DNA recombinante Flashcards
Secuencias de DNA derivadas de más de una fuente
DNA recombinante
Endonucleasas que reconocen palindromos (secuencias que se leen igual de derecha-izquierda a izquierda-derecha)
Enzimas de restricción
Endonucleasas que degradan ADN extraño/foráneo. Es un mecanismo de defensa de las bacterias frente a la entrada de ADN foráneo.
Enzimas de restricción
Tipos de enzimas de restricción
- Endonucleasas
- Enzimas del sistema de modificación
Se puede degradar el ADN metalado?
No, es inmune
¿Qué hacen las enzimas del sistema de modificación?
Metilan adenina o citosina del ADN propio para que no sea degradado
¿Qué hacen las endonucleasas?
- Degradan el DNA extraño
- Reconocen una secuencia palindrómica
- Cortan el ADN (enlaces fosfodiéster)
- Se producen por bacterias
La primera letra de los acrónimos da…
El género de la bacteria
La segunda y tercera letra de los acrónimos dan…
Nombre de la especie
¿Cuántos tipos de enzimas de restricción hay?
4
TIPOS DE ENZIMA DE RESTRICCIÓN.
Reconoce secuencias de DNA y cortan aleatoriamente al inicio (río arriba) o al final (rio abajo). Cortan lejos del sitio de reconocimiento (secuencia Diana).
Tipo 1
TIPOS DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN.
Reconoce secuencias palindrómicas. El sitio de corte y de reconocimiento (secuencia Diana) es el mismo.
Tipo 2
TIPOS DE ENZIMA DE RESTRICCIÓN.
Tienen dos secuencias de reconocimiento. Cortan asimétricamente lejos (rio abajo) de la secuencia de reconocimiento.
Tipo 3
TIPOS DE ENZIMA DE RESTRICCIÓN.
Reconoce DNA metilado.
Tipo 4
Cortes en diferente posición (3 a 5 nt de diferencia)
Cohesivos
Cortes simétricos en ambas cadenas. No dejan pares libres.
Romos
El DNA recombinante y el DNA de interés se trata con una enzima de restricción que …
Genera cortes cohesivos.
Se deben cortar con la misma enzima de restricción.
Moléculas de dsDNA con capacidad de albergar y transportar un fragmento de DNA (exógeno) al interior de una célula huésped.
Vector
Molécula de DNA circular de doble cadena que puede albergar otra molécula de DNA
Plásmido
Vector.
Moléculas de DNA que transportan, almacenan y replican fragmentos de ADN en una célula huésped. Obtiene grandes cantidades de DNA. Plásmidos, bacteriófagos, fagémidos, cósmidos.
Vectores de clonación
Vector.
Busca producir un transcrito o proteínas. Plásmidos o bacteriófagos.
Vectores de Expresión.
Características de los vectores de clonación
- Punto ORI: origen de replicación
- Sitio de clonación múltiple: secuencias palindrómicas reconocidas por las enzimas de restricción para insertar DNA complementario
- Marcadores de selección: genes como resistencia el antibiótico, para saber que células se quedaron o no con el vector/plásmido
Características de los vectores de expresión
- Origen de replicación, sitio múltiple de clonación y marcadores de selección
- Promotor: caja TATA
- Secuencia de Poli A
- IRES: sitio de entrada al ribosoma
dsDNA circular, están separados del DNA cromosómico y es encontrado en bacterias y levaduras. Pueden replicarse de forma independiente dentro de la célula.
Plásmidos