Fragen Bucher: Teil 1

Question 1

Wie ist ein eukaryotisches Gen aufgebaut?

Answer 1

Enhancer, Promotor, Introns, Exons (Codierender Bereich)

UTR = Nicht translatierter Bereich, Transkription + Translation von 5zu 3

Question 2

Wie erfolgt transkriptionelle Regulation?

Answer 2

Steuerung von Gen-Aktivität durch Expression/Nicht-Expression proteincodierender Gene.
- Umstrukturierung des Chromatins
(Methylierung - Polymerase kann nicht mehr anbinden, Heterochromatin – Hochspiralisiert, Genarm / Euchromatin - Genreich)

Kontrolle der Transkriptionsinitiation:

• Bindung von Enhancern/Silencern an Enhancersequenzen
• Alternatives Spleißen
• Interaktion mit Hormonen (Rezeptor,…)

Question 3

Was ist ein Gen‐Locus und was sind Allele?

Answer 3

Gen-Locus = Lage des Gens auf dem Chromosom.

Allele= Unterschiedliche Varianten eines Gens.

Question 4

Was bedeutet „homo‐ und heterozygot“?

Answer 4

Homozygot: 2 gleiche Allele an einem Locus.

Heterozygot: 2 unterschiedliche Allele an einem Locus

Question 5

In welchen Schritten läuft ein Vorwärts‐genetischer Screen ab?

Answer 5

1. Zufallsmutagenese (3 Generationen, viele Kreuzungen parallel.)
2. Identifizierung interessanter Phänotypen
3. Identifizierung des mutierten Gens (2 Generationen und weitere Analysen.)

Question 6

Was ist der Unterschied zu Rückwärts‐Genetik?

Answer 6

1. Auswahl des Gens
2. Ausschalten der Genfunktion
3. Untersuchung des Phänotyps

Question 7

Was ist der Nachteil der Rückwärtsgenetik?

Answer 7

Es wird viel Vorwissen benötigt und die Wahrscheinlichkeit neue Mutationen zu entdecken ist gering.

Question 8

Wie funktionieren die verschiedenen Methoden der Rückwärtsgenetik, um Genfunktion zu reduzieren bzw. auszuschalten?

Answer 8

1. Morpholino Antisense-Oligos
2. RNAi
3. miRNA Weg
4. piRNA Weg

Question 9

Wie funktionieren die verschiedenen Methoden der Rückwärtsgenetik, um Genfunktion zu reduzieren bzw. auszuschalten?

→ Detail: 1. Morpholino Antisense-Oligos

Answer 9

• Blockieren Translation oder Splicing indem sie sich an die komplementäre mRNA binden
• Wirken nur die ersten Tage
• Kein Effekt, wenn Protein schon vorhanden
• nicht Membrangängig

Question 10

Wie funktionieren die verschiedenen Methoden der Rückwärtsgenetik, um Genfunktion zu reduzieren bzw. auszuschalten?

→ Detail: 2. RNAi

Answer 10

• Doppelstrang RNA führt zur Zerstörung von mRNAs
• dsRNA gelangt in Zelle
• RISC complex - guide RNA (Einzelstrang)
• findet komplementäre Sequenzen, wird von Argonaute zerschnitten

Question 11

Wie funktionieren die verschiedenen Methoden der Rückwärtsgenetik, um Genfunktion zu reduzieren bzw. auszuschalten?

→ Detail: 3. miRNA Weg

Answer 11

• Hairpin RNA wird transkribiert und exportiert
• ””
• ””
• RISC erkennt komplementäre Sequenzen mit mismatch und inhibiert Translation
• mRNA wird nicht zerstört sondern reversibel blockiert
• post-transkriptionelle Genregulation

Question 12

Wie funktionieren die verschiedenen Methoden der Rückwärtsgenetik, um Genfunktion zu reduzieren bzw. auszuschalten?

→ Detail: 4. piRNA Weg

Answer 12

• posttranskriptionelles Transposon-Silencing
• transkriptionelles Silencing im Genom und in der Keimbahn

Off Target Effekte können auftreten.