Kromatografi

Question 1

Hva er kromatografi?

Answer 1

det er en metode for å separere stoffer

Question 2

hva er kromatografi basert på?

Answer 2

er basert på det prinsipp at de stoffene som skal separeres fordeler seg
mellom to faser, hvor den ene fasen er mobil (MF) og den andre fasen er stasjonær (SF)

Question 3

hva er den mobile (MF) og hva er den stasjonære fasen? (SF)

Answer 3

Stasjonær fase (SF) – står stille.
Eks. et porøst materiale/væske, enten som en film på ei plate eller pakket i /belegg på innsiden av en kolonne
– Mobil fase (MF) – beveger seg.
Væske eller gass som transporterer (eluerer) prøvekomponentene gjennom/over den stasjonære fasen

Question 4

gi eksempler på noen seperasjonsteknikker

Answer 4

• Sentrifugering
• Destillasjon
• Ekstraksjon
• Filtrering
• Elektroforese
• Kromatografi

Question 5

hvorfor er det viktig at SF er porøst?

Answer 5

viktig siden MF må kunne komme seg gjennom SF, uten dette vil ikke det skje noen separasjon.

Question 6

Hvordan separeres komponenter i kromatografi?

Answer 6

eks en serum prøve blir tilsatt i SF. MF vil bli helt inn i SF i en kontinuerlig fart, etter en hvis tid vil komponentene i prøven du har tilsatt SF starte å skilles avhenge av visse faktorer. i bunnen av SF er det en “port” som komponentene elueres gjennom. her kan de bli samlet opp eller så kan de bli detektert av an detektor. detektorer måler så retensjonstid (tR), altså hvor lang tid det tok for dem å komme seg gjennom SF

Question 7

hva er hastigheten til en komponent i kromatografi avhenge av?

Answer 7

Hastigheten til en komponent er avhengig av affiniteten til SF og løseligheten i MF

Question 8

hvilke tre ting kan skje med komponentene i en løsning når MF beveger seg over SF og hva kan man bruke/gjøre for å forhindre dette?

Answer 8

– Oppholde seg kun i SF – ingen forflytning (eluering)
– Oppholde seg kun i MF – forflytning med MF
– Fordele seg mellom MF og SF – ulik forflytning, separasjon

Økt trykk vil føre til at komponentene vil bli presset gjennom SF om de sitter fast der.
Temperaturen til MF kan øke flyktigheten eller øke løseligheten til komponentene, slik at de kan komme seg gjennom SF.
Sammensetningen av SF, eks har man en polar SF så vil polare stoffer feste seg til den, ikke polar så vil de gå rett gjennom
Renheten til prøven er også viktig
Kolonnen vi bruker er også viktig, lengde og diameter til kolonnen kan påvirke resultatene.

Question 9

hvilke faktorer kan man se på når en skal vurdere en kromatogram?

Answer 9

• Kurvefasong
• Retensjonstid, tR
• Forskjell i retensjonstid
• Båndbredde, tW
• Retensjonsfaktor, K
• Oppløsningsevne, Rs
• Båndspredning
• Effektivitet
• Asymmetri

Question 10

se på lenken og forklar hva t0, tW og tR er og hvorfor disse er viktige

https://www.ntnu.no/wiki/download/attachments/121670510/Ska%CC%88rmavbild%202018-08-22%20kl.%2022.26.34.png?version=1&modificationDate=1534969610000&api=v2

Answer 10

• t0 – tiden et ikke-retardert stoff bruker
gjennom kolonnen, eks løsningsmiddelet
• Båndbredde ved grunnlinjen, tW
– Liten tW betyr god separasjon, hvis Tw er stor kan det bety at det er to eller flere komponenter smeltet sammen til en topp
• Retensjonstid, tR
– Vandringshastighet – Identifikasjon, viktig at det er konstante betingelser (trykk, temperatur, PH osv) eller så kan man få feil i prøvesvarene
• Forskjell i retensjonstid, tR
– Viktig for god separasjon

Question 11

hva er vandringshastigheten avhenge av?

Answer 11

Fremdrift og separasjon avhenger av:
– Mobilfasen og stasjonærfasens kjemiske og fysiske
egenskaper
– Intermolekylære krefter mellom prøvekomponent, MF
og SF
– Temperatur
– Tryk

Question 12

hva er retensjonsfaktoren?

Answer 12

Prøvekomponenten fordeles mellom SF og MF, i forhold til
retensjonsfaktoren (fordelingskoeffisienten), K
K = Cs / Cm
Jo større K, dess større affinitet til SF

Question 13

hvilken av grafene i linken har best oppløsningsevne?

https://www.ntnu.no/wiki/download/attachments/121670318/image2018-8-17%2012%3A29%3A22.png?version=1&modificationDate=1534501763000&api=v2

Answer 13

den lengst til høyre er best siden det ikke er noen overlapping der

Question 14

hva er båndspredning?

Answer 14

• Hvert molekyl vil til en viss grad spre seg ulikt i kolonnen, noe som skyldes
fysiske/mekaniske forhold

• Jo lengre prøvekomponentene vandrer
gjennom et system, jo større blir båndspredningen

Question 15

hva er det båndspredning kan bli forårsaket av?

Answer 15

• Eddy-diffusjon
• Massetransport i MF
• Massetransport i stillestående MF
• Massetransport i SF
• Longitudinal diffusjon

Question 16

når får man eddy diffusjon?

Answer 16

Eddy diffuson oppstår når komponentene velger ulike veier slik at det tar lang tid for dem å komme gjennom

Question 17

hva viser figuren i lenken

https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQEedHhrox0cEybhusM0DRA8ZGv_O7FYS-_yg&usqp=CAU

Answer 17

i a ser vi den ideelle gausinske ekvalibriumen til løsningen i SF og MF. I b og c finner vi hva som skjer med løsningen etter en hvis tid. de røde pilene viser løsningens bevegelse fra SF til MF og motsatt. D er hva vi får når ekvalibrium blir reinstallert, forskjellen nå er at den har større bredde,

Question 18

hva er kolonneeffektivitet?

Answer 18

Kolonneeffektivitet er hvor godt kolonnen greier å separere to stoffer som er nesten like

Question 19

hva er plateantallet N?

Answer 19

Platetallet N er et mål på kolonnens effektivitet. Dvs egenskapen kolonnen har til å gi smale bånd for stoffene som skal separeres

Question 20

hva er platehøyde?

Answer 20

Platehøyde, H: defineres som den delen av
kolonnen som utgjør en teoretisk plate
(høyden på platen)

Question 21

hvordan burde platehøyden og plateantallet være for at vi skal få den beste seperasjonen

Answer 21

For å gi best mulig separasjon bør platehøyden(H)
være minst mulig og platetallet (N) bør være størst
mulig.

Question 22

Hva er forskjellen på en hale og fronting i kromatografen?

Answer 22

I halen så er det noen molekyler som henger igjen i kolonna mest vanlig pga hydrogenbindinger med SF
I frontingen vil det være noen molekyler som kommer ut raskere enn andre

Question 23

hva vil det mest sannsynlig si om du får en As på mindre enn 0.8 eller høyere enn 1.2?

Answer 23

Mindre en 0.8 vil si for mye prøve og du har fått fronting, mer enn 1.2 vil si at du har en hale