Fragen Bucher: Teil 4 Flashcards
Metallbeschattungs-TEM:
- Schwermetalle aufdampfen
- Mit Kohlenstoff verstärken
- Objekt auflösen
REM:
- Bestrahlung mit Elektronen
- Anzahl der Reflektionen, Winkel usw. geben Bild für eine Ebene
- Schnittebenen werden übereinandergelegt, 3D-Bild wird am Computer zusammengesetzt.
Prinzip der Rekonstruktion von 3D Strukturen aus 2D Abbildungen.
Einzelbilder von Schnittebenen erstellen und am Computer exakt übereinanderlegen. Dieser berechnet die fehlenden Zwischenschnitte und erstellt ein 3D-Modell.
GFP und Reporter: Wie muss ein transgenes Konstrukt aussehen, um bestimmte Zellen
und/oder Zell‐Kompartimente zu markieren?
GFP kann als Fusionsprotein (Gene trap) agieren oder in Signalwege eingebaut werden (Enhancer trap).
Wie kann man bestimmte zelluläre Strukturen
(z.B. Kern) mit GFP markieren, obwohl GFP an sich zytoplasmatisch lokalisiert ist?
Wird GFP mit einem nuklear localisation signal ausgestattet, so wird es in den Kern transportiert. Man kann auch Proteine der Kernmembran zu Fusionsproteinen mit GFP kombinieren.
Welche Technik verwendet man für höchste Auflösung fixierter Objekte?
Die Elektronen-Mikroskopie bietet die höchste Auflösung für fixierte Objekte.
Welche Techniken sind für in vivo imaging geeignet? Wie funktionieren sie?
Konfokale Fluoreszenz-Mikroskopie
Digital Scanned Laser Light Sheet Flourescent Microscopy (DLSM; SPIM) und Digitale Embryonen
STED-Mikroskopie (Stimulated Emission Depletion Mikroskopie)
Konfokale Fluoreszenz-Mikroskopie
- Nur Licht aus dem Fokus-Punkt gelangt in den Detektor
- Ebenen darüber und darunter werden weitgehend ausgeblendet
- entspricht einem optischen Schnitt
Für jeden Punkt “zählt” der Detektor die emittierten Photonen
–> Bild wird aus vielen nacheinander gemessenen Einzelpunkten rekonstruiert
Digital Scanned Laser Light Sheet Flourescent Microscopy (DLSM; SPIM) und Digitale Embryonen
- Beleuchtung einer Fläche
- Aufnahme des gesamten Objekts rechtwinklig dazu
- Objekt wird gedreht
Weniger phototoxisch, Rundum-Ansicht ermöglicht 3D-Rekonstruktion.
STED-Mikroskopie (Stimulated Emission Depletion Mikroskopie)
Lichtmikroskopie ist durch Wellenlänge des Lichts auf eine Auflösung von 200nm begrenzt. Mit STED kann eine Auflösung von bis zu 2,5 nm erreicht werden. Durch ein “Ausschalt Licht” kann die Größe des angeregten Gebiets viel feiner reguliert werden.
Welche Technik erlaubt die höchste Auflösung bei in vivo imaging?
STED-Mikroskopie (Bis zu 2,5 nm).
