Labo 3 powerpoint : les enzymes de restriction

Question 1

Quels sont les 2 codes pour les acides aminés?

Answer 1

• Les abréviations (3e lettres de leur nom)

- Les lettres (1 lettre)

Question 2

C’est quoi des nucléases?

Answer 2

Ce sont des enzymes qui hydrolysent les acides nucléiques.

Question 3

C’est quoi des enzymes de restriction?

Answer 3

Ce sont les nucléases les plus spécifiques. Elles font partie de la catégorie des endonucléases.

Question 4

Chaque enzyme de restriction reconnaît quoi?

Answer 4

Chaque enzyme reconnaît une séquence d’ADN qui lui est spécifique.

Question 5

Quelle est l’origine des endonucléases?

Answer 5

Proviennent du système de protection des bactéries.

Il y a plus de 900 différentes endonucléases connues.

Question 6

La protection de l’ADN de la bactérie contre ses propres enzymes de restriction est fait par quel procédé?

Answer 6

Par la méthylation de certaines bases dans les séquences de reconnaissances de l’enzyme.

Question 7

Est ce que les enzymes de la bactérie coupent-elles l’ADN de la bactérie? et Pourquoi?

Answer 7

Non, car celui-ci est protégé par méthylation de l’ADN de niveaux des sites de coupure.

Question 8

Quelles sont les règles de la nomenclature pour les enzymes de restriction?

Answer 8

• 1e lettre de dénomination de l’enzyme en majuscule —> genre de la bactérie d’où a été extraite l’enzyme.
• 2e lettre et 3e lettre (en minuscules) —> l’espèce de la bactérie d’où l’enzyme est extraite
• 4e lettre écrite en majuscule —> la souche bactérienne
• 1 chiffre romain indique l’ordre de caractérisation de ces enzymes.

Ex :

• Eco R1 Extraite de Escherichia coli RYB
• Sma 1 Extraite de Serratia marcescens
• Pst 1 Extraite de Prvidencia stuartii

Question 9

Il y a combien de types d’enzymes de restriction?

Answer 9

3

Question 10

Quel est le type 1 d’enzymes de restriction?

Answer 10

Type 1 : reconnaît une séquence d’ADN, puis se déplace, s’arrête 1000 à 5000 paires de bases plus loin et libère quelques dizaines de nucléotides.

Question 11

Quel est le type 2 d’enzymes de restriction?

Answer 11

Type 2 : coupe l’ADN au niveau de la séquence reconnue, en général palindromique, parfaitement définie (de 4 à 8 nucléotides).

Question 12

Quel est le type 3 d’enzymes de restriction?

Answer 12

Type 3 : coupe une vingtaine de nucléotudes plus loin que le site de reconnaissance.

Question 13

Quel est le seul type d’enzyme de restriction qui est utilisé dans le cours Bio 2002?

Answer 13

Seulement les enzymes de restriction de type 2.

Question 14

En parlant d’ARN, c’est quoi des rARN?

Answer 14

Ce sont des ribosomes.

Question 15

En parlant d’ARN, quelle est la petite sous-unité rARN?

Answer 15

SS rRNA
(SS = small subunit)

Question 16

En parlant d’ARN, quelle est la grande sous-unité rARN?

Answer 16

LS rRNA
(LS = large subunit)

Question 17

C’est quoi mARN?

Answer 17

C’Est un ARN messager.

Question 18

C’est quoi un tARN?

Answer 18

C’est un ARN de transfert.

Question 19

Quel est le principe général de la PCR?

Answer 19

• Dénaturation (L’ADN est dénaturé à 94-95°C)
• Hybridation (T° ramenée à 50-65°C, dépendemment des amorces, pour permettre aux oligonucléotides de s’hybrider spécifiquement à l’ADN)
• Élongation (la polymérisation est effectuée à 72°C pour compléter le cycle).

Question 20

Comment appelle-t-on la T° à laquelle la moitié des brins d’ADN sont dissociés?

Answer 20

C’est la T° de fusion «Tm».

Question 21

À quoi servent les amorces?

Answer 21

Ils confèrent la spécificité à la réaction.

Question 22

C’est quoi la recherche et l’optimisation des amorces pour la PCR?

Answer 22

• Leur élaboration est une étape cruciale de la réussite de la PCR.
• Les amorces doivent être spécifiques, stables et compatibles.

Question 23

Quels sont les 4 différents types de mésappariement de l’amorce avec la matrice?

Answer 23

1 .Parfait

2. Arrêt précoce de la polymérisation
3. L’addition des nucléotides à l’extrémité 5’ de l’amorce est permise
4. L’addition des nucléotides vers le centre de l’Amorce est aussi permise, pourvu qu’il ne soit pas trop.

Pour voir des schémas, voir “Labo III 2014” à la page 13 et à la diapo 37.

Question 24

Quelles sont les différentes choses qu’on doit mettre dans le mélange pour faire la PCR?

Answer 24

• Nucléotides
• Polymérase
• Matrice (ADN modèle)
• Amorces (point de départ)
• Tampon (pour que la polymérase fonctionne)
• MgCl2 (pour la polymérase)

Question 25

Quels sont les facteurs importants lors de la PCR?

Answer 25

• La T° d’hybridation
• Le temps d’hybridation
• Le nombre de cycles
• La présence de MgCl2.