Méthodes en immunologie

Question 1

diff anticorps polyclonaux et monoclonaux

Answer 1

poly: sérum reconnaissant plusieurs épitoges d’un même antigène
mono: reconnaissant un seul épitoge du même antigène

Question 2

diff anticorps primaires et secondaires

Answer 2

primaires: reconnaissent un antigène quelconque
secondaires: reconnaissent la portion Fc d’un anticorps d’une espèce différente

Question 3

ELISA c’est quoi et à quoi ça sert?

Answer 3

c’est des essais sur microplaques, ça sert à détecter et quantifier des molécules à partir de mélanges complexes

Question 4

étapes ELISA

Answer 4

1. antigène immobilisé sur surface solide
2. anticorps spécifique de l’antigène ajouté afin de détecter l’antigène
3. enzyme couplée à l’anticorps catalyse une réaction colorée qui peut être quantifiée à l’aide d’un spectrophotomètre

Question 5

Western Blot c’est quoi et à quoi ça sert?

Answer 5

c’est des essais de détection de protéines en phase solide, ça sert à détecter, quantifier et caractériser des protéines et leurs modifications post-traductionnelles

Question 6

étapes Western Blot

Answer 6

1. mélange de protéines séparé par électrophorèse de gel et transféré sur une membrane de nitrocellulos
2. anticorps spécifique de l’antigène recherché est ajouté afin de détecter l’antigène
3. enzyme couplée à l’anticorps catalyse une réaction luminescente qui peut être visualisée sur film

Question 7

méthodes pour quantifier la cytotoxicité

Answer 7

essai de relargage de chrome51: chr51 est dans les cellules cibles, si les cellules cytotoxiques tuent ces cellules, chr51 est libéré et après centrifugation on le retrouve dans le surnageant, la radioactivité du surnageant est testée

Question 8

méthodes pour détecter prolifération

Answer 8

marquage radioactif, marquage fluorescent (CFSE)

Question 9

principe de la cytométrie en flux

Answer 9

technologie à base de laser permettant l’analyse de cellules isolées en suspension liquide, ça sert à caractériser et compter des cellules ou des particules

Question 10

étapes de la cytométrie en flux

Answer 10

1. suspension de cellules isolées passe devant un laser
2. photomultiplicateurs détectent pour chaque cellules:
   - lumière dispersée
   - fluorescence émise

Question 11

cellules non-marquées diffractent le faisceau lumineux en fonction de quoi?

Answer 11

de sa taille : forward scatter (FSC)
de sa granularité : side scatter (SSC)

Question 12

cytométrie en flux sur cellules marquées par quoi

Answer 12

anticorps couplés à des fluorophores, cellules portant l’antigène recherché émettra la fluorescence correspondante lors de son passage dans faisceau

Question 13

FACS c’est quoi et ça sert à quoi?

Answer 13

cellules chargées en fonction de leur profil fluorescent, charges + et - sont séparées, ça permet de générer des populations de cellules hautement purifiées