Labo 1 powerpoint : préparation D'ADN Flashcards
C’est quoi les nucléases?
Ce sont des enzymes qui dégradent les molécules d’ADN ou d’ARN. Ils créent un clivage des liaisons phosphodiesters.
Quel est le substrat de l’ADN après la dégradation par les nucléases?
Désoxyribonucléase
Quel est le substrat de l’ARN après la dégradation par les nucléases?
Le ribonucléase!
Quels sont les 2 types de nucléases?
- Exonucléases
2. Endonucléases
Que font les exonucléases?
Ils libèrent par hydrolyse le nucléotide situé à l’extrémité 5’ ou 3’.
Que font les endonucléases?
Ils hydrolysent une liaison ester interne.
Les nucléases possèdent différents degrés de spécificité de séquence de bases. Quel est le plus spécifique?
C’est l’endonucléase de restriction.
C’est quoi une endonucléase de restriction?
Ce sont des enzymes produites par les bactéries qui décomposent les molécules d’ADN étrangères en fragments (labo 4).
C’est quoi une solution tampon?
C’est une solution qui maintient environ le même pH malgré l’addition de petites quantités d’un acide, d’une base ou d’une dilution.
C’est quoi l’EDTA? Décrire ce que les lettre veulent dire.
Acide Éthylène Diamine Tétraacétique.
Quel est le rôle de l’EDTA?
En séquestrant les ions Mg2+ et Ca2+, il bloque l’activité des nucléases qui sont dépendantes de ces ions.
Que permet la solution tampon TBE (Tris-Borate-EDTA)?
Il contient des ions R-NH3+ et H2BO3- et ça permet la circulation du courant à travers le gel.
Pourquoi est ce que l’électrophorèse ne fonctionne pas avec de l’eau?
Car il ne contient pas assez d’ions conducteurs.
Est ce que l’on peut dissoudre l’ADN dans l’eau?
Oui!!! Mais si l’eau n’est pas trop acide (la solubilisation est difficile si acide) et si l’eau ne contient pas de nucléases.
Que contient le tampon de chargement?
Il contient :
- Xylène cyanol FF (migre comme ADN de 4000 pb)
et/ou
- Bleu de bromophénol (migre comme ADN de 300 pb)
- Glycérol (pour alourdir l’ADN).
