Méthodes d'études de la cell_MET Flashcards
c'est le cours de montier
la biologie cellulaire c’est quoi comme science ?
science des lois régissant phénomènes communs aux ≠ types de cell
quel est le but de la biologie cellulaire ?
préciser les relations entre les structures que l’on peut observer en microscopie et leurs fontion
de combien de cell et de bact un individu de 70kg est consitué ?
10¹³ cellules et 10¹⁴ bactéries
chaque cell à un génome de combien de paires de bases ?
≈ ⒊10⁹
quel est l’élement de fonctionnalité du génome ?
la prot => 10 à 20 millons de prot ≠
que va t-on utiliser pour étudier les cell sachant qu’il y a pls structures ds cell et pls types de cell ?
on utilise un modèle cellulaire
que permet de décrire le modèle cellulaire ?
une cell classique même si il n’en existe pas
la cell c’est l’unité…?
structurale et fonctionnelle du vivant
la cell est-elle capabel de vivre isolé ?
oui, elle a sa propre homéostasie
que veut dire le terme homéostasie ?
capacité d’un système à maintenir l’équilibre de son milieu intérieur, quelles que soient les contraintes externes
que doivent faire continuellemnt les cell ?
répondre aux besoins de l’oirgnaisme et être receptive
la cell est-elle capable de se rerpoduire ?
oui et peut même s’associer => organismes supérieurs
la cell est-elle un organisme vivant et dynamique ?
oui, elles peuvent aussi produire certaines substances qui vont influencer l’organisme
quels sont les outils permettant de pouvoir oobserver la cell puisqu’elle est de petite taille ?
- le microscope optique
- le microscope électronique
de quoi est à l’origine le MO ?
de la théorie cellulaire => = théorie d’organisation d’une popo cellulaire
qu’à permi de définir le ME ?
l’ultrastructure des cell et les organtites intracellulaire
que permet de classifié la théorie cellualire ?
classification des êtres vivants :
* en procarytoe => abct pas de noyau pas de matériel géntique délimité par mb nuléaire
* eucaryote => noyau contenant le matériel génétique, délimité
par une membrane nucléaire
comment appelle-t-on les animaux eucaryotes unicellualires ?
protozoaires
comment appelle-t-on les végétaux eucaryotes unicellulaires ?
protophytes
comment appelle-t-on les animaux eucaryotes pluricellualires ?
métazoaires =>hommes
comment appelle-t-on les végétaux eucaryotes pluricellulaire ?
métaphytes
que va coder un gène ?
un message→pour construire prot→assure fonction→réguler gène
quels sont les 3 étapes pour l’isolement des cell ?
- dissociation mécanique
- dissociation enzymatique
- identification des cell et enrichissemt des ≠ pop cellulaire
c’est quoi la dissociation mécanique des tissus ?
disoociation grossière mais nécéssaire => macroscopique
que permet la dissociation enzymatique = par des prot ?
permet d’obtenir cell isolées
quel enzymes on utilise pour dissocier cell de la MEC ?
enzymes portéolytiques → digèrenet MES
quel enzyme on va utiliser pour dissocier des cell de jonction ?
utilisation agents chélateurs (= emprisonneurs) du Ca²⁺ →dissociation chimique
comment se fair l’identification des cell et l’enrichissement des ≠ pop cellulaire ?
- aux ≠ propriétés physique : taille, adhérence, ensité
- utilisation d’Ac spécifiques couplés à un support ou à un colorant fluorescent = fluorochrome pour cytomère en flux/trix = FACS
- à la microdissection laser
quel est le ppe de la centrifugation sur gradie de densité ?
séparer les cellules d’un tissu selon leur densité
méthode d’analyse très
fréquente par ex pour analyser les lymphocytes
comment fonctionne la technique Ac couplé à un support ?
Ac monoclonal couplé à un support ou à un colorant fluorescent va venir reconnaître un antigène situé à l’extérieur de la cellule
À quoi peut couplé un Ac ?
- collagène
- colonne de billes de polysaccarides
- colonne aimantée
que permet la technique : Ac couplé à un support ?
repérer un antigène qui doit se trouver à la surface de la cellule
(= sur sa membrane). Elle ne permet pas de séparer des cellules en fonction de ce qu’il y a à l’intérieur de celles-ci :on l’isole
que veut dire FACS ?
Fluorescence Acivates Cell Sorter
que permet la cytométrie de flux/ FACS ?
d’analyser les cellules
individuellement et de façon automatique
=> comptage possible
que va pouvoir mesurer le FACS ?
propriétés optiques :
* taille
* complexité interne de cellules transportées dans un liquide vecteur :flux jusqu’à une source
d’excitation lumineuse :laser
À quoi peut-on associer le FACs ?
un trieur pour séparer les ≠ pop cellulaires
que veut dire Laser ?
= Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation = photons ≠
électrons
quels sont les avantages de la cytométrie de flux ou FACS ?
- rapidité : 10000cell en qq min
- application au cell vivante : taille, compléxité interne
- trier cell en fonction activité cellulaire : suivant angle de diffraction de la lumière qui les traverse
- haut débit pls milliers de cell
- intégration de pls paramèter etmarquages multiple
- cell peuvent être remises en culture
comment est la cell si on a un petit angle de diffraction ?
cellule en pleine activité dont la
complexité interne est grande (beaucoup de Golgi et de RE) → beaucoup de
faisceaux sont déviés.
comment est la cell si on a un grand nombre de diffraction ?
on a une cellule en activité plus calme dont
complexité interne est plus faible → beaucoup de lumière la traverse
que permet l’intégration de pls paramètre et des marquages multiples ?
permettant d’isoler pop très spécifiques→ l’obtent° d’une pop la plus identique
possible permet le transfert sur les malades
comment fonctionnel la cytométrie de flux / FAC ?
pop de cell passe ds chambre→emission LASER en fonction exctiation LASER+ incidence sur cell pn détermine ctn nombre d’éléments la concernant
que ce passe-t-il pour le LASER si on utilise un fluorochrome pour une cytométrie de flux?
LASER va toucher la cellule marquée et émettre une longueur
d’onde d’émission dans une autre gamme de fréquences → repérage des cellules.
que permet l’utilisation du fluorochrome en sytométrie de flux ?
- L’étude du cycle cellulaire (ex : population tumorale), en prenant en compte la variation de la quantité d’ADN d’une cellule diploïde
- D’isoler les sous-populations pures et stériles en vue d’autres études (ex : culture
cellulaire). - La quantification et la répartition de sous-populations cellulaires (ex : cellules Natural Killer = cellules qui « tuent » les cellules cancéreuses)
comment on peut réussier à quantifier l’ADN en FACS ?
la liaison stœchiométrique entre l’iodure de propidium (= DAPI) et l’ADN ainsi que l’intensité de la fluorescence qui permettent de
quantifier l’ADN de chaque cellule et de repérer la position dans le cycle cellulaire
que permet la microdissection laser ?
prélever quelques cellules dans une coupe de tissu et est
utile pour étudier un seul type cellulaire
existe aussi pour prélever quelques cellules sur un tissu vivant
quel est l’inconvenient d’utiliser la microddissection laser ?
risque d’abimer le tissu à causes des brülures du laser
pour quel tissu il est inutile d’utiliser la microdissection laser ?
sur du tissu hématopoïétique car les cell y sont indépendantes
la culture celluaire c’est quoi ?
maintien in vitro des cellules pendant une durée variable
la durée dépend de la nature des cellules
comment peut se faire la culture des cell ?
- milieu classique
- milieux chimiquement définis sans sérum SVF
c’est quoi un milieux classiques pour la culture des cell ?
T° de 37°C, on peut y mettre des substances nutritives élémentaires (eau, acides aminés, glucose, vitamines, sels/ions, oligoéléments) et des suppléments pour la division comme le sérum de veau fœtal SVF (hormones, facteurs de croissance, protéines, lipides, …)
pour quel type de sell on utilise milieux de cultures classiques ?
pour des cellules lambda - ex : cellules cancéreuses
pour quelle type de type on utiliser des milieux chimiquement défnins sans sérum ?
pour des cellules très
différenciées / difficiles à maintenir en vie
c’est quoi un milieux chimiquement définis sans sérum ?
On y met les substances nutritives de base avec de l’insuline, de la transferrine (= protéine transporteuse de fer) et de l’albumine. Des facteurs de croissance spécifiques comme l’EGF (= endothélial growth factor), la *NGF *(= neuronal growth factor) et l’IL-2 (= interleukine 2) font aussi partie du milieu.
que va-t-on ajouter dans les milieux stériles pour cultures des cell ?
un indicateur coloré : le rouge phénol.
comment on sait que milieu est acide ?
il y a division =>détection d’infection bact car elles produisent acide lactique ->↘︎pH
quel est l’objectif si on fait un élevage dans stérilité ?
réinjecter les cellules au patient par
la suite
comment se fait un élevage dans la stérilité ?
à 37°C et avec un CO2 à 5% (idem à l’atmosphère)
comment sont manipulés les milieux de culture ?
avec un incubateur et sous une hotte
Quand est-ce que les élevages dans la stérilité sont utilisé ?
pour la FIV, les vaccins, la thérapie cellulaire, la production de molé ect
que fait-on quand il ya culture primaire ?
il s’agit d’aller prélever une cellule dans un organisme pluricellulaire et de
la cultiver in vitro
