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Biología Molecular > DNA recombinante > Flashcards

DNA recombinante Flashcards

1
Q

Secuencias de DNA derivadas de más de una fuente

A

DNA recombinante

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2
Q

Endonucleasas que reconocen palindromos (secuencias que se leen igual de derecha-izquierda a izquierda-derecha)

A

Enzimas de restricción

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3
Q

Endonucleasas que degradan ADN extraño/foráneo. Es un mecanismo de defensa de las bacterias frente a la entrada de ADN foráneo.

A

Enzimas de restricción

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4
Q

Tipos de enzimas de restricción

A
  1. Endonucleasas
  2. Enzimas del sistema de modificación
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5
Q

Se puede degradar el ADN metalado?

A

No, es inmune

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6
Q

¿Qué hacen las enzimas del sistema de modificación?

A

Metilan adenina o citosina del ADN propio para que no sea degradado

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7
Q

¿Qué hacen las endonucleasas?

A
  • Degradan el DNA extraño
  • Reconocen una secuencia palindrómica
  • Cortan el ADN (enlaces fosfodiéster)
  • Se producen por bacterias
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8
Q

La primera letra de los acrónimos da…

A

El género de la bacteria

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9
Q

La segunda y tercera letra de los acrónimos dan…

A

Nombre de la especie

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10
Q

¿Cuántos tipos de enzimas de restricción hay?

A

4

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11
Q

TIPOS DE ENZIMA DE RESTRICCIÓN.
Reconoce secuencias de DNA y cortan aleatoriamente al inicio (río arriba) o al final (rio abajo). Cortan lejos del sitio de reconocimiento (secuencia Diana).

A

Tipo 1

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12
Q

TIPOS DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN.
Reconoce secuencias palindrómicas. El sitio de corte y de reconocimiento (secuencia Diana) es el mismo.

A

Tipo 2

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13
Q

TIPOS DE ENZIMA DE RESTRICCIÓN.
Tienen dos secuencias de reconocimiento. Cortan asimétricamente lejos (rio abajo) de la secuencia de reconocimiento.

A

Tipo 3

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14
Q

TIPOS DE ENZIMA DE RESTRICCIÓN.
Reconoce DNA metilado.

A

Tipo 4

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15
Q

Cortes en diferente posición (3 a 5 nt de diferencia)

A

Cohesivos

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16
Q

Cortes simétricos en ambas cadenas. No dejan pares libres.

A

Romos

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17
Q

El DNA recombinante y el DNA de interés se trata con una enzima de restricción que …

A

Genera cortes cohesivos.
Se deben cortar con la misma enzima de restricción.

18
Q

Moléculas de dsDNA con capacidad de albergar y transportar un fragmento de DNA (exógeno) al interior de una célula huésped.

A

Vector

19
Q

Molécula de DNA circular de doble cadena que puede albergar otra molécula de DNA

A

Plásmido

20
Q

Vector.
Moléculas de DNA que transportan, almacenan y replican fragmentos de ADN en una célula huésped. Obtiene grandes cantidades de DNA. Plásmidos, bacteriófagos, fagémidos, cósmidos.

A

Vectores de clonación

21
Q

Vector.
Busca producir un transcrito o proteínas. Plásmidos o bacteriófagos.

A

Vectores de Expresión.

22
Q

Características de los vectores de clonación

A
  • Punto ORI: origen de replicación
  • Sitio de clonación múltiple: secuencias palindrómicas reconocidas por las enzimas de restricción para insertar DNA complementario
  • Marcadores de selección: genes como resistencia el antibiótico, para saber que células se quedaron o no con el vector/plásmido
23
Q

Características de los vectores de expresión

A
  • Origen de replicación, sitio múltiple de clonación y marcadores de selección
  • Promotor: caja TATA
  • Secuencia de Poli A
  • IRES: sitio de entrada al ribosoma
24
Q

dsDNA circular, están separados del DNA cromosómico y es encontrado en bacterias y levaduras. Pueden replicarse de forma independiente dentro de la célula.

A

Plásmidos

25
Q

Características de los Plásmidos

A
  • Origen de replicación
  • Gen de resistencia antibiótica
  • Región de DNA exógeno
26
Q

Virus que come bacterias. Se modifica genéticamente (elimina genes que no se requieren para la replicación y empaquetamiento)

A

Bacteriófagos

27
Q

Vector híbrido mezcla entre fago y plásmido. Se combina el DNA de un plásmido (gen de resistencia a antibióticos y sitio ORI) con el de un bacteriófago (Cos empaquetamiento)

A

Cósmidos

28
Q

Plásmido al que se le incorpora el origen de replicación de un fago. No tiene sitios cos.

A

Fagémidos

29
Q

BAC (bacterias) y YAC (levaduras)

A

Cromosomas artificiales

30
Q

Es el proceso mediante el cual una célula huésped incorpora material genético de manera extracromosómica (como un plásmido) y lo utiliza para replicación, transcripción y traducción.

A

Transformación celular

31
Q

¿Qué es el ADN recombinante?

A

Es ADN formado al combinar fragmentos de ADN de diferentes fuentes, como un gen de interés insertado en un vector.

32
Q

Primer paso de clonación molecular

A
  1. Preparación del inserto: Se corta el fragmento de ADN de interés con enzimas de restricción para que tenga extremos compatibles con el vector.
33
Q

Segundo paso de clonación molecular

A
  1. Preparación del vector
    - Las enzimas de restricción cortan el vector en los mismos sitios que el inserto.
    - Desfosforilación: Se eliminan los grupos fosfato 5’ para evitar el cierre del vector sobre sí mismo.
    - Purificación del vector: Se limpia el plásmido antes de usarlo.
34
Q

Tercer paso de clonación molecular

A
  1. Ligación:
    La enzima ligasa une el inserto y el vector, creando ADN recombinante
35
Q

Cuarto paso de clonación molecular

A

Preparación de células competentes:
Se aumenta la permeabilidad de la membrana celular con: Glicerol 10% (protección) y CaCl₂ (neutraliza la carga negativa del ADN)

36
Q

Quinto paso de clonación molecular

A
  1. Transformación celular:
    Las células adquieren el ADN recombinante o gen exógeno (vector + inserto), incorporándolo de manera extracromosómica y adquiriendo un nuevo fenotipo (ej. resistencia a antibióticos).
37
Q

Sexto paso de clonación molecular

A
  1. Identificación:
    Se siembran las bacterias en un medio selectivo con:
    - Antibiótico: Las células con el vector sobreviven.
    - Marcadores: Ejemplo, GFP (brillo bajo luz UV) para verificar el éxito de la clonación.
38
Q

Enzimas modificadas genéticamente que reconocen secuencias especificas en un dsDNA.

A

Nucleasas Programables

39
Q

¿Cuáles son los mono meros de las nucleasas programables?

A

Son dos:
1. Un dominio de reconocimiento de la secuencia de DNA
2. Una nucleasa que corta la molécula de DNA en el sitio deseado

40
Q

Nucleasa programables.
Mecanismos de acción después del corte de la nucleasa:

A

Disrupción: La reparación del ADN cortado puede generar errores que interrumpen la función del gen (útil para desactivar genes).
Inserción: Se puede insertar un fragmento de ADN nuevo en el sitio del corte (útil para agregar genes).
Deleción: Se pueden eliminar fragmentos de ADN entre dos cortes.

41
Q

¿Para qué se usan las nucleasas programables?

A

Corregir y editar defectos genéticos

Biología Molecular (16 decks)

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