9

une pseudokinase effectrice de la nécroptose qui possède un domaine de faisceau à 4 hélices N-terminales. Forme des pores dans la membrane plasmique

Question 10

2 conformations possibles pour RIPK1

Answer 10

1) conformation fermée (kinase déficiente et ubiquitiné)
2) conformation ouverte (kinase active)

Question 11

Que se passe lors de la conformation fermée de la RIPK1

Answer 11

la kinase est ubiquitinée et elle active NF-kB et MAPK alors pas de nécroptose

Question 12

que se passe pendant la conformation ouverte de la RIPK1

Answer 12

la kinase est active et elle initie l’apoptose ET la nécroptose

Question 13

3 étapes de la cascade de signalisation pour initier la nécroptose

Answer 13

1) RIPK1 se fait dé-ubiquitiner et se détache du récepteur TNF (forme ouverte)
2) RIPK1 recrute RIPK3 via domaine RHIM
3) RIPK3 recrute MLKL

Question 14

3 conséquences sur l’assemblage des protéines après la stimulation de la voie du TNF

Answer 14

1) stimulation de la voie de NF-kB
2) activation de l’apoptose dépendante de la caspase 8
3) activation de la nécroptose lors de l’inhibitiom de la caspase 8

Question 15

la conformation ouverte de RIPK1 mène à la formation de 2 complexes, lequels?

Answer 15

1) IIa=TRADD, FADD, CASP8 et RIPK1
2) IIb=FADD, CASP8, RIPK1

Question 16

lors de l’inhibition de la caspase 8, que se passe avec RIPK3 et MLKL

Answer 16

RIPK3 phosphoryle MLKL et MLKL est transloqué à la membrane. MLKL induit des pores dans la membrane et relache les DAMPs

Question 17

rôle de la nécroptose dans le cancer

Answer 17

elle peut aider à réduire la croissance tumorale, mais l’inflammation causée (par relachement des DAMPs) peut promouvoir la formation de métastases et les fonctions immunosuppressives

Question 18

5 Méthodes pour étudier la nécroptose

Answer 18

1) effets des inhibiteurs pharmacologiques
2) translocation membranaire de la MLKL par immunostaining
3) mesure de l’expression de MLKL, RIPK1, RIPK3
4) Western pour voir la phosphorylation de RIP1, RIP3 et MLKL
5) détection de la formation du nécrosome

Question 19

4 inhibiteurs de la nécroptose

Answer 19

1) Nec-1 (pour RIP1)
2) GSK843 et GSK872 (pour RIPK3)
3) NSA (pour MLKL)
4) zVAD-fmk (pour caspase 8)

Question 20

c’est quoi la pyroptose

Answer 20

mort nécrotique programée pro-inflammatoire, gasdermine-dépendante

Question 21

6 changements morphologiques de la pyroptose

Answer 21

1) gonflement de la cellule
2) apparition de petites bulles à la membrane juste avant la formation des pores
3)présence de corps pyroptotiques
4) présence de pores rend les cellules accessibles à l’iodure de propidium
5) cellules exposent leur phosphaditylsérine (PS)-permet marquage à l’annexine V
6) noyau demeure intact

Question 22

c’est quoi les 6 gasdermines qui composent la superfamille

Answer 22

GSDM A, B, C, D, E et DFNB59

Question 23

2 domaines de la GSDM

Answer 23

domaine N-terminal et C-terminal

Question 24

que se passe avec les gasdermines lorsque la cellule est exposée à certains stimuli pour activer la pyroptose

Answer 24

les GSDM sont clivés par les caspases ou granzyme. Le domaine N-terminal s’oligomérise et forme des pores dans la membrane ce qui permet la liberation des molécules inflammatoires et la mort cellulaire

Question 25

la voie canonique de la pyroptose est médié par quoi?

Answer 25

par l’inflammasome et la GSDM-D

Question 26

comment l’inflammasome est formé et ses 3 composantes majeures

Answer 26

1) récepteurs
2) molécules adaptatrices (ACS)
3) pro-caspase 1

formé en présence de DAMPs

Question 27

5 récepteurs rétrouvés chez l’inflammasome

Answer 27

NLRP1, NLRP3, NRLC4, AIM2 et pyrin

Question 28

4 étapes de la voie canonique et la formation de l’inflammasome

Answer 28

1) inflammasome formé par NLRP1 ou NLRP3 qui vont former un pont avec la molécule ACS
2) ACS interagit avec caspase-1 via domaine CARD et l’active
3) Caspase-1 va cliver et activer GSDM-D
4) GSDMD-N migre à la membrane et se lie au phosphatidyl-inositol phosphate et à phosphatidylsérine pour induire la mort cellulaire par la formation des pores

Question 29

2 étapes de la voie non-canonique de la pyroptose

Answer 29

1) lipopolysaccharides (LPS) intracellulaires se lient à la caspase 4/5/11 via domaine CARD
2) caspase activée et elle clive GSDM-D sur l’Asp276

Question 30

c’est quoi la voie de la GSDM-E et la caspase 3 pour la pyroptose

Answer 30

un agent de chimiothérapie clive caspase-3 qui va ensuite activer la GSDM-E

n’implique pas la voie canonique ou la voie non-canonique

Question 31

c’est quoi la voie des granzymes pour pyroptose

Answer 31

les lymphocytes produisent des granzymes A qui clivent la GSDM-B pour activer la pyroptose

Les cellules NK produisent des granzymes B qui vont cliver la GSDM-E pour activer la pyroptose

Question 32

2 points d’interconnexion entre les mécanismes de mort programée et que se passe

Answer 32

1) caspase-8: inhibition mène à l’activatiom de RIP1 et à la nécroptose. Activation de la caspase-8 favorise l’apoptose
**caspase8 peut aussi cliver GSDM-D pour activer la pyroptose

2) RIP: inhibition par la nécrostatine active la voie apoptotique

Question 33

Comment étudier la pyroptose (4)

Answer 33

1) Western pour caspase-1
2) western pour GSDM-D
3) évaluation des cytokines (forme clivée ou non)
4) microscopie électronique pour voir les pores formés