De Logu Terapia genica Flashcards
primo protocollo di terapia genica
per ADA-SCID nel 1990. Sperimentazione di marcatura genetica ex vivo di cellule prelevate da pazienti, TILs tumor infiltrating lymphocytes, da melanoma terminale. cellule venivano trasdotte ex vivo con vettore retrovirale che contiene anche gene di resistenza neoR alla neomicina per poter essere selezionate. in questo modo le cellule reintrodotte potevano essere seguite nel paziente.
strategie di terapia genica (4 tipi)
compensazione genica (inserimento di copie funzionali del gene assente o difettivo), correzione genica, un’attivazione genica, acquisizione genica.
esempi di terapia genica ex vivo
leucodistrofia metacromatica MLD, beta talassemia trasfusione dipendente, ADA SCID, X-SCID, epidermolisi bollosa, terapia genica ex vivo nei tumori.
leucodistrofia metacromatica terapia genica
esempio di terapia genica ex vivo. malattia ereditaria rara, disturbo neurodegenerativo insorge in età pediatrica, causa deficit enzima arilsolfatasi (ARSA) che porta a accumulo di solfatidi nel cervello e altri organi. terapia autologo ex vivo con OTL-200: cell staminali ematopoietiche autologhe trasdotte con vettori lentivirali, entrano nell’SNC e producono l’enzima. l’attività dell’enzima si mantiene alta nel tempo e sono mantenute le prestazioni cognitive senza peggioramenti
beta talassemia trasfusione dipendente terapia genica
esempio di terapia genica ex vivo. malattia genetica grave causata da mutazioni della beta globina, riduzione o assenza completa, necessarie trasfusioni croniche. terapia una volta sola, si isolano cellule staminali ematopoietiche isolate per aferesi nel paziente, ingegnerizzate con vettori lentivirali che portano gene della beta globina. paziente con chemioterapia per preparare il midollo.
ADA-SCID terapia genica
esempio di terapia genica ex vivo. deficit adenosina deaminasi che porta ad accumulo di metaboliti purinici a livelli tossici con danni linfocitari e immunodeficienza cronica. trattamento di prima scelta è trapianto di midollo. altrimenti con terapia genica è stato inserito cDNA di ADA in linfo autologhi che poi venivano reinfusi. successivamente, cellule staminali ematopoietiche purificate con CD34 e trasdotte con gamma retrovirus con cDNA di ADA. pazienti soggetti a chemioterapia-
X-SCID terapia genica
esempio di terapia genica ex vivo. mutazioni del gene IL2R, provoca blocco differenziamento dei linfo T e NK. cell ematopoietiche trasdotte con gamma retrovirus con gene IL-2R funzionante, senza condizionamento chemioterapico. dopo 2-4 anni dalla terapia sviluppo di leucemie: il vettore si era inserito in prossimità del protocongene LMO2 delle cell staminali trasdotte, trial interrotti
epidermolisi bollosa terapia genica
esempio di terapia genica ex vivo. distacco dell’epidermide, ulcerazioni continue, infezioni e carcinomi. trapianto di pelle. paziente con mutazione del gene LAMB3 trattato con terapia genica: cell staminali isolate da biopsia cutanea, trasdotte con vettore retrovirale derivante dalla leucemia murina (MLV-RV) che veicola LAMB3 normale. cell purificate per generare lembi di pelle che poi sono stati trapiantati.
terapia genica ex vivo nei tumori
esempio CART. oppure per tumori del sangue le cellule T di donatori compatibili sono ingegnerizzate per esprimere gene suicida della timidità chinasi del virus herpes simplex. questo enzima monofosforila il farmaco ganciclovir, che poi viene bi e tri fosforilato da chinasi intracellulari e diventa farmacologicamente attivo, funge da analogo della guanosina e blocca la duplicazione. questa infusione di linfo ingegnerizzati da donatore serve sia a mantenere gli effetti immunoprotettivi ed antileucemici del linfo T, sia a abrogare la possibile reazione di questi linfo T contro i tessuti sani con somministrazione di ganciclovir.
esempi di terapia genica in vivo
deficit di lipoproteina lipasi glybera, emofilia B, amaurosi congenita di Leber di tipo 2 con luxturna, SMA o atrofia muscolare spinale.
deficit di lipoptoteina lipasi terapia genica
terapia genica in vivo. condizione grave dolorosa e mortale, principalmente i tessuti grassi non metabolizzati si accumulano nel pancreas. iniezioni intramuscolo di vettore AAV1 contenente gene per LPL umana. glybera è il nome del farmaco, ritirato dal mercato per il costo di 1 milione di euro troppo elevato
emofilia B terapia genica
terapia genica in vivo. difetto fattore 8. somministrazione di AAV8 con gene per fattore 8. singola infusione ripristina l’espressione.
amaurosi congenita di leder di tipo 2 terapia genica
terapia genica in vivo. causa di cecità infantile ereditaria causata da 20 geni, il 10% ha mutazioni in RPE65. farmaco LUXTURNA somministrato per iniezione nel sottoretinico, è un AAV2 con gene RPE65 funzionante.
SMA atrofia muscolare spinale terapia genica
malattia degenerativa con perdita del motoneurone. nei pazienti, il gene di sopravvivenza del motoneurone SMN1 è mutato o deleto in omozigoti. i pazienti hanno spesso il gene paralogo SMN2 che differisce di 5 nt da SMN1, il problema è che si genera un sito di silenziatore di splicing che porta a exon skipping dell’estone 7 e formazione di una proteina non funzionale nel 90% dei casi, mentre il 10% funzionale non è sufficiente per sostenere la sopravvivenza dei motoneuroni spinali nel SNC. terapia è un AAV9 che attraversa la BBB e ha alta capacità di traduzione neurone. trattamento precoce porta a conservazione recupero capacità motorie, respiratorie, orali
caratteristiche che dovrebbe avere un metodo di trasferimento
non essere immunogenico, facile produzione anche su larga scala, selettivo per tipi cellulari, in grado di veicolare geni di grande dimensione, favorire un’espressione duratura del gene, in grado di veicolare il gene in cell quiescenti o in divisione
