méthodes d'études de la cellule Flashcards
Définitions
c’est quoi l’épaisseur ?
=épaisseur de la préparation donc épaisseur de l’échantillon observé
Définitions
comment doit être l’épaisseur en MO ?
échantillons très fins qui permet d’obtenir transparence à l’inverse des loupes binoculaires
Définitions
c’est quoi le grossissement utile ?
- = rapport théorique qu’il y a entre les dimensions d’un objet vu à l’oeil nue et à travers l’instrument
- il permet à l’oeil de distinguer tous les détails les plus fins distinguement
Définitions
comment on va obtenir le grossissement de l’appareil optique ?
en multipliant les grossissements de chaques élements de l’appareil : oculaire, objectif…
Définitions
l’observation c’est quoi ?
- via le microscope se fait uniquement par transparence
- via la loupe binoculaire via une lumière réfléchie pour obt opaques
Définitions
la profondeur de chps c’est quoi ?
=zone comprise enter le premier et le dernier plan net de l’image
que ce passe-t-il pour la profondeur de champs si l’échantillon est proche ?
la profondeur de chp est faible
que ce passe-til pour la profondeur de chp si on a un fort grossissement ?
profondeur de champ est faible
Ct évolue ka profondeur de champ en fonction du grossissement ?
plus le grossissement ↗︎, plus la profondeur de champ ↘︎
Définitions
c’est quoi la résolution ?
= dist la plus petite entre 2 points d’un échantillon pour qu’ils puissent ête distinguer
quelle est le pouvoir de résolution pour oeil humain ?
75μm
pr obt observé à ≈25cm
quelle est le pouvoir de résolution pour une loupe binoculaire ?
≈ 2μm
formule résolution ?
R= 0,61 (𝝀/n.sin 𝛼)
c’est quoi la limite de résolution ?
dist la + petite entre 2 obt pour qu’ils puissent être distingués ds meilleures conditions d’observations possibles
comment évolue la résolution en fonction de la longueur d’onde 𝝀 et de la dist ?
+ la longueur d’onde ↘︎ + la limite de résolution=dist minimale ↘︎ et donc réolution ↗︎
comment est la résolution d’un ME comparé à un MO ?
résolution meilleure en ME qu’en MO car longueur d’e- plus courte que celle d’un photon
comment est la résolution quand elle est meilleure qualitativement ?
elle est faible quantativement = image plus nette quand la résolution est une faible dist
comment la longueur d’onde et la résolution varie ?
en terme de qualit” ils varient en sens inverse
comment varit la longueur d’onde et la limite de résolution ?
en terme de qualité
en terme de qualité ils varient dans le même sens
dnas le microscope quels élements permettent de controler le diamète de la zone éclairée de la préparation ?
le consenseur et le diaphragme
que permettent le condenseur et le diaphragme ?
permettent de controler le diamète de la zone éclairée de la préparation en condensant ± la lumière
comment on peut condenser la lumière ?
en refermeant le diaphragme : plus on le referme plus on condense la lumière
quels sont les ≠ types de microscope à lumière =MP ?
MP = microscope photonique
- microscope par transmission
- microscope à lumière polarisée, microscope à fond noir et microscope à contraste de phase
- microscope confocal à balayage
pourquoi on utilise les microscopes par transmission ?
pour observation directe de structure
pouvoir de résolution du microscope par transmission ?
0,2 μm
que permettent les. microscope à lumière polarisée, microscope à fond noir et microscope à contraste de phase?
informations indirectes sur ultrastructure des cell
que va utiliser le microscope confocal à balayage comme source lumineuse ?
un laser et permet d’obtenir image en 3D
que vont utiliser les MP comme type de lumière?
lumière visible : 390 à 760 nm
comment se fait l’observation de la loupe binoculaire ?
- en lumière réfléchie=>obt opaque
- trnasparence
limite de résolution de la loupe binoculaire ?
≈ 2μm
grossissement utile de la loupe binoculaire ?
x200 ≈
commet se fait l’observation au MP classique = droit ?
uniquement pas transparence sur échantillons de faibles épaisseur : <10μm
limite de résolution du MP ?
0,2 μm
grossissement utile du MP ?
x40 à x1250
chemin de la diffustion de l’image ?
- lampe
- préparation
- objectif
- oculaire
- oeil
l’objectif et l’oculaire ont-ils chacun un grossissement propre ?
oui chacune à un grossissement propre
que va percevoir l’oeil en MP ?
il percoit image grossie par l’oculaire et l’objectif
formule du grossissement totale ?
Gtot = Gonjectif * Goculaire =G1*G2
entre quel nombre est compris le Gtot ?
entre 40 et 1250 (oculaires souvent G = 10 et objectif G fixe ente A et 100)
que donne l’objectif comme image ?
une image agrandie et renversée
que fait la lentille quand on a un objectif à immersion ?
lentille baigne dnas un liquide dont l’indice de réfraction est proche de cleui de verre =améliore résolution
que fait l’oculaire à l’image ?
il l’agrandit une seconde fois
que voit donc l’oeil au MP classique ?
une image virtuelle agrandie renversée
MP inversé c’est quoi le ppe ?
le même que pour le microscope droit sauf que lumière incident éclaire obt d’en haut et objectif est en dessous
MP inversé
le MP inversé permet d’observer quoi ?
les cell en cultures à travers le fond d’une boite transparente
MP inversé
comment se fiat observation enMP inversé?
par transparence
MP inversé
limite de résolution MP inversé?
≈0,2 μm
MP inversé
grossissement utile du MP inversé?
x40 à x1250
comment se fait l’éclairage en microscope confocal ?
par balayeg laser
microscope confocal
quand on utilise microscope confocal?
en fluorescence
microscope confocal
peut on avoir une iamge 3D avec le microscope confocal?
oui si on fait un traitement informatique
microscope confocal
quel est le but de faire un traitement informatique ?
réduire le bruit de fond= lumière émise par fluorochromes situés hors champ => **résolution améliorée **
comment est le materiel biologique ?
relativement transparent, réfringent et peu visible à l’état frais
que veut dire le terme réfringent ?
il dévie bcp la lumière
que va-t-on vouloir faire pour améliorer l’observation du matériel biologique ?
on peut l’améliorer par l’optique et/ou par coloration
que premet la microscopie en contraste de phase ?
d’observer lesc ell san spréparation particulière ni coloration
ct fonciton la microscopie en contraste de phase ?
ds obt observé structures biologiques ont indice de réfraction ≠ de celui du milieu dans elquel elles se trouvent => ≠ niveaux de gris pour chaque milieu
microscopie en contraste de phase
comment est le matériel étudié ave la lumière ?
il est réfringent
microscopie en contraste de phase
que permet le contraste de phase ?
de selectionner lumière dévier par obt grâce ) 2 anneaux appariés
microscopie en contraste de phase
Où sont les 2 anneaux appariés ?
- l’un dans le condenseur = anneau clair
- ds objectif = anneau sombre
- l’ensemble laisse passer que la lumière réfractée
pourquoi on va utiliser le contraste de phase ?
pour étudier cell vivantes dnas contexte de culture cellulaire
inconvénient du contraste de phase ?
- résolution moins bonne
- apparition de halo
c’est quoi le contraste interférentiel ?
crée interférence lumineuse en lumière polarisé
comment fonction la lumière dans le contraste interférentiel ?
lumière direct est réduit par phénomènes interférentiel et la lumière qui traverse obt est transmise => pas de colorant