Colorations spéciales: 2nd part Flashcards
Coloration des microorganismes
Voir p.199 pour liste de quelle colo pour quelle bacterie (pense pas que SP ira trop en detail sur l’examen)
Colo Gram: utilité
Démonstration des bactéries dans les tissus
C+: Staph, Strep
B+: Bacillus, Clostridium, Mycobactérium, Lactobacille, Listeria
C-: Neisseria
B-: E. coli, Kleb, Salmonelle, Shigelle, Proteus, Pseudo
CB-: Brucella, Haemophilus
Colo Gram: réactifs utilisés
Cristal violet: colo toutes les bactéries sans distinction
Iodine: précipitation du crystal violet
Acétone: différentiation
- pour G+: déshydratation de paroi et membrane bactérienne –> resserrement des pores membranaires –> retient complexe violet crystal - iode
- pour G-: dissolution des lipides –> enleve violet crystal
Fuchsine basique:
- colo des bactéries gram neg
- iode- violet crystal masque fuchsine basique so G+ restent bleu-violet
Acide picrique - acétone: contrecolo et enlève surplus de colo
Colo Gram: mécanisme en cause
Méthode régressive
Gram pos paroi plus épaisse de peptidoglycanes
Gram neg paroi + de lipopolysaccharides –> sera dissoute pendant différentiation –> crystal violet s’enlève –> accèpte fuchsine basique
Pourquoi ne peut pas utiliser alcool pour déshydrater tissu apres colo?
Décoloration des bactéries
Doit faire blot-dry au lieu
Ziehl Neelsen (ZN): utilité
Démonstration des bactéries acido-alcoolo-résistantes dans les tissus
ZN: réactifs utilisés
- Fuchsine carbolique (ou phénolée) à froid: colo bactéries acido-alcoolo résistantes (principe p. 226 de notre livre)
- Alcool-acide: différentitation –> retrait du colo de toutes les bactéries qui ne possèdent pas de paroi cireuse
- Bleu de méthylène ou Hématox de Harris (+ bleuissement): contrecolo
ZN: mécanisme en cause
Has to do with: liens sel, densité et porosité des membranes
Bactéries acido-alcoolo résistantes (AAR): colo difficile cuz paroi possède substance cireuse, mais une fois colo se decolo pas (même en présence d’acide et d’alcool)
ZN: résultats
Bactéries AAR: rouge
GR: orange
Noyaux: bleu
Fond: bleu
ZN: notes
Si coupes chauffées –> pas mettre dans coplin cuz bactéries peuvent sortir du tissu –> faux pos et neg –> doit faire colo directement sur lame
Fixateur Carnoy peut détruire propriété AAR
Tissus décalcifiés peuvent donner faux neg –> acides utilisés peuvent détruire propriété AAR
Doit faire lame CQ
Bain d’étalement propre et utilise eau filtrée pour toutes étapes avec eau (filtre qui retient les bactéries)
Warthin-Starry (WS)
Démonstration des spirochètes dans les tissus
WS: réactifs
- Solution nitrate d’Ag: imprégnation, formation complexe organo-métalliques
- Solution nitrate d’Ag - hydroquinone gélatinisée: développeur, contient acide citrique qui favorise oxydation des groupes glycols en group aldéhyde qui peuvent réagir avec Ag
2 roles de hydroquinone
- Agent réducteur: permetAg de se déposer sur les complexes organo-métalliques
- Agent de développement: augmente la vitesse de transformation de Ag ionique en Ag métallique et empêche la reconversion
WS: mécanisme en cause
Imprégnation argyrophile
WS: résultats
Spirochètes: noir
Autres bactéries: noir
Fond: jaune pâle- brun pâle due à hydroquinone
WS: notes
Spirochètes jaunâtres: développement insuffisant
Iode + thiosulfate de sodium pour retirer colo si surdéveloppé
Mélanine, noyaux et certains pigments –> grande affinité pour Ag
Autres méthode similaires:
1. Dieterle –> spirochètes et legionella
2. Steiner & Steiner –> spirochètes, légionella, hélicobacter
Grocott: utilité
Démonstration des champignons et mycoses dans les tissus
Souvent utilisée
Lames CQ
Habituellement intestin ou estomac cuz colo mucines aussi
Veut donc les comparer pour faire sur que vrm bactéries et non colo de mucines sur lames inconnues
Grocott: réactifs utilisés
Sensiblement les mêmes que pour Acide-périodique- méthénamine Ag (membranes basales)
Grocott: mécanisme d’action
Méthode basée sur teneur très élevée en glucide de la paroi des champignons
Oxydation des glucides par acide chromique (plus for que ac. périodique) –> production aldéhydes et bcp de suroxydation en carboxyles puisque laisse l’ac. chromique pour 1h
Reste seulement assez d’aldéhyde pour détecter dans les structures très riches en glucides
Aldéhydes détectées par méthénamine Ag
Grocott: résultats
Contour champignons et levures: noir
Partie interne de champignons et levures: gris
Fond: vert (avec vert lumière pour contrecolo)
Autres éléments (mucines, glycogène, mélanine): noir
APS pour microorganismes
Méthode pour démontrer microorganismes avec réactif de Schiff similaire à celle pour démontrer glycogène et mucines neutres
Polysaccharides et hydrates de carbone dans la paroi des mycoses et champignons oxydés en aldéhydes par réactif de Schiff, etc.
APS microorganismes: résultats
Mycoses, champignons: rose, magenta
Fond: vert (avec vert lumière)
APS microorganismes: notes
Peut être utilise d’utiliser diastase si lame contient aussi du glycogène –> veut le sortir de la way
Giemsa (May-Grunwald Giemsa): utilité
Démontre bactéries, rickettsies et Toxoplasma gondii
Aussi utilise pour différentiation de cellules présentes dans tissu hématopoiétique
Giemsa: réactifs
- Solution travail de Jenner
- Solution travail de Giemsa
- ac. acétique 1%: différentiation
Giemsa: résultats
Bactéries: bleu
Noyau: bleu
Cytoplasme des GB: rose, gris, bleu –> dépend du type de cellule et stade de développement
Pigment et minéraux: définition
Subs particulières colorées ou incolores qu’on colo artificiellement
Présents dans tissu état normal ou pathologique
Classification:
1. pigments artéfacts
Effet de la prep du tissu
a. formaldéhyde
b. mercure
c. chrome
d. Nedzel (paraffine)
e. Malaria –> pigment dans cellules phagocytaires
Classification:
2. pigments endogènes
Effet du métabolisme (conditions normales ou pathologiques)
A) Hématogènes (système hématopoiétique): porphine et porphyrines, Hb, hémosidérine et fer, pigments biliaires
B) non hématogènes (autres pigments endogènes): mélanine et pseudomélanine, lipopigments, fer, calicum, cuivre, ac. urique et urates
Classification:
3. pigments exogènes
Viennent de l’extérieur de l’organisme et entrent par inhalation ou implantation sous la peau
a. carbone, silice, amiante
b. encre de tatouage
c. cuivre
Bleu de Prusse
AKA Pearl’s
Mise en évidence du fer ferrique (Fe3+) dans les tissus
Hémosidérine
Pigment protidique qui renferme du fer à l’état ionique qu’on peut détercter avec méthodes histochimiques de mise en évidence du fer
Différence avec Hb: fer dans Hb ne peut être mis en évidence cuz fortement lié à partie protéique de la molécule
Métabolisme de l’hémosidérine étroitement lié à celui du fer
Hémosidérine et fer: trajet dans l’organisme
- Fer abs dans intestin –> lie PR- de transport (transferrine ou sidérophiline) –> fer transporté aux sites d’utilisation ou entreposage –> usually moelle osseuse
- Si organisme déja assez de fer: fer lie PR- soluble nomée apoferritine –> fer + apoferritine = ferritine –> capacité d’entreposage limitée
- Si toute apoferrtine est prise –> fer lie molécule insoluble nommée aposidérine (ex: dans le cas d’injection de fer IV, transfusions massives, problèmes d’abs de fer)
Hémochromatose
Quand problème avec mécanisme de controle d’abs de fer
Hémosidérose
État pathologique: hémosidérine apparait dans l’organisme quand la capacité d’entreposage est dépassée
Organes visées par surcharge de fer
Rate (surtout)
Ganglion lymphatiques
Foie
Ou peut-on aussi retrouver de l’hémosidérine en quantité normale?
Moelle osseuse: cuz présence de grande quantité de fer
Rate: cuz de la destruction et élimination de GR
Cas de manque d’hémosidérine dans moelle osseuse
Quand carence en fer: hémorragie, anémie, carences alimentaires
Autres sites ou on peut retrouver de l’hémosidérine (cas anormaux)
Peut en retrouver quand il y a destruction localisée de GR: sites hémorragiques, infarctuels et traumatiques
Caractéristiques de hémosidérine
Granules bruns, non biréfringents, forme irrégulière en amas
Réactifs utilisés
- solution de ferrOcyannure de potassium + HCl:
- HCl libère fer de l’hémosidérine
- réagit avec ions ferriques libres
- solution incolore - Kernechtrot ou éosine: contrecolo
Mécanisme
Rxn histochimique
Ions ferrique + ferrocyanure de K –> ferrocyanure ferrique (pigment bleu insoluble)
Résultats
Noyau, cytoplasme, GR: rose
Collagène, muscle: rose
Fer ferrique, hémosidérine: bleu
Contrecolo peut varier
Notes
- Fixateurs acides ou ceux qui contiennent chrome peuvent nuire à la préservation du fer –> use formaldéhyde 10% tamponné
- Évite utilisation matériel métallique
- verrerie et réactifs sans fer ou acide
- solution travail prep right avant de user
- doit faire coupe CQ avec bcp de fer
- Trop de colo avec Kernechtrot peut masquer fins dépots de fer ferriques
- Dépots de fer ferriques fraichements formés peuvent se dissoudre dans ac. acétique 5% –> pour ca qu’on utilise HCl
Rxn Bleu de Turnbull (BT)
Mise en évidence de fer ferreux (Fe2+) dans les tissus
Fe2+ pas entreposé de façon normale car toxique
Rapidement abs par intestin et rapidement converti en fer ferrique
Augmente dans le sang dans certaines conditions pathologiques
BT: réactifs utilisés
- solution de ferricyanure de potassium + HCl: réagit avec ions ferreux dans le tissu, HCl libère fer du tissu
- Kernechtrot: contrecolo
BT: mécanisme
Ions ferreux + ferricyanure de K –> ferricyanure ferreux (pigment bleu insoluble, pas le même que Pearl’s)
BT: résultats
Noyau, cytoplasme, GR: rose
Collagène, muscle: rose
Fer ferreux: bleu
BT: notes
Mêmes que pour Pearl’s
Masson-Fontana (MF): utilité
Démonstration des subs argentaffines (affinité naturelle) comme la mélanine (bcp dans cellules phagocytaire et peau) et les granules argentaffines des tumeurs carcinoides.
Où retrouve-t-on de la mélanine normalement?
peau, oeil, cerveau (surtout subs grise), follicules pileux, poils, cheveux, grains de beauté (est une tumeur bénigne)
Produite par mélanocytes
Couleur sur coupes non colorées ou colo de routine
Pigments brun-noir
Mélanine dans la peau
Dans les couches profondes de épiderme (couche germinative)
Pathologie: mélanine dans partie supérieure du derme dans cellules phagocytaires appelées mélanophages
Pathologie: grain de beauté peut aussi être une tumeur maligne –> mélanome malin de la peau
Pourquoi mise en évidence de la mélanine importante?
Diagnostic de mélanome malin de la peau et de ses métastases
Dans Parkinson
Quantité de mélanine dans la subs grise du cerveau inférieure à la normale
Aspect des grains de mélanine
Grosseur variable, différents aspects
En petite quantité: teinte brun pâle-noir
Amas de taille importante: souvent entièrement noirs sans colo
MF: principe
Basée sur caractère réducteur de la mélanine (peut réduire solution d’Ag sans help)
Mélanine et granulations argentaffines (ex: dans cellules endocrines) ont composés phénoliques dérivés de tyrosine qui peuvent réduire Ag ionique en Ag métallique amorphe
Pourquoi cette méthode n’est pas spécifique?
Lipofuchsines et pseudomélanines peuvent aussi réagir avec Ag ammoniacal
Comment controller pour le manque de spécificité?
pH neutre ou un peu acide
Pseudomélanines
Pigment jaune-brun
Pas apparenté chimiquement à mélanine, mais plutot aux lipofuchsine
Parfois dans chorion du gros intestin ou de l’appendice
Tout près de l’épithélium –> ds cytoplasme des macrophages
Peut aussi être près de la musculaire muqueuse
Pathologie: quantité élevée dans pseudomélanose du colon causée par Pseudomelanosis coli –> origine et signification inconnues
Lipofuchsines
Font partie des lipopigments –> subs pigmentées dérivées de précurseurs lipidiques
Produits par auto-oxydation et polymérisation de lipides ou lipoPR-
Quantité augmente avec âge –> pourquoi sont nommés pigments d’usure
Jaune-brun, réfringents, fluorescence brune en UV
Semblent être apparentés aux lysosomes
Où retrouve-t-on ces pigments?
cellules musculaires cardiaques, hépatocytes, cellules de la zone réticulée de la corticosurrénale et cellules nerveuses ganglionnaires
Dans hémochromatose
Foie contient lipofuchsine associée à hémosidérine
Propriétés des lipofuchsines
Pouvoir réducteur élevé –> rxn pos à la méthode de Schmorl
Forte basophilie
APS tjrs pos
Acido-alcoolo-résistance: faible ou nulle
Fluorescence brune
Fixateurs pour FM
Formaldéhyde 10% tamponné
Fixateurs base de chromate et de chlorure mercurique
Bouin
FM: réactifs
Besoin bcp moins de réactif que colo argent typiques (pas besoin de faire les aldéhydes, sensibilisation ou réduction avec formol)
- solution Ag Fontana (hydroxyde d’argent ammoniacal): imprégnation
- chlorure d’or 0.2%: virage (toner)
- thiosulfate de sodium 5%: réduction (fixage)
- éosine: contrecolo
FM: résultats
Noyau: rose
Mélanine: noir
Granules argentaffines: noir
FM: notes
Non spécifique pour mélanine et granulations argentaffines
ex: Pigments de formol (subs réductrice) peut être pos aussi
Solutions argent ammoniacal et alcaline peuvent être explosives si entreposées pendant plusieurs jours
Schmorls: utilité
Mise en évidence des substances réductrices présentes dans le tissu (mélanine et granulations argentaffines)
Subs réductrices = capable de Fe3+ –> Fe2+ (capable de réduire argent aussi)
2 structures organiques qui possèdent cette propriété: mélanine et cellules endocrines
Cellules endocrines
Associées à l’intestin et au système respiratoire
Dans tube digestif: épithélium de revetement contient cellules endocrines (AKA cellules entéro-endocrines) –> prédominent dans estomac et intestin grele, mais bcp d’autres endroits
Sont petites
Difficile ID avec H&E –> pourquoi on utilise techniques argentiques
*Méthodes immunohistochimiques démontrent qu’elles sont plus nombreuses qu’on pensait et on remplacées méthodes argentiques
Schmorl: principe
Basée sur capacité du pigment de mélanine de réduire mélange de chlorure ferrique + ferricyanure de K avec production de ferricyanure ferreux (exactement comme Bleu Turnbull)
Mécanisme: rxn histochimique
Schmorl: réactifs
Comme Bleu Turnbull
Schmorl: résultats
Noyau: rose
Mélanine: bleu
Granules argentaffines: bleu
Schmorl: notes
Temps rxn dépend du tissu
Mélanine réduit plus rapidement que lipofuchsine par exemple
Méthénamine d’argent de Gomori (MAG)
Démonstration des urates dans les tissus
Augmentation:
1. Dérangement dans le métabolisme de ac. urique (goutte) provoque dépot cristaux d’urates surtout dans jointures
2. Destruction cellulaire anormalement élevée –> augmentation production urates supérieure à la capacité d’élimination des reins –> dépots d’urates dans les tubules rénaux
MAG: réactifs
- méthénamine d’argent + borax 5%: imprégnation
- thiosulfate de sodium 2%: réduction (fixage)
- vert lumière: contrecolo
MAG: mécanisme
Imprégnation métallique
Plus d’info dans cahier de lab
MAG: résultats
Urates: noir
Fond: vert
MAG: notes
Calcium peut aussi être démontré par cette méthode si dépots sont gros assez pour supporter imprégnation
Fouchet
Démonstration de la bilirubine dans les tissus
Pigments biliaires
Biliverdine
Bili libre
Bili conjuguée
Hématoidine
Comment peut-on connaitre ID des pigments biliaires présents?
Détermine par organe d’où celui-ci provient
ex: Excès de pigment biliaire dans foie après obstruction canaux biliaires, déficience dans le métab. biliverdine-bilirubine ou après mort ou dégénérescnece des hépatocytes –> mélange de biliverdine, bili libre, bili conjuguée
Pigments biliaires dans hépatocytes et canalicules biliaires
Peut penser à une stase biliaire causée par calculs ou obstruction attribuable à un cancer de la tête du pancréas
Bilirubine dans hépatocytes ressemble lipofuchsine
Pigments biliaires dans vésicule biliare
Pas les mêmes caractéristiques que ceux dans le foie
Fouchet: réactifs
- Réactif Fouchet (chlorure ferrique 10% + ac. trichloroacétique + eau): oxydation de la bilirubine en biliverdine
- Solution Van Gieson: contrecolo
Fouchet: mécanisme
Oxydation de la bilirubine en biliverdine par réactif Fouchet
Biliverdine –> pigment vert
Fouchet: résultats
Bile ou bilirubine: vert émeraude - vert olive
Fond: jaune
Von Kossa: utilité
Démonstration de la présence de calcium
Accumulations anormales de calcium dans fibres élastiques en dégénérescence et dans lésions caséeuses de la tuberculose
Von Kossa: principe
Coupe avec sels de calcium + solution avec cations (argent) –> argent prennent place du calcium et lient anion phosphate ou carbonate
Ensuite argent réduit à forme métallique –> révèle sites de calcification
Pas spécifique au calcium, mais plutot aux phosphates et carbonates tissulaires –> sont pas lié a much autre que calcium so peut en pratique dire spécifique au calcium
Rxn argyrophile cuz imprégnation métallique par argent + agent réducteur externe (lumière)
Von Kossa: réactifs
- Nitrate d’argent 5%: imprégnation métallique, réducteur = soleil, vérifier lames périodiquement et arrêter rxn quand sels de calcium sont de couleur brun-noir
- thiosulfate de sodium: enlève argent non réduit
- rouge neutre 1% ou autre: contrecolo
Von Kossa: résultats
Sels de calcium: noir
Fond: rouge
Von Kossa: notes
- Solution iode parfois utilisée dans premières étapes (chepas when ya parler about une solution d’iode but wtv) –> enleve pigment mercure, mais peut aussi enlever un peu de calcium
- Use formol tamponné –> pigments de formol réduisent argent
- lumière artificielle donne pigments brunâtres (not good)
- alizarine rouge: autre méthode pour calcium plus spécifique
Rhodamine: utilité
Démonstration du cuivre dans les tissus (surtout foie –> maladie de Wilson)
Rhodamine: réactifs
- solution de Rhodamine: mise en évidence du cuivre 18h à 37 oC
- Hématoxyline de Mayer: contrecolo
Rhodamine: mécanisme
Méthode démontre PR- sur laquelle le cuivre se fixe plutot que le cuivre lui-même
Rhodamine: résultats
Cuivre: rouge vif à rouge-jaune
Noyau: bleu pâle
Rhodamine: notes
Lame CQ –> foie foetal fixé < 24h: contient 3-4X plus de cuivre dans les hépatocytes
Pas trop contrecolo sinon masque cuivre
Bleu de toluidine: utilité
Démonstration des mastocytes dans les tissus
Bleu de toluidine: réactifs
- Solution de bleu de toluidine: colo tous les éléments du tissu
Bleu de toluidine: mécanisme
Métachromasie
Bleu de toluidine: résultats
Granulations des mastocytes: violet foncé
Fond: bleu
Bleu de toluidine: notes
Habituellement éviter alcool pour déshydratation dans colo métachromatiques, mais ici métachromasie est stable et ne sera pas perdue
