Análisis y PCR

Question 1

La elección del método de extracción va a depender de:

Answer 1

• Tipo de Ac nucleico (ssDNA, dsDNA, RNA, mRNA y rRNA)
• Organismo de origen (procariota, planta, mamíferos y virus)
• Fuente (cultivo celular, tejido, sangre, suero)
• Ténica

Question 2

Fuente del ácido nucleico

Answer 2

Sangre, suero, plasma, biopsia, orina, heces, LCR, líquido sinovial, líquido amniótico, esputi, semen, raspado bucal y folículo capilar

Question 3

Extracción de DNA por fenol-Cloroformo

Question 4

Técnica de extracción de DNA para medir la cantidad de DNA por medio del paso de un haz de luz en proporción inversa a la cantidad de moléculas que contiene.

Answer 4

Espectrofotometría

Question 5

Componentes de una PCR

Answer 5

Secuencia de DNA
Enzima DNA polimerasa
Desoxirribonucleotidos (dNTP)
Primers

Question 6

Enzima que polimeriza una cadena de DNA tomando como molde una preexistente

Answer 6

DNA polimerasa

Question 7

Bacteria que no se desnaturaliza debido a la temperatura

Answer 7

Thermus aquaticus (Taq)

Question 8

Cofactor de la taq polimerasa

Answer 8

Cloruro de Magnesio

Question 9

Características de los iniciadores de la PCR

Answer 9

• Se usan para reconocer secuencias blanco en el DNA molde.
• Proporcionan un extremo 3’
• Tienen un alto contenido de GC.

Question 10

Pasos de PCR

Answer 10

• Desnaturalización: separa cadenas de DNA (95°)
• Hibridación: debido a la temperatura de alineamiento (Tm) se alinean los primers
• Extensión: la taq polimerasa agrega dNTP’s complementarios para crear cadenas complementarias

Question 11

Temperatura de los pasos de la PCR

Answer 11

Desnaturalización: 95° (20 a 30 segundos)
Hibridación: 50° a 60°
Extensión 72°

Question 12

¿Qué se realiza al final de la PCR?

Answer 12

Gel de electroforesis

Question 13

Técnica mediante la cual se separan las biomoleculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.

Answer 13

Electroforesis

Question 14

Elementos necesarios para la electroforesis

Answer 14

1. Cámara de electroforesis
2. Gel de agarosa
3. Marcador de peso molecular
4. Transiluminador violeta

Question 15

¿Para que sirve la cámara de electroforesis?

Answer 15

Genera un campo eléctrico alrededor del gel. Tiene un polo negativo y uno positivo que se conectan a una fuente de energía.

Question 16

¿Para que sirve el gel de agarosa?

Answer 16

Polisacárido extraído de algas marinas que separa fragmentos de DNA

Question 17

¿De qué depende la concentración de agarosa?

Answer 17

Se escoge según el tamaño del acido nucleico que se vaya a analizar

Question 18

Mezcla de moléculas de DNA o proteínas que permiten determinar por comparación el tamaño de las moléculas contenidos en las muestras sometidas a electroforesis

Answer 18

Marcador de peso molecular

Question 19

Principales tipos de PCR

Answer 19

1. PCR punto final
2. PCR Múltiple
3. PCR-RFLP
4. PCR transcriptasa reversa
5. PCR tiempo real

Question 20

PCR que amplifica un segmento de ADN usando dos partidores y lo detecta por un gel de agarosa.
Detectar cualitativamente un segmento de ADN

Answer 20

PCR punto final

Question 21

PCR que amplifica 2 o más segmentos de ADN usando varios partidores en una sola reacción de amplificación.
Detección cualitativa de varios segmentos de ADN en una sola reacción de PCR.

Answer 21

PCR múltiple

Question 22

PCR que usa enzimas de restricción. Detecta polimorfismos genéticos (SNP’s)

Answer 22

PCR-RFLP

Question 23

PCR que sintetiza una cadena de AND a partir de ARN mediante transcripción reversa, seguido de una PCR.
Para expresión de genes o detección de virus ARN.

Answer 23

PCR transcriptasa reversa

Question 24

PCR estándar donde se usan tinciones o sondas con fluoróforos para detectar fragmentos amplificados.
Para cuantificación de ADN en la muestra o expresión de genes.

Answer 24

PCR tiempo real

Question 25

Sonda (para el gen que buscas) fluorescentes de oligonucleótidos con un reportero fluorescente

Answer 25

Sistema reportero de fluorescencia específicos

Question 26

Moléculas intercalentes que tienen afinidad por el dsDNA y generan una señal fluorescente (el colorante solo detecta y se une a doble cadenas sea la que estás buscando o no)

Answer 26

Sistema de fluorescencia no específicos

Question 27

Características de la PCR tiempo real

Answer 27

• Detecta los productos amplificados en cada ciclo de la reacción
• Cuantifica la cantidad de DNA en la muestra
• Método más sensible para detectar y cuantificar los ácidos nucleicos