De Logu Proteine come farmaci

Question 1

tipi di ingegnerizzazione delle proteine

Answer 1

ingegnerizzazione della struttura primaria, ingegnerizzazione nelle modifiche post tradizionali, proteine scaffold, proteine di fusione, ab monoclonali e derivati anticorpi

Question 2

ingegnerizzazione della struttura primaria con esempio

Answer 2

mutazione puntiforme e mutazione per delezione. esempio insulina modificata per evitare creazione di aggregati. le modifiche favoriscono repulsione dei monomeri, aumento PI, legame con albumina plasmatica

Question 3

dove vengono aggiunti carboidrati della glicosilazione delle proteine

Answer 3

azoto dell’asparagina o ossigeno serena e treonina, utile per variare emivita e stabilità in circolo

Question 4

proteine scaffold cosa sono

Answer 4

versioni riarrangiate di proteine naturali con struttura di monomeri di dimensione limitata (200 aa circa) con un dominio con conformazione organizzata e stabile. selezionati con phage display. possono essere proteine non ab, oppure ab a singolo dominio variabile (nanobodies) o BITE

Question 5

come possono essere le proteine di fusione in terapia (due tipi)

Answer 5

per targeted delivery (con targeting passivo, attivo, fisico) o con dominio Fc esempi etanercept e abatacept. inoltre possono essere a base anticorpale o a base peptidica.

Question 6

etanercept

Answer 6

proteina di fusione con dominio fc per artrite reumatoide. fusione di fc di una igG1 umana e dominio extracellulare del recettore di tipo 2 per il TNFalfa. utilizzato per artrite reumatoide.

Question 7

abatacept

Answer 7

uniti due geni che codificano per le due copie del dominio extracellulare del CTLA4 umano insieme al gene della porzione Fc di una IgG1 umana. blocca il segnale di costimolo dato da CTLA4 e CD80/CD86 sulle cellule APC, in modo che anche se c’è riconoscimento tra TCR e MHC non si attivano i linfo T autoreattori. utilizzato come immunosoppressore

Question 8

anticorpo monoclonale utilizzato per emicranie

Answer 8

ab anti CGRP calcitonin gene related peptide, somministrato sottocute 1 volta al mese, lunga emivita.

Question 9

FcRn

Answer 9

recettore neonatale per Fc che lega Fc dell’Ab, lo internalizza dalla membrana apicale con pinocitosi, nell’endosoma si riforma il legame Fc-recettore tramite ph acido, l’anticorpo fuoriesce e migra nella membrana basolaterale a contatto con il ph basico del fluido extracellulare. l’Ab si dissocia e diffonde nell’ambiente extracellulare. questo recettore è saturabile, l’emivita del farmaco si riduce all’aumentare della concentrazione plasmatica

Question 10

linker nelle proteine

Answer 10

sequenze di 4-21 aa che mantengono spaziatura e conformazione tra due domini proteici. possono essere clivabili, es tramite l’enzima furina

Question 11

assay end point

Answer 11

saggi per valutare aumento di AMP ciclico in coltura. cAMP rilevato con ELISA o RIA. non è possibile studiare la cinetica di aumento del cAMP in questo modo.

Question 12

sensore EPAC-S

Answer 12

utilizzato nei cinetics per valutare la cinetica di aumento di cAMP dopo attivazione GPCR, è un biosensore formato da due polipeptidi marcati con due proteine fluorescenti e connesse da un linker. biosensori vengono espressi tramite trasfezione cellulare con plasmide policistronico

Question 13

FRET e BRET

Answer 13

fluorescence resonance energy transfer, bioluminescence resonance energy transfer. nel primo caso ci sono due fluorocromi, il primo eccitato dallo sperimentatore, il secondo eccitato dal primo. nella BRET l’energia viene trasferita per luminescenza, il primo elemento è la luciferasi che metabolizza il substrato che produce energia a una lunghezza d’onda di 475 nanometri. questa lunghezza d’onda eccita un secondo fluorocromo

Question 14

quattro classi principali di proteine terapeutiche

Answer 14

con attività enzimatica o regolatori (sostituire una prof mancante o anomala, potenziare un processo esistente, indurre una nuova funzione), prot terapeutiche contenenti domini di legame (regolare attività fisiopatologiche o rilasciare principio attivo in un distretto specifico), vaccini a proteina, proteine per diagnostica

Question 15

tipi di metabolismo per le proteine terapeutiche

Answer 15

proteolisi, met epatico per piccoli peptidi come bortezomib o per peptidi assunti per via orale es ciclosporina, met renale per peptidi resistenti alle peptidi come exenatide

Question 16

strategie per migliorare le caratteristiche farmacocinetiche delle proteine terapeutiche

Answer 16

strategie per la somministrazione parenterale come sistemi di rilascio controllato, strategie formulate per aumentare delivery per via orale, modifiche chimiche per derivatizzazione/coniugazione o peptidomimetici

Question 17

PEGilazione

Answer 17

aggiunta di polimero idrofilo polare con gruppi reattivi non tossi per aumentare emivita e formare biobetter. ridotta filtrazione glomerulare, aumentata solubilità in acqua, aumento della resistenza metabolica dalla degradazione, ridotta immunogenicità. aumento del volume apparente di distribuzione. prima generazione PEG in modo casuale e seconda generazione PEG posizione definita come pegvisomant.

Question 18

pegvisomant

Answer 18

proteina di 191 aa legata con molti polimeri di PEG (seconda generazione, posizione non casuale) progettata per bloccare il recettore dell’ormone della crescita

Question 19

modificazioni chimiche di farmaci peptidici

Answer 19

derivatizzazione/coniugazione (coniugazione con cell penetrating peptides, pegilazione, coniugazione con frammento Fc di una IgG, coniugazione con albumina) o peptidomimetici

Question 20

strategie chimiche adottate per creare peptidomimetici

Answer 20

restrizioni conformazioni, modificazioni della catena laterale degli aa, modificazioni del backbone e in particolare del legame ammidico. i peptidomimetici hanno maggiori proprietà farmacocinetiche rispetto ai peptidi naturali.

Question 21

analoghi sintetici dell’ormone di rilascio delle gonadotropine

Answer 21

essendo un superagonista con maggiore attività e maggiore emivita plasmatica rispetto alla molecola naturale, questo farmaco determina desensibilizzazione. quindi blocco di produzione delle gonadotropine da parte dell’ipofisi e blocco di ovogenesi e spermatogenesi e di produzione di estrogeni e testosterone. utilizzato nel cancro alla prostata e alla mammella. è peptidomimetico perché presenta in posizione 6 aa idrofobici e a volte anche modifiche all’estremità C terminale che lo rendono superagonista.

Question 22

esempi di peptidomimetici studiati

Answer 22

analoghi sintetici dell’ormone di rilascio delle gonadotropine, analoghi sintetici della somatostatina, inibitori del proteasoma

Question 23

analoghi sintetici della somatostatina

Answer 23

peptidomimetico. funzione terapeutica in tumori neuroendocrini dove si ha iperespressione del recettore hSSTR2 della somatostatina. inibizione della secrezione di insulina, glucagone, gastrina, acidi gastrici, pepsina e inibizione della proliferazione. esempi Sandostatin, somatuline e sanvar. utilizzato anche per il trattamento palliativo dei tumori e nella teranostica

Question 24

Sandostatin, somatuline e sanvar

Answer 24

analoghi sintetici della somatostatina (peptidomimetici)

Question 25

pentetreotide

Answer 25

analogo della somatostatina radiomarcato (peptidomimetico) utilizzato nella teranostica, cioè un metodo diagnostico accoppiato a un trattamento terapeutico. il farmaco è utilizzato come tracciante perché lega i recettori overespressi e permette di identificare il tumore. la rilevazione è fatta dopo 4 e 24 ore della somministrazione con scintigrafia

Question 26

come agiscono gli inibitori del proteasoma.

Answer 26

peptidomimetici che legano il residuo di treonina interno al proteasoma che media l’attacco nucleofilo necessario per la proteolisi. bloccando il proteasoma si accumulano proteine non foldate, stress cellulare e del RE, apoptosi. Bortezomib, carfilzomib e ixazomib per mieloma multiplo

Question 27

bortezomib, carfilzomib, ixazomib

Answer 27

peptidomimetici inibitori del proteasoma per mieloma multiplo