Fixation Flashcards
Formaldéhyde
pas coag, additif, tolérant
Versatile pour colorations
Pas excellent pour colo cytoplasmiques
Glutaraldéhyde
pas coag, additif, tendance intolérante
ME (chaine bcp plus de sites pour fixer PR-)
Instable O2
Ac. acétique
pas coag, tolérant Gonflement Améliore colo nucléaires Bon pour mucines gastriques Lyse GR et diminue hémosidérine (ne peut pas faire Pearl's)
Chlorure mercurique
coag, additif cross-link au niveau des -SH cystéines rend tissu plus réceptif aux colo toxique pénètre lentement rétrécit et durcit (si laissé trop longtemps) pigment mercure
Tetroxyde d’osmium
pas coag, additif rend lipides insolubles (fixe lipides) dégage vapeurs ME post-fixation avec aldéhydes ne pénètre pas loin alors coupes plus minces que d'habitude
Ac. picrique
coag, additif
précipite nucléoPR- (rend insolubles)
ajout groupe picrate (mordant)
pigment jaune (bon pour voir petits morceaux)
versatile (crée ponts, fixe, différencie)
pas bon pour ADN et ARN (hydrolyse)
rétrécit
lyse GR et diminue hémosidérine (pas de Pearl’s)
décalcifie un peu
bonne colo avec colo acide et trichromique
Bichromate de potassium
pas coag ou coag dépendamment du pH, additif, tolérant chrome s'additionne conserve bien les PL pigment chrome destruction de la membrane des muqueuses présent dans Helly et Zenker
Éthanol
intolérant, coag, pas additif
ne laisse pas de trace
augmente vitesse de pénétration
durcissement et distortion
dissout lipides
incompatible avec fixateurs base de chrome et tetroxyde d’osmium
pour immunofluo et immunohisto (préserve Ag)
dans liquide de Carnoy et Dubosque-Brazil
Méthanol
intolérant, coag, pas additif dénature et précipite PR- préserve bien ARN (son utilité principale) toxique durcit tissu dissout lipides utilisé en hémato pour fixer frottis
sulfate de zinc
coag, additif
insolubilise PL et mucopolysaccharides acide (intestin)
peut remplacer mercure dans certains mélanges
bons détails de la membrane nucléaire et cytoplasmique
bon pour immunoZ et colo trichromique
sels de phosphate si zinc en contact avec phosphate
dans le formol-zinc
B5
HgCl2, formol 40% (ajoute avant utilisation), acétate de sodium (équilivre pression osmotique entre fixateur et tissu)
pour organes hématopoiétiques
rapide
bon pour colo nucléaire et immunoZ et immunohisto
intolérant si >24h
ruban difficile
pigment mercure
Bouin
Formol 40%, ac. acétique glacial, ac. picrique
pour colo trichromiques, tissus délicats (belles colo noyaux)
peu de distortion (sauf rein)
bon pour glycogène (meilleure que les autres)
belles colo (ac. acétique –> noyau, ac. picrique –>reste)
bon pour petits fragments
lyse GR et diminue hémosidérine (Fe disp. dans mitochondries)
pas bon pour ME ou rein
doit mettre dans alcool 70-80% pour garder >24h
Gendre
ac. picrique alcoolique (alcool 95% saturé), formol 40% et ac. acétique glacial
pour glycogène –> immobilise (à cause de l’alcool) les HC insolubles
couleur jaune
lyse GR et diminue hémosidérine
Hollande
acétate de cuivre, formol 40%, ac. acétique glacial, ac.picrique
pour biopsies GI tract (mieux que Bouin)
acétate de cuivre stabilise membrane GR, granulations éosinos et la membrane des cellules endocrines
décal. un peu
couleur jaune
doit retirer fixateur par lavage avant de mettre dans formol tamponné (sinon précipités (sels) dans solution qui peut aller sur les tissus)
Zenker
orange
bichromate de K, HgCl2, H2O (dans tous mélanges), ac. acétique
excellent pour: foie, rate, tissu de soutien, noyaux
bon pour: colo trichromiques
solutions mère et travail sont stables
GR lysés, diminution hémosidérine
intolérant si >24h
2 pigments peuvent être formés: chrome et mercure
pas bon pour imprégnation Ag
Helly AKA Zenker-Formol
orange
pas d’ac. acétique (formol 40% au lieu)
Donne la meilleure colo pour: glande hypophyse, organes lymphoides, MO, autres organes hématopoiétiques, rate, pancréas
Bon pour colo trichromiques
intolérant si >24h (tissus cassent)
pas bon pour glycogène et imprégnation Ag
solution travail instable
Formol-Zinc
excellent pour conservation tissus immunohistochimie (préserve Ag)
pas de cross-link (macromolécules ont la même configuration qu’au départ) –> cross-link est le désavantage de formol
contient sulfate ou chlorure de Zn et formol 40% avec ou sans tampon
bon pour tous les tissus
zinc peut remplacer mercure
pas soluble dans alcool 70% (premier bain de circulation): cause des précipitations dans le circulateur et dans le tissu (problèmes au microtome), peut éviter avec formol tamponné
pas très utilisé
Artéfacts de fixation
Rétrécissement ou gonflement du tissu: souvent quand fixateur intolérant pendant période trop longue
Desquamation: perte de cellules en périphérie
Cytolyse et autolyse: nécrose du tissu si commence pas fixation assez vite
ex: pancréas
Polarisation du glycogène ou effet de fuite: quand il y a acidification d’un liquide fixateur alcoolique
Fixation par couche
Perte de structures ou de détail: quand fixation trop courte ou congélation trop lonte (cristaux qui coupent)
Pigment formol
AKA pigment d’hématéine acide
couleur: brun-noir
cause: ac. formique (formé dans formol non tamponné) + Hb
Localisation: organes hémato
ID: biréfringent
retrait: laver la lame (avant colo) dans solution alcoolique saturée d’acide picrique
Prévention: formol tamponné
Pigment mercure
couleur: brun-noir
cause: tous fixateurs avec mercure
localisation: partout sur lame
ID: non biréfringent
retrait: iode alcoolique + thiosulfate de sodium (enlève iode)
prévention: éviter fixateurs avec mercure
Pigment chrome
couleur: rouille, orange, brun, noir
cause: chrome + alcool –> oxyde insoluble
localisation: partout
retrait: laver eau courante pendant pleine nuit
prévention: laver avant circulation ou bain d’alcool-acide au moment de colo
Pigment ac. picrique
couleur: jaune
cause: fixation avec Bouin
localisation: partout
ID: par couleur
retrait: blanchir avec thiosulfate Na 2.5% ou carbonate de lithium 1%
prévention: inévitable
Pigment carbone
couleur: brun-noir
cause: dans poumons des citadins
localisation: partout sur poumons
ID: non réfringent
retrait: aucun
prévention: aucun
