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Histotechnologie > Colorations spéciales: 2nd part > Flashcards

Colorations spéciales: 2nd part Flashcards

1
Q

Coloration des microorganismes

A

Voir p.199 pour liste de quelle colo pour quelle bacterie (pense pas que SP ira trop en detail sur l’examen)

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2
Q

Colo Gram: utilité

A

Démonstration des bactéries dans les tissus
C+: Staph, Strep
B+: Bacillus, Clostridium, Mycobactérium, Lactobacille, Listeria
C-: Neisseria
B-: E. coli, Kleb, Salmonelle, Shigelle, Proteus, Pseudo
CB-: Brucella, Haemophilus

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3
Q

Colo Gram: réactifs utilisés

A

Cristal violet: colo toutes les bactéries sans distinction
Iodine: précipitation du crystal violet
Acétone: différentiation
- pour G+: déshydratation de paroi et membrane bactérienne –> resserrement des pores membranaires –> retient complexe violet crystal - iode
- pour G-: dissolution des lipides –> enleve violet crystal
Fuchsine basique:
- colo des bactéries gram neg
- iode- violet crystal masque fuchsine basique so G+ restent bleu-violet
Acide picrique - acétone: contrecolo et enlève surplus de colo

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4
Q

Colo Gram: mécanisme en cause

A

Méthode régressive
Gram pos paroi plus épaisse de peptidoglycanes
Gram neg paroi + de lipopolysaccharides –> sera dissoute pendant différentiation –> crystal violet s’enlève –> accèpte fuchsine basique

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5
Q

Pourquoi ne peut pas utiliser alcool pour déshydrater tissu apres colo?

A

Décoloration des bactéries

Doit faire blot-dry au lieu

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6
Q

Ziehl Neelsen (ZN): utilité

A

Démonstration des bactéries acido-alcoolo-résistantes dans les tissus

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7
Q

ZN: réactifs utilisés

A
  1. Fuchsine carbolique (ou phénolée) à froid: colo bactéries acido-alcoolo résistantes (principe p. 226 de notre livre)
  2. Alcool-acide: différentitation –> retrait du colo de toutes les bactéries qui ne possèdent pas de paroi cireuse
  3. Bleu de méthylène ou Hématox de Harris (+ bleuissement): contrecolo
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8
Q

ZN: mécanisme en cause

A

Has to do with: liens sel, densité et porosité des membranes
Bactéries acido-alcoolo résistantes (AAR): colo difficile cuz paroi possède substance cireuse, mais une fois colo se decolo pas (même en présence d’acide et d’alcool)

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9
Q

ZN: résultats

A

Bactéries AAR: rouge
GR: orange
Noyaux: bleu
Fond: bleu

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10
Q

ZN: notes

A

Si coupes chauffées –> pas mettre dans coplin cuz bactéries peuvent sortir du tissu –> faux pos et neg –> doit faire colo directement sur lame
Fixateur Carnoy peut détruire propriété AAR
Tissus décalcifiés peuvent donner faux neg –> acides utilisés peuvent détruire propriété AAR
Doit faire lame CQ
Bain d’étalement propre et utilise eau filtrée pour toutes étapes avec eau (filtre qui retient les bactéries)

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11
Q

Warthin-Starry (WS)

A

Démonstration des spirochètes dans les tissus

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12
Q

WS: réactifs

A
  1. Solution nitrate d’Ag: imprégnation, formation complexe organo-métalliques
  2. Solution nitrate d’Ag - hydroquinone gélatinisée: développeur, contient acide citrique qui favorise oxydation des groupes glycols en group aldéhyde qui peuvent réagir avec Ag
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13
Q

2 roles de hydroquinone

A
  1. Agent réducteur: permetAg de se déposer sur les complexes organo-métalliques
  2. Agent de développement: augmente la vitesse de transformation de Ag ionique en Ag métallique et empêche la reconversion
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14
Q

WS: mécanisme en cause

A

Imprégnation argyrophile

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15
Q

WS: résultats

A

Spirochètes: noir
Autres bactéries: noir
Fond: jaune pâle- brun pâle due à hydroquinone

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16
Q

WS: notes

A

Spirochètes jaunâtres: développement insuffisant
Iode + thiosulfate de sodium pour retirer colo si surdéveloppé
Mélanine, noyaux et certains pigments –> grande affinité pour Ag
Autres méthode similaires:
1. Dieterle –> spirochètes et legionella
2. Steiner & Steiner –> spirochètes, légionella, hélicobacter

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17
Q

Grocott: utilité

A

Démonstration des champignons et mycoses dans les tissus

Souvent utilisée

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18
Q

Lames CQ

A

Habituellement intestin ou estomac cuz colo mucines aussi

Veut donc les comparer pour faire sur que vrm bactéries et non colo de mucines sur lames inconnues

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19
Q

Grocott: réactifs utilisés

A

Sensiblement les mêmes que pour Acide-périodique- méthénamine Ag (membranes basales)

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20
Q

Grocott: mécanisme d’action

A

Méthode basée sur teneur très élevée en glucide de la paroi des champignons
Oxydation des glucides par acide chromique (plus for que ac. périodique) –> production aldéhydes et bcp de suroxydation en carboxyles puisque laisse l’ac. chromique pour 1h
Reste seulement assez d’aldéhyde pour détecter dans les structures très riches en glucides
Aldéhydes détectées par méthénamine Ag

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21
Q

Grocott: résultats

A

Contour champignons et levures: noir
Partie interne de champignons et levures: gris
Fond: vert (avec vert lumière pour contrecolo)
Autres éléments (mucines, glycogène, mélanine): noir

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22
Q

APS pour microorganismes

A

Méthode pour démontrer microorganismes avec réactif de Schiff similaire à celle pour démontrer glycogène et mucines neutres
Polysaccharides et hydrates de carbone dans la paroi des mycoses et champignons oxydés en aldéhydes par réactif de Schiff, etc.

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23
Q

APS microorganismes: résultats

A

Mycoses, champignons: rose, magenta

Fond: vert (avec vert lumière)

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24
Q

APS microorganismes: notes

A

Peut être utilise d’utiliser diastase si lame contient aussi du glycogène –> veut le sortir de la way

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25
Q

Giemsa (May-Grunwald Giemsa): utilité

A

Démontre bactéries, rickettsies et Toxoplasma gondii

Aussi utilise pour différentiation de cellules présentes dans tissu hématopoiétique

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26
Q

Giemsa: réactifs

A
  1. Solution travail de Jenner
  2. Solution travail de Giemsa
  3. ac. acétique 1%: différentiation
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27
Q

Giemsa: résultats

A

Bactéries: bleu
Noyau: bleu
Cytoplasme des GB: rose, gris, bleu –> dépend du type de cellule et stade de développement

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28
Q

Pigment et minéraux: définition

A

Subs particulières colorées ou incolores qu’on colo artificiellement
Présents dans tissu état normal ou pathologique

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29
Q

Classification:

1. pigments artéfacts

A

Effet de la prep du tissu

a. formaldéhyde
b. mercure
c. chrome
d. Nedzel (paraffine)
e. Malaria –> pigment dans cellules phagocytaires

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30
Q

Classification:

2. pigments endogènes

A

Effet du métabolisme (conditions normales ou pathologiques)
A) Hématogènes (système hématopoiétique): porphine et porphyrines, Hb, hémosidérine et fer, pigments biliaires
B) non hématogènes (autres pigments endogènes): mélanine et pseudomélanine, lipopigments, fer, calicum, cuivre, ac. urique et urates

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31
Q

Classification:

3. pigments exogènes

A

Viennent de l’extérieur de l’organisme et entrent par inhalation ou implantation sous la peau

a. carbone, silice, amiante
b. encre de tatouage
c. cuivre

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32
Q

Bleu de Prusse

A

AKA Pearl’s

Mise en évidence du fer ferrique (Fe3+) dans les tissus

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33
Q

Hémosidérine

A

Pigment protidique qui renferme du fer à l’état ionique qu’on peut détercter avec méthodes histochimiques de mise en évidence du fer
Différence avec Hb: fer dans Hb ne peut être mis en évidence cuz fortement lié à partie protéique de la molécule
Métabolisme de l’hémosidérine étroitement lié à celui du fer

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34
Q

Hémosidérine et fer: trajet dans l’organisme

A
  1. Fer abs dans intestin –> lie PR- de transport (transferrine ou sidérophiline) –> fer transporté aux sites d’utilisation ou entreposage –> usually moelle osseuse
  2. Si organisme déja assez de fer: fer lie PR- soluble nomée apoferritine –> fer + apoferritine = ferritine –> capacité d’entreposage limitée
  3. Si toute apoferrtine est prise –> fer lie molécule insoluble nommée aposidérine (ex: dans le cas d’injection de fer IV, transfusions massives, problèmes d’abs de fer)
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35
Q

Hémochromatose

A

Quand problème avec mécanisme de controle d’abs de fer

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36
Q

Hémosidérose

A

État pathologique: hémosidérine apparait dans l’organisme quand la capacité d’entreposage est dépassée

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37
Q

Organes visées par surcharge de fer

A

Rate (surtout)
Ganglion lymphatiques
Foie

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38
Q

Ou peut-on aussi retrouver de l’hémosidérine en quantité normale?

A

Moelle osseuse: cuz présence de grande quantité de fer

Rate: cuz de la destruction et élimination de GR

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39
Q

Cas de manque d’hémosidérine dans moelle osseuse

A

Quand carence en fer: hémorragie, anémie, carences alimentaires

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40
Q

Autres sites ou on peut retrouver de l’hémosidérine (cas anormaux)

A

Peut en retrouver quand il y a destruction localisée de GR: sites hémorragiques, infarctuels et traumatiques

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41
Q

Caractéristiques de hémosidérine

A

Granules bruns, non biréfringents, forme irrégulière en amas

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42
Q

Réactifs utilisés

A
  1. solution de ferrOcyannure de potassium + HCl:
    - HCl libère fer de l’hémosidérine
    - réagit avec ions ferriques libres
    - solution incolore
  2. Kernechtrot ou éosine: contrecolo
43
Q

Mécanisme

A

Rxn histochimique

Ions ferrique + ferrocyanure de K –> ferrocyanure ferrique (pigment bleu insoluble)

44
Q

Résultats

A

Noyau, cytoplasme, GR: rose
Collagène, muscle: rose
Fer ferrique, hémosidérine: bleu
Contrecolo peut varier

45
Q

Notes

A
  1. Fixateurs acides ou ceux qui contiennent chrome peuvent nuire à la préservation du fer –> use formaldéhyde 10% tamponné
  2. Évite utilisation matériel métallique
  3. verrerie et réactifs sans fer ou acide
  4. solution travail prep right avant de user
  5. doit faire coupe CQ avec bcp de fer
  6. Trop de colo avec Kernechtrot peut masquer fins dépots de fer ferriques
  7. Dépots de fer ferriques fraichements formés peuvent se dissoudre dans ac. acétique 5% –> pour ca qu’on utilise HCl
46
Q

Rxn Bleu de Turnbull (BT)

A

Mise en évidence de fer ferreux (Fe2+) dans les tissus
Fe2+ pas entreposé de façon normale car toxique
Rapidement abs par intestin et rapidement converti en fer ferrique
Augmente dans le sang dans certaines conditions pathologiques

47
Q

BT: réactifs utilisés

A
  1. solution de ferricyanure de potassium + HCl: réagit avec ions ferreux dans le tissu, HCl libère fer du tissu
  2. Kernechtrot: contrecolo
48
Q

BT: mécanisme

A

Ions ferreux + ferricyanure de K –> ferricyanure ferreux (pigment bleu insoluble, pas le même que Pearl’s)

49
Q

BT: résultats

A

Noyau, cytoplasme, GR: rose
Collagène, muscle: rose
Fer ferreux: bleu

50
Q

BT: notes

A

Mêmes que pour Pearl’s

51
Q

Masson-Fontana (MF): utilité

A

Démonstration des subs argentaffines (affinité naturelle) comme la mélanine (bcp dans cellules phagocytaire et peau) et les granules argentaffines des tumeurs carcinoides.

52
Q

Où retrouve-t-on de la mélanine normalement?

A

peau, oeil, cerveau (surtout subs grise), follicules pileux, poils, cheveux, grains de beauté (est une tumeur bénigne)
Produite par mélanocytes

53
Q

Couleur sur coupes non colorées ou colo de routine

A

Pigments brun-noir

54
Q

Mélanine dans la peau

A

Dans les couches profondes de épiderme (couche germinative)
Pathologie: mélanine dans partie supérieure du derme dans cellules phagocytaires appelées mélanophages
Pathologie: grain de beauté peut aussi être une tumeur maligne –> mélanome malin de la peau

55
Q

Pourquoi mise en évidence de la mélanine importante?

A

Diagnostic de mélanome malin de la peau et de ses métastases

56
Q

Dans Parkinson

A

Quantité de mélanine dans la subs grise du cerveau inférieure à la normale

57
Q

Aspect des grains de mélanine

A

Grosseur variable, différents aspects
En petite quantité: teinte brun pâle-noir
Amas de taille importante: souvent entièrement noirs sans colo

58
Q

MF: principe

A

Basée sur caractère réducteur de la mélanine (peut réduire solution d’Ag sans help)
Mélanine et granulations argentaffines (ex: dans cellules endocrines) ont composés phénoliques dérivés de tyrosine qui peuvent réduire Ag ionique en Ag métallique amorphe

59
Q

Pourquoi cette méthode n’est pas spécifique?

A

Lipofuchsines et pseudomélanines peuvent aussi réagir avec Ag ammoniacal

60
Q

Comment controller pour le manque de spécificité?

A

pH neutre ou un peu acide

61
Q

Pseudomélanines

A

Pigment jaune-brun
Pas apparenté chimiquement à mélanine, mais plutot aux lipofuchsine
Parfois dans chorion du gros intestin ou de l’appendice
Tout près de l’épithélium –> ds cytoplasme des macrophages
Peut aussi être près de la musculaire muqueuse
Pathologie: quantité élevée dans pseudomélanose du colon causée par Pseudomelanosis coli –> origine et signification inconnues

62
Q

Lipofuchsines

A

Font partie des lipopigments –> subs pigmentées dérivées de précurseurs lipidiques
Produits par auto-oxydation et polymérisation de lipides ou lipoPR-
Quantité augmente avec âge –> pourquoi sont nommés pigments d’usure
Jaune-brun, réfringents, fluorescence brune en UV
Semblent être apparentés aux lysosomes

63
Q

Où retrouve-t-on ces pigments?

A

cellules musculaires cardiaques, hépatocytes, cellules de la zone réticulée de la corticosurrénale et cellules nerveuses ganglionnaires

64
Q

Dans hémochromatose

A

Foie contient lipofuchsine associée à hémosidérine

65
Q

Propriétés des lipofuchsines

A

Pouvoir réducteur élevé –> rxn pos à la méthode de Schmorl
Forte basophilie
APS tjrs pos
Acido-alcoolo-résistance: faible ou nulle
Fluorescence brune

66
Q

Fixateurs pour FM

A

Formaldéhyde 10% tamponné
Fixateurs base de chromate et de chlorure mercurique
Bouin

67
Q

FM: réactifs

A

Besoin bcp moins de réactif que colo argent typiques (pas besoin de faire les aldéhydes, sensibilisation ou réduction avec formol)

  1. solution Ag Fontana (hydroxyde d’argent ammoniacal): imprégnation
  2. chlorure d’or 0.2%: virage (toner)
  3. thiosulfate de sodium 5%: réduction (fixage)
  4. éosine: contrecolo
68
Q

FM: résultats

A

Noyau: rose
Mélanine: noir
Granules argentaffines: noir

69
Q

FM: notes

A

Non spécifique pour mélanine et granulations argentaffines
ex: Pigments de formol (subs réductrice) peut être pos aussi
Solutions argent ammoniacal et alcaline peuvent être explosives si entreposées pendant plusieurs jours

70
Q

Schmorls: utilité

A

Mise en évidence des substances réductrices présentes dans le tissu (mélanine et granulations argentaffines)
Subs réductrices = capable de Fe3+ –> Fe2+ (capable de réduire argent aussi)
2 structures organiques qui possèdent cette propriété: mélanine et cellules endocrines

71
Q

Cellules endocrines

A

Associées à l’intestin et au système respiratoire
Dans tube digestif: épithélium de revetement contient cellules endocrines (AKA cellules entéro-endocrines) –> prédominent dans estomac et intestin grele, mais bcp d’autres endroits
Sont petites
Difficile ID avec H&E –> pourquoi on utilise techniques argentiques
*Méthodes immunohistochimiques démontrent qu’elles sont plus nombreuses qu’on pensait et on remplacées méthodes argentiques

72
Q

Schmorl: principe

A

Basée sur capacité du pigment de mélanine de réduire mélange de chlorure ferrique + ferricyanure de K avec production de ferricyanure ferreux (exactement comme Bleu Turnbull)
Mécanisme: rxn histochimique

73
Q

Schmorl: réactifs

A

Comme Bleu Turnbull

74
Q

Schmorl: résultats

A

Noyau: rose
Mélanine: bleu
Granules argentaffines: bleu

75
Q

Schmorl: notes

A

Temps rxn dépend du tissu

Mélanine réduit plus rapidement que lipofuchsine par exemple

76
Q

Méthénamine d’argent de Gomori (MAG)

A

Démonstration des urates dans les tissus
Augmentation:
1. Dérangement dans le métabolisme de ac. urique (goutte) provoque dépot cristaux d’urates surtout dans jointures
2. Destruction cellulaire anormalement élevée –> augmentation production urates supérieure à la capacité d’élimination des reins –> dépots d’urates dans les tubules rénaux

77
Q

MAG: réactifs

A
  1. méthénamine d’argent + borax 5%: imprégnation
  2. thiosulfate de sodium 2%: réduction (fixage)
  3. vert lumière: contrecolo
78
Q

MAG: mécanisme

A

Imprégnation métallique

Plus d’info dans cahier de lab

79
Q

MAG: résultats

A

Urates: noir
Fond: vert

80
Q

MAG: notes

A

Calcium peut aussi être démontré par cette méthode si dépots sont gros assez pour supporter imprégnation

81
Q

Fouchet

A

Démonstration de la bilirubine dans les tissus

82
Q

Pigments biliaires

A

Biliverdine
Bili libre
Bili conjuguée
Hématoidine

83
Q

Comment peut-on connaitre ID des pigments biliaires présents?

A

Détermine par organe d’où celui-ci provient
ex: Excès de pigment biliaire dans foie après obstruction canaux biliaires, déficience dans le métab. biliverdine-bilirubine ou après mort ou dégénérescnece des hépatocytes –> mélange de biliverdine, bili libre, bili conjuguée

84
Q

Pigments biliaires dans hépatocytes et canalicules biliaires

A

Peut penser à une stase biliaire causée par calculs ou obstruction attribuable à un cancer de la tête du pancréas
Bilirubine dans hépatocytes ressemble lipofuchsine

85
Q

Pigments biliaires dans vésicule biliare

A

Pas les mêmes caractéristiques que ceux dans le foie

86
Q

Fouchet: réactifs

A
  1. Réactif Fouchet (chlorure ferrique 10% + ac. trichloroacétique + eau): oxydation de la bilirubine en biliverdine
  2. Solution Van Gieson: contrecolo
87
Q

Fouchet: mécanisme

A

Oxydation de la bilirubine en biliverdine par réactif Fouchet
Biliverdine –> pigment vert

88
Q

Fouchet: résultats

A

Bile ou bilirubine: vert émeraude - vert olive

Fond: jaune

89
Q

Von Kossa: utilité

A

Démonstration de la présence de calcium

Accumulations anormales de calcium dans fibres élastiques en dégénérescence et dans lésions caséeuses de la tuberculose

90
Q

Von Kossa: principe

A

Coupe avec sels de calcium + solution avec cations (argent) –> argent prennent place du calcium et lient anion phosphate ou carbonate
Ensuite argent réduit à forme métallique –> révèle sites de calcification
Pas spécifique au calcium, mais plutot aux phosphates et carbonates tissulaires –> sont pas lié a much autre que calcium so peut en pratique dire spécifique au calcium
Rxn argyrophile cuz imprégnation métallique par argent + agent réducteur externe (lumière)

91
Q

Von Kossa: réactifs

A
  1. Nitrate d’argent 5%: imprégnation métallique, réducteur = soleil, vérifier lames périodiquement et arrêter rxn quand sels de calcium sont de couleur brun-noir
  2. thiosulfate de sodium: enlève argent non réduit
  3. rouge neutre 1% ou autre: contrecolo
92
Q

Von Kossa: résultats

A

Sels de calcium: noir

Fond: rouge

93
Q

Von Kossa: notes

A
  1. Solution iode parfois utilisée dans premières étapes (chepas when ya parler about une solution d’iode but wtv) –> enleve pigment mercure, mais peut aussi enlever un peu de calcium
  2. Use formol tamponné –> pigments de formol réduisent argent
  3. lumière artificielle donne pigments brunâtres (not good)
  4. alizarine rouge: autre méthode pour calcium plus spécifique
94
Q

Rhodamine: utilité

A

Démonstration du cuivre dans les tissus (surtout foie –> maladie de Wilson)

95
Q

Rhodamine: réactifs

A
  1. solution de Rhodamine: mise en évidence du cuivre 18h à 37 oC
  2. Hématoxyline de Mayer: contrecolo
96
Q

Rhodamine: mécanisme

A

Méthode démontre PR- sur laquelle le cuivre se fixe plutot que le cuivre lui-même

97
Q

Rhodamine: résultats

A

Cuivre: rouge vif à rouge-jaune
Noyau: bleu pâle

98
Q

Rhodamine: notes

A

Lame CQ –> foie foetal fixé < 24h: contient 3-4X plus de cuivre dans les hépatocytes
Pas trop contrecolo sinon masque cuivre

99
Q

Bleu de toluidine: utilité

A

Démonstration des mastocytes dans les tissus

100
Q

Bleu de toluidine: réactifs

A
  1. Solution de bleu de toluidine: colo tous les éléments du tissu
101
Q

Bleu de toluidine: mécanisme

A

Métachromasie

102
Q

Bleu de toluidine: résultats

A

Granulations des mastocytes: violet foncé

Fond: bleu

103
Q

Bleu de toluidine: notes

A

Habituellement éviter alcool pour déshydratation dans colo métachromatiques, mais ici métachromasie est stable et ne sera pas perdue

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