Expériences Flashcards
Quel est le but du marquage d’une cellule au stade 8 cellules dans un embryon ?
Vérifier si chaque cellule peut contribuer à l’IMC et au TE → donc si elle est totipotente.
Que montre l’expérience de marquage au stade 8 cellules ?
Que chaque cellule peut donner IMC + TE → elles sont totipotentes.
Quelle conclusion peut-on tirer sur la différenciation après le stade 8 cellules ?
La différenciation dépend de la position (interne = IMC, externe = TE).
Que démontre l’expérience de clonage de Dolly ?
Que le noyau d’une cellule différenciée contient encore l’info nécessaire pour créer un organisme entier → preuve de reprogrammation possible.
Quelle technique a été utilisée pour créer Dolly ?
Transfert nucléaire d’une cellule somatique dans un ovocyte énucléé.
Quel est le but de la création de cellules iPS ?
Reprogrammer des cellules somatiques différenciées en cellules pluripotentes.
Quels sont les facteurs de transcription utilisés pour générer des iPS ?
Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc
Que démontre la création d’iPS ?
Que l’identité cellulaire peut être reprogrammée par des facteurs spécifiques → changement d’état différencié à pluripotent.
Quelle est la fonction de la β-galactosidase dans les expériences de traçage ?
Marquer toutes les cellules descendantes d’une cellule souche grâce à l’activation de la recombinaison Cre-Lox.
Quelle est la stratégie expérimentale pour prouver que les LGR5+ sont des cellules souches ?
Traçage génétique : souris LGR5-CreERT2 + gène rapporteur (ex. β-gal) → activation par tamoxifène → toutes les cellules filles deviennent bleues.
Que montre le marquage des LGR5+ ?
Ces cellules génèrent tous les types cellulaires de l’intestin → preuve qu’elles sont souches multipotentes.
Quel est le but de cultiver des LGR5+ en 3D ?
Vérifier si elles peuvent former un organoïde → donc s’auto-organiser et se différencier in vitro.
Quel est le résultat de la culture de LGR5+ seules ?
Formation d’un organoïde simple contenant des cryptes.
Que se passe-t-il si on ajoute des cellules de Paneth à la culture de LGR5+ ?
L’organoïde devient plus complexe → preuve que les cellules de Paneth agissent comme niche.
Que démontre la culture d’organoïdes LGR5+ ?
Que les LGR5+ sont suffisantes pour générer toutes les lignées épithéliales intestinales.
Quel est le but de l’expérience de greffe de cellules HSC dans une souris irradiée ?
Tester si une cellule unique peut reconstituer toutes les lignées sanguines.
Que montre la greffe de HSC dans une souris irradiée ?
Si toutes les lignées apparaissent → la cellule injectée est bien une cellule souche hématopoïétique.
Comment différencie-t-on les cellules greffées des cellules de la souris receveuse ?
Par des marqueurs de surface Ly5.1 / Ly5.2.
Quelle expérience montre l’effet de la niche sur les cellules germinales de C. elegans ?
Ablation de la cellule cap → perte du signal TGF-β → différenciation des cellules germinales.
Que montre une mutation du gène bam chez C. elegans ?
Les cellules ne se différencient jamais → elles restent souches indéfiniment.
Quelle est la conséquence de l’absence de signal TGF-β dans C. elegans ?
Activation de bam → différenciation.
Quel est le but de l’expérience avec la syncytine (ERVWE1) ?
Voir si la fusion de cellules induit un phénotype de sénescence.
Quelle est la méthode utilisée pour induire la fusion dans cette expérience ?
Surexpression du gène ERVWE1 → induit la fusion cellulaire → formation de syncytiums.
Quels marqueurs sont utilisés pour détecter la sénescence dans les syncytiums ?
SA-β-galactosidase, γH2AX, absence d’incorporation de BrdU.
